槐树(Sophora japonica L.)种质资源现状及研究进展

对槐树种质资源在我国的分布和现状,以及山东、山西、河北和河南等地的资源调查收集情况进行了综述;从表型、细胞和生理生化、分子水平3个方面,对槐树种质资源评价的研究进展进行了归纳;以选择育种、人工杂交授粉和现代生物技术育种为例,对种质资源创新利用情况进行了总结,并对工作中存在的问题和发展前景进行了分析。

Genetic Diversity of Antagonistic Endophytic Bacteria Isolated from Sophora alopecuroide

[ Objective ] The paper was to study and analyze the genetic diversity of 48 endophytic bacteria isolated from Sophora alopecuroide with strong antagonis- tic effect against Fusarium oxysporum and Verticillium dahliae, and carry out sequence measurement and phylogenetic analysis on 10 representative strains. [ Meth- od] Using total DNA ERIC-PCR and 16S rRNA sequencing analysis method, a total of 48 endophytic bacteria were carried out genetic diversity and phylogenetic analysis. [Result] ERIC-PCR fingerprint map showed that 48 endophytic bacteria were divided into 6 ERIC groups and 2 strains with independent groups at Wat- son distance of 0.31. Representative strains were selected from each group to determine 16S rRNA gene for phylogenetic analysis, and the results showed that these strains belonged to Bacillus atrophaeus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus and Serratia marcescens, respectively. [ Conclu- sion ] The genetic diversity of 48 strains of bacteria was obvious. Determination of 48 strains of bacteria on diversity and phylogenetic status could lay foundation for study on mechanism of F. oxysporum and V. dahliae, which could also provide new strain sources for biological control of diseases in cotton production.

苦豆子(Sophora alopecuroides)内生颉颃细菌的筛选及鉴定

用w(次氯酸钠)=3%采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生细菌进行分离.结果表明:消毒3min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生细菌的数量,根部比茎、叶部多.从20株苦豆子内生细菌中筛选出对黄瓜枯萎病、番茄枯萎病和茄子枯萎病菌有较强颉颃活性的菌株12株.经初步鉴定,5菌株为芽孢杆菌属,3菌株为链球菌属,2菌株为肠杆菌属,假单胞菌属和奈瑟氏球菌属各1株.

内蒙古苦豆子Sophoraalopecuroides生物碱成分及分离研究

用薄层扫描法测定了内蒙古苦豆子中主要生物碱的含量，真空液相层析法分离总碱得八种结晶。其中七种已知生物碱。通过熔点、薄层定性、红外、核磁等理化分析比较确认为槐果碱、苦参碱、槐定碱、槐胺碱、氧化苦参碱、金雀花碱和Ｎ－甲基金雀花碱。晶（１）经ＩＲ，￣１ＨＮＭＲ及ＭＳ谱表征，初步认为是槐定碱的Ｎ－氧化物，是首次从国产苦豆子植物分离得到．

Research progress on chemical constituents in Sophora alopecuroides L.and their pharmacological activities

Sophora alopecuroides L.,a perennial plant belonging to Leguminosae family,is used as medicinal materials to treat a variety of skin diseases.Its chemical components are complex and diverse,mainly including alkaloids and flavonoids.Modern pharmacological studies have found that the isolated compounds from S.alopecuroides have a variety of pharmacological activities.In particular,alkaloids represented by matrine,aloperine and oxymatrine have significant anti-inflammatory,anti-viral,anti-tumor,anti-bacterial and immunomodulatory activities.This paper summarized the chemical constituents and pharmacological activities of S.alopecuroides,aiming to provide the basis for further research.

Primary Research on Protective Effect of Houttuynia cordata Flavonoid and Sophora japonica L. Polysaccharide as Anti-UV Sun-screening Supplement

Houttuynia cordata flavonoid and Sophora japonica L. polysaccharide were investigated to develop anti-UV sun-screening agent through UV wavelength scanning spectrum, antioxidant ability and cell viability after UVB irradiation. The results showed that the extracts had strong UVA and UVB absorption ability and hydroxyl free radical scavenging ability. The S. japonica L. polysaccharide showed strong anti-UVB irradiation ability according to the cell viability experiment. It suggests that the H. cordata flavonoid and S. japonica L. polysaccharide could be combined as a candidate of anti-UV sun-screening supplement and compensate for the shortcomings of chemical sunscreens against UVA ray.

HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量

目的:建立同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱及槐果碱含量的 HPLC 测定法。方法:色谱柱为 Hypersil-NH_2柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈-磷酸缓冲液(1.0mL 磷酸加入到1000mL 水中,三乙胺调 pH 2.5)-无水乙醇(80:10:10),检测波长为220nm,柱温35℃,流速1.0mL·min^(-1),进样量20μL。结果:槐定碱、苦参碱、槐果碱分别在13.0～108.0mg·L^(-1)、11.4～95.2mg·L^(-1)和4.6～82.1mg·L^(-1)浓度范围内呈良好的线性关系,r 分别为0.9999,0.9996,0.9999。平均回收率(n=9)分别为99.41%,100.0%,100.6%。结论:可通过 HPLC 法同时测定苦豆子总碱中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材及含苦豆子的成药的质量控制。

苦豆子种子中生物碱的分离及lehmannine的结构确定

目的 研究苦豆子种子中生物碱的分离及槐果碱转移氢化制备苦参碱的研究。方法 利用离子交换、萃取和柱层 ,并结合转移氢化增大不同生物碱理化性质差异进行分离。结果 从苦豆子种子中分得 5种生物碱 ,其结构经元素分析、IR、MS、1 H NMR和 1 3CNMR光谱鉴定为氧化苦参碱、氧化槐定碱、苦参碱、槐定碱和 lehannine。结论 首次从苦豆子种子中分得 lehm

苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子IL-10表达的影响

目的观察苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎(UC)的外周血和结肠组织中IL-10表达的影响。方法将SD大鼠随机分成6组(正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)、苦豆子总碱高剂量组、中剂量组、低剂量组),采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法,制备结肠炎大鼠模型。第2天开始灌胃,在第3周杀鼠后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10在结肠黏膜组织和外周血清中的表达水平;同时分析结肠黏膜组织IL-10与DAI(疾病活动指数评分)/组织学损伤的相关性。结果(1)结肠部位和外周血清中IL-10的表达较对照组均显著降低,其中以结肠部位降低的幅度最大(P<0.01)。(2)苦豆子总碱高、中、低3个剂量组和SASP组都能显著性上调结肠部位和外周血清的IL-10的表达(P<0.05),且结肠部位的变化与外周血的相比差异明显。(3)结肠部位的DAI与结肠IL-10之间存在的负相关性(Pearsonr=-0.828,P<0.01),结肠部位的组织学损伤与结肠IL-10之间存在负相关性(Pearsonr=-0.819,P<0.01);所有检测为双侧,样本容量n=60。结论苦豆子总碱通过上调IL-10的表达减轻或改善实验性结肠炎大鼠的组织学损伤和症状。

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节。方法观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化。结果槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平。结论槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPS识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关。

HPLC法检测不同地区野生槐花花蕾中芦丁与槲皮素

目的建立HPLC法测定不同产地的野生槐花花蕾中芦丁与槲皮素的量。方法采用碱水提取法提取槐花花蕾中的芦丁和槲皮素。采用Agilient HC-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以甲醇-0.4%磷酸水溶液（52∶48）为流动相,体积流量为0.9 m L/min;检测波长为360 nm;柱温为25℃。结果芦丁在2.5-80μg/m L范围内,槲皮素在0.625-20μg/m L范围内线性关系良好;平均回收率分别为100.2%和99.1%;RSD分别为2.1%和1.1%（n=6）。来自10个产地的槐花花蕾中芦丁的量在21.48%-28.21%之间,槲皮素的量在1.15%-1.74%之间。结论不同产地槐花花蕾中芦丁和槲皮素存在一定差异,其中以河南新郑的槐花花蕾中芦丁与槲皮素含有量最高。

