天山花楸抗哮喘活性提取部位的筛选及其成分分析

目的基于BEAS-2B细胞筛选天山花楸抗哮喘活性提取部位,并对其化学成分进行分析。方法采用系统溶剂提取法制备天山花楸不同溶剂提取物;采用脂多糖诱导BEAS-2B细胞构建体外炎症模型,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β和IL-8水平,筛选天山花楸抗哮喘的活性提取部位;基于UPLC-QE-MS技术对天山花楸抗哮喘活性提取部位进行成分分析。结果ELISA法检测结果表明天山花楸乙酸乙酯、正丁醇和水提取物均可以抑制脂多糖诱导的BEAS-2B细胞分泌IL-1β和IL-8,乙酸乙酯部位抑制效果更为显著;利用UPLC-QE-MS技术对乙酸乙酯部位进行成分分析,通过分析各成分的质荷比及二级碎片离子信息,对其中11个化学成分的结构及其裂解途径进行了推导,包括黄酮类、苯丙素类、酚类及氰苷类化合物。结论本研究对天山花楸乙酸乙酯提取物进行成分分析,为研究天山花楸抗哮喘活性的物质基础提供理论依据。

天山花楸枝、叶、果实的红外光谱特征分析

目的分析天山花楸枝、叶、果实的红外光谱特征。方法采用傅里叶变换红外光谱技术及溴化钾压片法对天山花楸枝、叶、果实进行红外光谱及其二阶导数谱测定,以溴化钾作为空白,扫描范围4000~400 cm^(-1),分辨率为4 cm^(-1),每批样品扫描20次。结果天山花楸枝、叶、果实均在~3400、~2900、~1730、~1610、~1420、~1060、~800 cm^(-1)处出现特征吸收峰,无较大差异。二阶导数谱在~1500、~1410、~1320、~1060、~740 cm^(-1)处峰形和峰强表现出一定的差异性。天山花楸枝、叶、果实中所含的主成分为黄酮、苷类及氨基酸等化合物,叶中含量最高,其次是枝,且细枝中含量明显高于粗枝;果实中以苷类成分为主,也含有脂类成分。结论傅立叶变换红外光谱技术能快速表征天山花楸的特征,可作为天山花楸质量评价和控制的依据。

天山花楸的天然更新及其影响因子

天山花楸是我国新疆天山林区重要的伴生树种,具有较高的观赏价值。通过分析天山花楸的天然更新特征与环境因子的关系,以期为天山花楸野生资源保育和天山花楸的种群扩繁提供理论依据。在踏查调查法的基础上,根据调查区林分坡向、坡位、坡度、海拔的不同设置45个50 m×50 m的标准样地,研究分析了天山花楸的天然更新特点以及影响其天然更新的因素。结果表明:(1)天山花楸在天山中段不同坡向的天然更新分布情况由高到低的分别为半阴坡、阴坡和半阳坡占比各为60.31%、37.98%和1.71%,阳坡没有天山花楸分布。(2)天山花楸在天山中段天然更新的主要海拔范围为1900~2100 m,更新株数占调查总数的71.70%。(3)Ⅰ级地径≤0.1 cm、Ⅱ级地径为0.2cm、Ⅲ级地径为0.3cm和Ⅳ级地径为0.4~2cm的幼苗比例占总径级的94.00%,各自分别占比23.15%、29.70%、24.32%和16.83%,Ⅴ—Ⅷ级的总幼苗占总径级的比例仅仅为6.00%,同时Ⅳ级向Ⅴ级径级幼苗的转化率为8.48%,则严重阻碍了天山花楸幼苗的天然更新。(4)天山花楸幼苗的树高与土壤含水量(r=0.99*)、全K(r=0.98*)呈显著正相关(P<0.05),与容重(r=﹣0.95*)呈显著负相关关系(P<0.05)。(5)通过冗余分析(RDA),阴坡、半阴坡、半阳坡、土壤含水量、容重、全K、全P、全N、有机质、有效P、碱解氮及pH值12个环境因子对天山花楸更新影响的总解释量为96.6%。总之,天山花楸种群在天山中段,正处于退化阶段,土壤含水量、全K含量和容重在天山花楸天然更新中对幼苗的生长有着显著影响,土壤容重的增加不利于天山花楸的更新。

