粘细菌Sorangium cellulosum So0087-3-3菌体提取物的分离和鉴定

以福建莆田地区分离得到的粘细菌Sorangium cellulosum So0087—3—3为研究对象，通过发酵培养对菌体的化学成分进行研究．从5L发酵菌体提取物中分离得到7个化合物，通过1D，2DNMR以及质谱数据鉴定了化合物1～3的结构，分别为2-（4-hydroxyphenyl）ethylamine，麦角甾醇，过氧麦角甾醇；初步确定化合物4～7为脂肪酸甘油酯类化合物．

Structural Characterization of an Exopolysaccharide from the Myxobacterium Sorangium Cellulosum NUST06

The chemical structure of an exopolysaccharide (EPS) produced by Sorangium cellulosum NUST06 was investigated. The EPS was found to have molecular masses greater than 2?106 Da, and consisted of D-glucose, D-mannose and D-glucuronic acid in a ratio of 5:4:1. The analytical results of methylation and nuclear magnetic resonance spectra suggested the EPS consist of following tetrasaccharide repeating units: 4) -b-D-Glup (1 4)- b-D-Glup (1 4) -b-D-Glup (1 a-D-GluAp (1 6) a-D-manp (1 6)-a-D-manp (1 6) (6) (4) (4) ↑ ↑ ↑ Me Ac Ac

粘细菌Sorangium cellulosum So0157-2产生的两个埃博霉素类化合物(英文)

目的:对粘细菌Sorangium cellulosum So0157-2的化学成分进行研究。方法:通过色谱层析对提取物进行分离纯化,并通过波谱解析(一维、二维的核磁共振谱和质谱)确定了化合物的结构。结果:分别鉴定为seco-epothiloneA(1)和1-methyl-seco-epothiloneA(2)。结论:化合物1和2都是首次从该菌株中分离得到。其中1是首次分离得到的新天然产物。

纤维素堆囊菌源果糖激酶的克隆表达及其酶学性质研究

为促进果糖-6-磷酸的绿色生物制备,该研究对纤维素堆囊菌(Sorangium cellulosum)中的果糖激酶基因进行克隆、表达,探究重组酶酶学性质和底物特异性。以纤维素堆囊菌基因组DNA为模板,设计引物克隆果糖激酶基因SoCeFruK 1852和SoCeFruK 7579,构建重组表达质粒pET30a-SoCeFruK 1852和pET30a-SoCeFruK 7579,并在Escherichia coli(DE3)中诱导表达,纯化重组果糖激酶,研究反应产物和酶学性质。重组果糖激酶SoCeFruK1852和SoCeFruK7579的分子质量大小分别为31.2、32.8 kDa,蛋白质质量浓度为2.04、1.8 mg/mL,比活力分别为35.8、18.3 U/mg。SoCeFruK1852的最适温度和pH分别为37℃和4.5。金属离子Co^(2+)、Fe^(3+)、Zn^(2+)和化学试剂SDS、EDTA、Tween 20对酶活力有抑制作用,而Mg^(2+)和Mn^(2+)对酶活力有促进作用。以果糖为底物时,SoCeFruK1852的K_(m)值为0.54 mmol/L,V_(max)值为1.28μmol/s。SoCeFruK1852能够特异性催化果糖,但也能催化部分D-塔格糖。获得细菌来源的重组果糖激酶SoCeFruK1852和SoCeFruK7579,且SoCeFruK1852显示良好的酶活力和酶学性质,底物特异性较强,为后续相关研究奠定基础。

纤维堆囊菌发酵产生埃博霉素条件的优化

埃博霉素是纤维堆囊菌产生的一种具有抗肿瘤活性的次级代谢产物.文中研究了纤维堆囊菌DSM11999发酵合成埃博霉素的条件.结果表明:采用对数生长期后期的菌种在25℃进行发酵,将马铃薯淀粉和胰蛋白胨分别作为碳源和氮源,添加少量的无机盐MnC l4,EDTA-Fe-Na,K2HPO4,ZnC l2,CuSO4和生长促进因子丙氨酸,可使埃博霉素的产量提高22.5%.

纤维堆囊菌的代谢产物及其生物学活性分析

纤维堆囊菌不同菌株不但表现细胞和子实体形态的差异 ,而且代谢产物的组成和生物学活性也存在差异。纤维堆囊菌对革兰氏阴性细菌不表现任何抑制活性 ,部分菌株可抑制革兰氏阳性细菌 ;但所有菌株对真菌和肿瘤细胞有广泛和强烈的抑制作用。薄层层析显示 ,纤维堆囊菌的次级代谢产物组分较多 ,且大多数组分具有不同程度的抑制真菌和肿瘤细胞的活性。在筛选中发现四株菌的代谢产物能够促进微管蛋白聚合 ,其中So3 3 1活性组分的薄层层析Rf 值与已知的EpothiloneA相似 ,而So81的则有较大的差异。研究结果表明纤维堆囊菌是很好的筛选抗真核生物活性的天然化合物资源。