NaCl胁迫对苦豆子幼苗光合机构及生物量积累的影响

该研究通过测定盐生药用植物苦豆子幼苗气体交换、叶绿素荧光参数及生长指标,研究了中度(200mmol/L NaCl)和重度(400mmol/L NaCl)盐胁迫对其生长特性的影响,探讨盐生植物对盐化环境的生理响应机制。结果显示:(1)中度盐胁迫1d后,苦豆子幼苗光合速率(P_n)、气孔导度(G_s)、蒸腾速率(T_r)及胞间二氧化碳浓度(C_i)显著低于对照,随着胁迫时间延长,P_n下降显著,而气体交换参数降低不明显,C_i值甚至有上升趋势;重度盐胁迫处理1d后,苦豆子气体交换值出现了显著降低,随着胁迫时间延长,降低程度增大;中度盐胁迫导致苦豆子光合速率出现下降的原因是由气孔因素和非气孔因素共同作用的结果,而重度盐胁迫下,Pn的下降主要是非气孔因素引起的。(2)处理1d后,相对于对照组,中度和重度盐胁迫下的苦豆子幼苗最大光化学效率(F_v/F_m)、光化学猝灭系数(qP)、实际光化学效率(Φ_(PSⅡ))出现了不同程度的降低,而重度盐胁迫下降低更加显著;处理5d后,中度盐胁迫荧光参数变化不明显,但重度盐胁迫处理下降低显著。(3)随着胁迫程度的加重,幼苗含水量及生长指标(株高、根长、干重)降低幅度加大,以致严重抑制了植株生长。研究表明,盐生植物苦豆子对盐胁迫的耐受性也有一定限度,其在200mmol/L NaCl胁迫下植株光合作用受到轻微抑制,但能维持正常生长,而在400mmol/L NaCl胁迫下光合生理受到严重抑制,且随着胁迫时间的延长,受到伤害程度加重,甚至死亡。

RP-HPLC法测定槐米中槲皮素的含量

目的 建立 RP- HPL C法测定槐米中槲皮素的含量。方法 使用 Shim- pack CL C- ODS柱 (6 .0 m m× 15 0mm,5 μm) ,以甲醇 - 0 .4 %磷酸溶液 (7∶ 3)为流动相 ,375 nm波长 ,测定槐米水解液中槲皮素的含量。结果 该方法的线性为 10 .0 3～ 10 0 .3ng,r=0 .9997;平均回收率为 99.0 6 % ,RSD=2 .0 7% (n=9)。结论 该方法测定样品分离效果佳 ,灵敏度高 ,重现性好 ,结果准确可靠。

TLC和HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱和苦参碱的体系优化

采用薄层层析法（TLC）,展开剂为氯仿-甲醇-氨水=8∶2∶0.1;同时采用高效液相色谱法（HPLC）,色谱柱为Ultra II^TM C18（5μm×250mm×4.6mm）、流动相为0.01mol/L磷酸盐缓冲液-甲醇（45∶55）、检测波长为216nm、流速为1.0mL/min、柱温为30℃、进样量为10μL;建立TLC和HPLC同时分离测定苦豆子生物碱体系的优化方法。结果表明：槐定碱和苦参碱在200-900μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,R2分别为0.9994和0.9996。平均回收率（n=9）分别为99.47%和99.82%;试验表明可通过TLC和HPLC法同时测定苦豆子总碱中槐定碱和苦参碱的含量,并可用该方法进行苦豆子药材及含苦豆子药用成分的质量控制。

HPLC法分离测定苦豆子愈伤组织喹诺里西啶生物碱含量及体系优化

以苦豆子愈伤组织为试材,采用高效液相色谱法,分离并测定苦豆子愈伤组织中氧化槐果碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱和苦参碱,建立了这5种单碱分离、测定的色谱方法。结果表明:色谱条件为UltimateAQ-C18(4.6μm×250mm×5mm);流动相为0.01mol·L^(-1)磷酸缓冲液(K2HPO4=5.59g·L^(-1),KH2PO4=0.41g·L^(-1),pH 7.5)-甲醇(50∶50,V/V);检测波长为216nm;柱温为35℃;流速为1.0mL·min-1,检测苦豆子愈伤组织中含有5种生物单碱,其中氧化槐果碱和槐定碱在苦豆子愈伤组织继代培养第4代时含量相对较高,分别为1.205 6mg·g-1和0.116 5mg·g-1,氧化苦参碱、槐果碱、苦参碱的含量略有波动,大致呈下降趋势。