天山花楸叶总黄酮对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察天山花楸叶总黄酮对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法采用改良的Langendorff逆行恒压灌流方法,建立大鼠离体心脏I/R损伤模型,观察天山花楸叶总黄酮(4.0、6.0mg·L-1)对心脏I/R损伤后心功能、心肌组织中超氧岐化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化的影响。利用DPPH、羟自由基、超氧阴离子、脂质过氧化反应体系,检测了天山花楸叶总黄酮(6.25、12.5、25、50、100mg·L-1)体外抗氧化能力。结果天山花楸叶总黄酮(6.0mg·L-1)可明显改善离体心脏I/R损伤后左心室发展压(LVDP)和左室压力升高或降低最大速率(±dp/dtmax),明显增加冠脉流量;天山花楸叶总黄酮(6.0mg·L-1)处理后I/R损伤心肌组织中SOD活性升高,MDA含量减少。天山花楸叶总黄酮(6.25～100mg.L-1)可浓度依赖性地清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基,并抑制脂质过氧化反应。结论天山花楸叶总黄酮对心肌缺血/再灌注损伤具有明显保护作用,与其具有较强的抗氧化活性有关。

天山花楸全株抑菌作用的比较

用一系列细菌和真菌试验了天山花楸枝条、叶、果实及根乙醇提取物的抑菌作用。结果表明一定浓度的天山花楸枝条、叶、果实及根乙醇提取物对供试细菌和真菌都显示出一定的抑制作用,MIC和MBC均较低,其抑菌活性随着提取物浓度的增大而逐渐增强。天山花楸不同部位具有一定的抑菌作用和杀菌作用,尤其是对葡萄球菌的作用更为显著。

天山花楸药材质量标准研究

目的制定天山花楸药材质量标准,为该药用植物资源的开发利用提供科学依据。方法以《中国药典》2010版为依据,采用TLC方法对天山花楸药材中金丝桃苷进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法,梯度洗脱,测定天山花楸药材中金丝桃苷、苦杏仁苷的含量。结果天山花楸药材以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸-水(9∶6∶3∶4)为展开剂,天山花楸中金丝桃苷薄层色谱鉴别,分析显示检查项中暂定天山花楸药材水分不得过8.0%,总灰分不得过9.0%、酸不溶性灰分不得过0.70%。醇溶性浸出物不得少于30%。结论实验方法简单、准确,可用于天山花楸药材的质量控制。

柱前衍生-HPLC分析天山花楸多糖中的单糖组成

目的:测定分析天山花楸中的单糖组成。方法:天山花楸多糖样品用2mol/L硫酸溶液水解成单糖,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,采用反相高效液相色谱法于波长245nm处检测各单糖。结果:天山花楸多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成。结论:此法简单、快速、重现性好,可用于天山花楸多糖中单糖组成分析。

微波消解-ICP-AES法测定新疆不同产地天山花楸枝叶及果实中的元素

采用微波消解-ICP-AES技术,测定了新疆不同产地天山花楸枝叶及果实中Ca,K,Mg,Na,Fe,Mn,Zn,Cu,Pb,As等十种元素的含量。结果发现:不同产地的天山花楸枝叶及果实中元素的含量均有差异,枝叶中的含量较果实中的含量要丰富,对人体有益的Ca,K,Mg,Na,Fe,Mn,Zn,Cu等元素的含量均较高,有害元素Pb和As的含量较低。实验结果为更好的开发和利用新疆天山花楸药用资源提供科学依据。