纤维堆囊菌的多细胞形态发生过程

粘细菌是具有复杂多细胞行为的革蓝氏阴性细菌 ,纤维堆囊菌是粘细菌中唯一能够降解纤维素的粘细菌种属。本文通过扫描电子显微镜和相差光学显微镜 ,分析了纤维堆囊菌在纤维素基质上的生长和子实体形态发生的多细胞行为特征 。

基因组重组技术选育埃博霉素B高产菌株

目的用基因重组技术选育埃博霉素高产菌株。方法本研究首先从不同生境中分离筛选到4株能产生埃博霉素B的纤维堆囊菌,以这些野生菌株作为Genome shuffling递归原生质体融合出发菌株。结果通过五轮基因组重组成功选育到了3株遗传稳定的高产埃博霉素B重组菌株,其中一株重组菌株So F5-09的埃博霉素B产量达到了15.8mg/L,比原始出发菌株So 07-9埃博霉素B产量提高了35.1倍。结论本研究证明使用野生菌株作为Genome shuffling递归原生质体融合出发菌株也能有效提高目标代谢产物的产量。

埃坡霉素高产菌株的选育

采用紫外-亚硝酸盐复合诱变法对纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)ATCC15384进行诱变,结合红霉素抗性筛选,筛得一株遗传稳定的埃坡霉素高产菌株纤维堆囊菌UN16H127,埃坡霉素A(EpoA)和埃坡霉素B(EpoB)的产量为289.9和25.14μg/L,总产量(EpoA+EpoB,315.04μg/L)是出发菌株的23.8倍。

纤维堆囊菌生长及限制因素的研究

纤维堆囊菌对可溶性淀粉、木聚糖、纤维素等复杂碳源的利用能力较强 ,简单碳源中只利用葡萄糖 ;KNO3、蛋白胨是较好的氮源 ,大多数氮源都能支持生长 ,表明该菌营养要求简单 ,能高效的利用自然界里丰富的纤维素资源。堆囊菌的盐耐受能力较低 ,盐浓度高于 1%的培养基中菌体几乎不能生长 ,Mg2 +是生长必需的元素 ,Ca2 +对生长没有明显的作用 ,但是子实体的形态发生所必需的。培养基的起始pH为 7 0时细胞生长较好 ,大于 8 0或小于 5 0不生长。纤维堆囊菌生长具有细胞密度依赖性 ,低密度的细胞不能生长。固定在滤纸上的细胞淋洗液 (纤维素酶降解产物 )对细胞生长具有明显促进作用 ,并能降低细胞生长的密度依赖性。

粘细菌发酵生产新型微生物药物的初步研究

通过在家兔粪粒上诱导出子实体,转接到固体培养基中,使之发展为菌落,再挑取菌落边缘的培养物来分离纯化粘细菌。在利用纤维堆囊菌发酵生产埃坡霉素(Epothilone)的工艺中,添加环式糊精到发酵培养基中,并在获得的发酵液中添加吸附树脂,简化了产物的提取工艺。

培养基组成对纤维堆壤菌产埃博霉素的影响

埃博霉素(Epothilone)是粘细菌纤维堆壤菌(Sorangium cellulosum)产生的具有抗肿瘤活性的次级代谢产物。为了提高埃博霉素A和B的产量,以及B/A的比率,以G52培养基为基础培养基,研究了黄豆粉、酵母粉、酪蛋白胨和丙酸钠对纤维堆壤菌产埃博霉素的影响。结果表明:低脂黄豆粉和酪蛋白胨作为氮源,同时加入6.25 mmol/L丙酸钠作为前体物质,埃博霉素A和B的产量分别比原始条件平均提高1.47倍和2.88倍,B/A的比率比原始条件平均提高了1.97倍。

纤维堆囊菌产埃博霉素B发酵培养基的优化

目的优化埃博霉素B发酵培养基。方法以纤维堆囊菌SoF5-9为供试菌株,通过单因素和正交试验研究了埃博霉素B合成的最佳培养基。结果埃博霉素B最适发酵培养基为糊精0.3%,蔗糖0.07%,葡萄糖0.02%,豆饼粉0.17%,MgSO4.7H2O 0.1%,无水氯化钙0.1%,EDTA-Fe3+2mL/L,微量元素(TE)0.5mL/L。在该最优条件下,埃博霉素B产量可达到27.5mg/L。结论合理优化发酵培养基组分可以有效提高埃博霉素B的产量。