柱前衍生化HPLC法建立苦豆子多糖特征图谱的研究

[目的]建立苦豆子多糖特征图谱。[方法]采用1-苯基-3-甲基本5-吡唑酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱(HPLC)法对苦豆子多糖进行单糖组成分析。[结果]苦豆子多糖特征图谱由7个共有峰组成,为甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖以及1个未鉴定出的单糖。[结论]柱前衍生化HPLC法建立多糖的特征图谱操作简便、准确、重复性良好,为苦豆子多糖的质量评价提供了依据。

HPLC-CMC筛选6种中药材治疗慢性牙周炎的活性成分

目的研究苦豆子、甘草、三七、丹参、续断、杜仲提取物与人牙周膜细胞的生物亲和作用,为筛选用于治疗慢性牙周炎的中药提供理论基础。方法通过高效液相色谱法(HPLC)联合细胞膜色谱法(CMC)对中药苦豆子、甘草、三七、丹参、续断、杜仲超声萃取的有效成分与人牙周膜细胞膜进行筛选。结果三七、丹参、续断萃取成分与人牙周膜细胞色谱柱能形成保留色谱峰;苦豆子、甘草、杜仲萃取成分与人牙周膜细胞色谱柱未形成保留色谱峰。结论三七、丹参、续断与人牙周细胞膜有亲和作用靶点,具体作用机理有待于深入研究;苦豆子、甘草、杜仲与人牙周细胞膜无亲和靶点。筛选出的中药活性成分,为后期治疗慢性牙周炎局部凝胶制剂的开发提供了理论依据。

槐果碱对感染CVB_3小鼠NK细胞活性和IL-2水平的影响

目的 :研究槐果碱对感染CVB3 小鼠NK细胞和IL - 2活性的影响。方法 :病毒接种法制备CVB3 病毒性心肌炎小鼠模型 ,用MTT比色分析法与ELISA法分别检测小鼠脾脏中NK细胞活性与IL - 2的诱生量。结果 :病毒模型组NK活性明显升高 ,IL - 2活性降低。槐果碱 5 0mg .kg-1.d-1和 2 5mg .kg-1.d-1两个剂量ig可明显升高正常小鼠NK活性。但槐果碱各治疗剂量对CVB3 心肌炎小鼠NK细胞活性无明显影响。槐果碱 5 0mg .kg-1.d-1ig治疗组可明显增加脾脏IL - 2诱生量。结论 :槐果碱升高CVB3 感染小鼠的IL - 2活性 ,这可能是其抗CVB3 免疫机理之一。

苦豆草植物HPLC指纹图谱的建立

目的建立苦豆草的指纹图谱分析方法,为评价及控制其质量提供依据。方法采用Agilent TC-C18(2)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.05mo L·L-1的磷酸二氢钾溶液(2.0m L·L-1三乙胺)为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0m L·min-1,检测波长205nm,柱温30℃。测定16批样品色谱图,建立苦豆草指纹图谱。结果确定苦豆草指纹图谱有17个共有峰,苦豆草之间的相似度均大于0.950。结论建立的HPLC指纹图谱分析方法精密度、重复性和稳定性良好,可用于苦豆草的质量评价。

槐花总黄酮提取物HPLC指纹图谱研究

目的:建立槐花总黄酮提取物的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法:采用高效液相色谱法,以DIKMA C18(5μm,4.6mm×250mm)为色谱柱,甲醇-1%冰醋酸为流动相梯度洗脱,流速1.0mL.min-1,检测波长257nm,分析时间70min。测定10批样品色谱图,建立指纹图谱。结果:确定了17个共有峰,其中7号、12号峰分别为芦丁、槲皮素。10批样品相似度均大于0.90。结论:建立的HPLC指纹图谱分析方法可用于槐花总黄酮的质量评价。