胶束毛细管电泳法测定天山花楸果实中苦杏仁苷的含量

目的建立了一种简单、快速分析天山花楸果实中苦杏仁苷含量测定的胶束毛细管电泳法（MEKC）。方法采用熔融石英毛细管（58．5cm×75μm，有效长度为48．5cm），缓冲体系为70mmol·L。的硼砂-200mmol．L^-1的十二烷基硫酸钠（pH9．50）；分离电压10kV（＋）→（-）；电泳时间40min;电泳温度25℃；压力进样0．5psi×10s；柱上检测Uv215nm（二极管阵列检测器）。结果苦杏仁苷在20min内得到较好分离，在25～225μg·mL^-1范围内与峰面积线性关系良好，线性方程为：Y=776．66X-6637．9（r=0．9997），样品平均回收率为100．8％，RSD值为2．8％。结论该方法简单、快速，结果准确可靠，可用于天山花楸中氰苷类成分测定及质量控制。

天山花楸中总黄酮和槲皮素测定

以芦丁、槲皮素为标准品建立了用分光光度法测定天山花楸叶中总黄酮的含量和果实中槲皮素含量的测定方法，分别采用5％ NaNO2～10％Al（NO3）3～4％NaOH和2％AlCl3显色系统，并分别在510nm和422nm处进行了含量测定。结果表明：天山花楸果实中总黄酮为7．75％（RSD％=1．09），在1．596～6．384mg／100mL（R^2=0．9999）范围内，线性关系良好；7月天山花楸叶子中槲皮素为0．777％（RSD％=0．66）、8月其叶子中槲皮素为0．397％（RSD％=0．81），叶子中槲皮素在0．241～0．723mg／100mL（R^2=0．9995）范围内，线性关系良好。

苯酚-硫酸法测定天山花楸果实中多糖含量

目的建立新疆天山花楸果实多糖含量测定方法。方法采用苯酚-硫酸法,以葡萄糖为对照品,检测波长490nm。结果天山花楸果实中多糖含量为4.11%,平均加样回收率为98.7%,RSD 1.8%(n=6)。结论该法操作简便,结果准确,重复性好,可用于天山花楸果实多糖的含量测定。

新疆天山花楸黄酮类物质对酪氨酸酶的抑制机制

以新疆天山花楸的茎为材料,采用超声波辅助法提取得到天山花楸黄酮类物质。以L-多巴为底物,运用酶动力学方法研究黄酮类物质对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明:天山花楸黄酮类物质对酪氨酸酶有较强的抑制作用,导致酪氨酸酶二酚酶活力下降50%所需的提取物浓度(IC50)值为0.27 mg/m L。对酪氨酸酶的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,对游离酶的抑制常数(KI)和酶-底物配位化合物的抑制常数(KIS)分别为0.218和0.313mg/m L。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)实验显示天山花楸黄酮类物质具有一定的抗氧化作用,引起DPPH·活性下降50%的黄酮类物质浓度(IC50)为0.18 mg/m L。本研究为进一步开发利用天山花楸中的果蔬保鲜及美白成分提供了理论依据。

天山花楸内生真菌的分离及其抗菌活性物质的初步研究

采用组织块分离法从天山花楸茎、叶、果实中分离出17株内生真菌,分别运用对峙培养法和菌丝生长速率法进行初筛、复筛和抑菌活性试验,为抗菌活性菌株的应用以及抗菌物质的分离提纯奠定基础。结果表明:(1)菌株L18对棉花枯萎病菌和棉花黄萎病菌的抑菌作用较强。(2)形态学特征观察和rRNA ITS序列系统发育分析结果初步鉴定菌株L18为波兰青霉(Penicillium polonicum)。(3)该菌株发酵液中抑菌活性物质对温度较敏感,40℃处理后抑菌活性降低至对照的59.1%;对日光不稳定,而对紫外光较稳定;能被蛋白酶降解。(4)乙酸乙酯萃取该抑菌活性物质效果较佳,表明其极性较小,初步推测此活性物质属于蛋白质或肽类物质。