NTG诱变选育埃博霉素高产菌株的研究

纤维堆囊菌产生的次级代谢产物埃博霉素是受医学界广泛关注的抗癌良药,由于其较低的产量阻碍了其工业化的发展。本文采用纤维堆囊菌DSM11999作为出发菌株,通过NTG化学诱变的方法,诱变浓度300μg/mL,处理时间30min,来筛选优良菌种,最终得到两株埃博霉素A的产量分别为17.3mg/L和17.4mg/L优良菌株。

用于吸附固定纤维堆囊菌的硅藻土基多孔陶瓷制备

以硅藻土为主要原料,采用添加造孔剂法制备硅藻土基多孔陶瓷,研究造孔剂大小、造孔剂用量、成型压力对多孔陶瓷性能的影响,通过正交优化实验确定最佳工艺方案。结果表明,在30目木屑造孔剂质量分数为2.5%,7 MPa下制得的硅藻土基多孔陶瓷性能良好,孔径集中在5μm,比表面积为23.55 m2/g,孔隙率为32%,机械强度为10.2 MPa,用其固定纤维堆囊菌进行发酵,埃博霉素B产量提高了42.6%,达到31.8 mg/L。

埃博霉素B高产菌株的诱变育种及其发酵条件的优化

以纤维堆囊菌SoF5-09为出发菌株,通过超声波和紫外诱变处理,选育得到了2株具有良好遗传稳定性的突变菌株。在此基础上应用单因素试验和正交设计对一株突变菌株产埃博霉素B的发酵条件进行了系统的研究和优化,得到了最佳的试验组合为发酵温度30℃,发酵时间为7d,接种量为8%,发酵转速200r/min,采用此条件埃博霉素B的产量达33.5mg/L。

溶纤粘细菌NUST06的系统发育学研究

从中国山东东营的一个盐土样品中分离到一株溶纤性粘细菌NUST06,能在pH9.5和7%NaCl的环境中生长.革兰氏染色阴性.营养体细胞长杆状,大小为(5～8)μm×(0.6～1)μm.子实体是由分散的大小为100～200μm细胞聚集体构成.粘孢子为短杆状细胞,大小为(2～3)μm×(0.8～1.2)μm.DNA中(G+C)%为69.1%.根据这些特征,此菌株可定为纤维堆囊菌SorangiumcellulosumNUST06.对菌株NUST06进行了基于16SrDNA序列比较的系统学分析,表明该菌株与Sorangiumcellulosum的相似性仅为82.7%.提示在粘细菌Sorangiumcellulosum分类上存在着形态结构与系统发育的不相关性.

纤维堆囊菌Soce90菌株发酵合成新型抗癌物质epothilones的营养控制

Ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ是从粘细菌纤维堆囊菌（Ｓｏｒａｎｇｉｕｍｃｅｌｕｌｏｓｕｍ）中新分离的一类具有抗肿瘤活性的次级代谢产物。本文研究了影响纤维堆囊菌Ｓｏｃｅ９０菌株合成ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ的条件。结果表明：菌体的生长状态对产物的合成有影响，指数期接种物、低氮高碳培养条件、某些盐离子、氨基酸和乙酸盐对ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ的合成有益。

响应面法优化纤维堆囊菌SoF5-76产埃博霉素B发酵培养基

以纤维堆囊菌SOF5-76为试验菌株,用响应面分析法对其产埃博霉素B的培养基进行优化,以提高埃博霉素B的产量。在单因素试验的基础上,利用Plackett-Burman筛选出对埃博霉素B产量有显著影响的3个因素为马铃薯淀粉、脱脂奶粉和无水氯化钙,在此基础上通过最陡爬坡试验逼近最佳响应面区域;再运用Box-Behnken试验设计和响应面分析法进行回归分析,确定重要因素的最优浓度。得到最佳发酵培养基为:马铃薯淀粉3.9 g/L、脱脂奶粉2.2 g/L、无水氯化钙1.3 g/L、葡萄糖1 g/L,豆饼粉1.5g/L,七水硫酸镁2.5 g/L,EDTA-Fe3+3 mL/L,微量元素(TE)0.5 mL/L,VB121 mL/L。在此最优条件下发酵埃博霉素B的产量为29.95 mg/L,与模型预测值接近,发酵产量比优化前提高了1.1倍。

基因组重排选育Epothilone B高产菌株

以纤维堆囊菌AHB125经过紫外诱变和2%乙酸钠抗性筛选出来的SC4-14和SC4-56为出发菌株,采用基因组重排技术选育Epothilone B高产菌株,并探索该技术在菌种选育中的基本规律。通过4轮基因组重排成功选育出了5株遗传稳定的Epothilone B高产菌株,其中1株重排菌株F4-28 Epothilone B产量达到67.4 mg/L,是原始菌株纤维堆囊菌AHB125 Epothilone B产量的8倍,是两亲本菌株Epothilone B产量的4-5倍,并且F4-28的发酵周期比SC4-56短1 d。因此,基因组重排技术可有效的选育出Epothilone B高产菌株。