HPLC测定天山花楸中的苦杏仁苷

目的采用HPLC法测定天山花楸中的苦杏仁苷。方法用甲醇超声提取天山花楸,色谱柱为Shim-pack VP C18（150mm×4.6 mm,5μm）;流动相为甲醇-水（20：80）;柱温35℃;流速1.0 ml·min^-1;检测波长215 nm。结果苦杏仁苷进样量0.4-3.2μg与峰面积的线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率96.6%,RSD=2.2%。结论所建方法可用于测定天山花楸中的苦杏仁苷,精密度好,结果准确可靠。

天山花楸果实和枝叶提取物的药效比较研究

目的比较天山花楸果实醇提液和天山花楸枝叶醇提液的平喘、祛痰、抗炎及免疫作用。方法采用磷酸组胺致豚鼠哮喘实验、大鼠毛细管排痰实验、角叉菜胶致大鼠足肿胀实验和碳粒廓清和血清溶血素的测定实验,评价果实和枝叶提取物的作用。结果天山花楸枝叶醇提物各剂量组的平喘效果明显优于相同剂量的果实组枝叶醇提物8和12g·kg-1剂量组的排痰效果优于相同剂量的果实组(P<0.05);天山花楸枝叶醇提物的抗炎效果也明显高于同剂量的果实组(P<0.05);天山花楸枝叶提取物各剂量组的免疫作用与相同剂量的果实组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论天山花楸枝叶提取物的平喘、祛痰、抗炎及免疫调节作用明显优于其果实提取物。

天山花楸果实的有效成分的初步研究

本论文研究中采用了《中药化学实验操作技术》介绍的传统的方法—水提取法和醇提取法对天山花楸果实的化学成分进行了比较全面的定性实验。水提取检测出有糖类、蛋白质、氨基酸等物质,醇提取物中检测到了醌类、蒽醌类、黄酮、强心甙和生物碱等化学物质。

高效液相色谱法测定天山花楸叶中槲皮素和山奈素含量

目的建立同时测定天山花楸叶中槲皮素和山奈素含量的方法。方法色谱柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm,);流动相为甲醇-乙腈(50∶50);流速0.9 mL.min-1;检测波长:360 nm;柱温:40℃。结果天山花楸中槲皮素的含量为48.22 mg.g-1;山奈素含量为20.57 mg.g-1;平均回收率分别为99.72%,98.58%。结论该方法准确,简便,可作为天山花楸叶中槲皮素和山奈素的含量测定方法。

响应面法优化天山花楸总黄酮回流提取工艺

目的通过响应面法优化天山花楸Sorbus tianshanica Rupr.总黄酮回流提取工艺。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取温度为影响因素,总黄酮含有量为评价指标,响应面法优化提取工艺。结果最佳条件为乙醇体积分数50%,料液比1∶18,提取温度90℃,提取3次,每次1 h,总黄酮含有量101.07 mg/g。结论该方法稳定可靠,可用于回流提取天山花楸总黄酮。

新疆天山花楸不同药用部位总黄酮的提取及其定量测定

采用乙醇回流浸提法对新疆天山花楸的不同药用部位进行了总黄酮的提取和定量测定,结果表明黄酮的含量顺序为木质部>韧皮部>果实>叶子。

从天山花楸中分离筛选纤维素酶产生菌及其酶学性质研究

从天山花楸茎、叶和果实中分离到53株内生细菌,利用刚果红初筛平板获得透明圈较大的4株菌,在此基础上进行摇瓶复筛,得到一株产纤维素酶活力较高的菌株(S11)。该菌发酵培养12h,产羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活力最高达到39.47U/mL。该酶最适反应pH值为5.0,在pH 5.0～6.0范围内较稳定;最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性较好,60～70℃几乎完全失活;各种供试金属离子与化学试剂对酶活性都有不同程度的抑制作用,其中Ca2+、SDS和EDTA的抑制作用最强。