天山花楸抗哮喘活性提取部位的筛选及其成分分析

目的基于BEAS-2B细胞筛选天山花楸抗哮喘活性提取部位,并对其化学成分进行分析。方法采用系统溶剂提取法制备天山花楸不同溶剂提取物;采用脂多糖诱导BEAS-2B细胞构建体外炎症模型,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β和IL-8水平,筛选天山花楸抗哮喘的活性提取部位;基于UPLC-QE-MS技术对天山花楸抗哮喘活性提取部位进行成分分析。结果ELISA法检测结果表明天山花楸乙酸乙酯、正丁醇和水提取物均可以抑制脂多糖诱导的BEAS-2B细胞分泌IL-1β和IL-8,乙酸乙酯部位抑制效果更为显著;利用UPLC-QE-MS技术对乙酸乙酯部位进行成分分析,通过分析各成分的质荷比及二级碎片离子信息,对其中11个化学成分的结构及其裂解途径进行了推导,包括黄酮类、苯丙素类、酚类及氰苷类化合物。结论本研究对天山花楸乙酸乙酯提取物进行成分分析,为研究天山花楸抗哮喘活性的物质基础提供理论依据。

天山花楸的天然更新及其影响因子

天山花楸是我国新疆天山林区重要的伴生树种,具有较高的观赏价值。通过分析天山花楸的天然更新特征与环境因子的关系,以期为天山花楸野生资源保育和天山花楸的种群扩繁提供理论依据。在踏查调查法的基础上,根据调查区林分坡向、坡位、坡度、海拔的不同设置45个50 m×50 m的标准样地,研究分析了天山花楸的天然更新特点以及影响其天然更新的因素。结果表明:(1)天山花楸在天山中段不同坡向的天然更新分布情况由高到低的分别为半阴坡、阴坡和半阳坡占比各为60.31%、37.98%和1.71%,阳坡没有天山花楸分布。(2)天山花楸在天山中段天然更新的主要海拔范围为1900~2100 m,更新株数占调查总数的71.70%。(3)Ⅰ级地径≤0.1 cm、Ⅱ级地径为0.2cm、Ⅲ级地径为0.3cm和Ⅳ级地径为0.4~2cm的幼苗比例占总径级的94.00%,各自分别占比23.15%、29.70%、24.32%和16.83%,Ⅴ—Ⅷ级的总幼苗占总径级的比例仅仅为6.00%,同时Ⅳ级向Ⅴ级径级幼苗的转化率为8.48%,则严重阻碍了天山花楸幼苗的天然更新。(4)天山花楸幼苗的树高与土壤含水量(r=0.99*)、全K(r=0.98*)呈显著正相关(P<0.05),与容重(r=﹣0.95*)呈显著负相关关系(P<0.05)。(5)通过冗余分析(RDA),阴坡、半阴坡、半阳坡、土壤含水量、容重、全K、全P、全N、有机质、有效P、碱解氮及pH值12个环境因子对天山花楸更新影响的总解释量为96.6%。总之,天山花楸种群在天山中段,正处于退化阶段,土壤含水量、全K含量和容重在天山花楸天然更新中对幼苗的生长有着显著影响,土壤容重的增加不利于天山花楸的更新。

天山花楸内生真菌的分离及其抗菌活性物质的初步研究

采用组织块分离法从天山花楸茎、叶、果实中分离出17株内生真菌,分别运用对峙培养法和菌丝生长速率法进行初筛、复筛和抑菌活性试验,为抗菌活性菌株的应用以及抗菌物质的分离提纯奠定基础。结果表明:(1)菌株L18对棉花枯萎病菌和棉花黄萎病菌的抑菌作用较强。(2)形态学特征观察和rRNA ITS序列系统发育分析结果初步鉴定菌株L18为波兰青霉(Penicillium polonicum)。(3)该菌株发酵液中抑菌活性物质对温度较敏感,40℃处理后抑菌活性降低至对照的59.1%;对日光不稳定,而对紫外光较稳定;能被蛋白酶降解。(4)乙酸乙酯萃取该抑菌活性物质效果较佳,表明其极性较小,初步推测此活性物质属于蛋白质或肽类物质。

天山花楸果实和枝叶提取物的药效比较研究

目的比较天山花楸果实醇提液和天山花楸枝叶醇提液的平喘、祛痰、抗炎及免疫作用。方法采用磷酸组胺致豚鼠哮喘实验、大鼠毛细管排痰实验、角叉菜胶致大鼠足肿胀实验和碳粒廓清和血清溶血素的测定实验,评价果实和枝叶提取物的作用。结果天山花楸枝叶醇提物各剂量组的平喘效果明显优于相同剂量的果实组枝叶醇提物8和12g·kg-1剂量组的排痰效果优于相同剂量的果实组(P<0.05);天山花楸枝叶醇提物的抗炎效果也明显高于同剂量的果实组(P<0.05);天山花楸枝叶提取物各剂量组的免疫作用与相同剂量的果实组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论天山花楸枝叶提取物的平喘、祛痰、抗炎及免疫调节作用明显优于其果实提取物。

响应面法优化天山花楸总黄酮回流提取工艺

目的通过响应面法优化天山花楸Sorbus tianshanica Rupr.总黄酮回流提取工艺。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取温度为影响因素,总黄酮含有量为评价指标,响应面法优化提取工艺。结果最佳条件为乙醇体积分数50%,料液比1∶18,提取温度90℃,提取3次,每次1 h,总黄酮含有量101.07 mg/g。结论该方法稳定可靠,可用于回流提取天山花楸总黄酮。

从天山花楸中分离筛选纤维素酶产生菌及其酶学性质研究

从天山花楸茎、叶和果实中分离到53株内生细菌,利用刚果红初筛平板获得透明圈较大的4株菌,在此基础上进行摇瓶复筛,得到一株产纤维素酶活力较高的菌株(S11)。该菌发酵培养12h,产羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活力最高达到39.47U/mL。该酶最适反应pH值为5.0,在pH 5.0～6.0范围内较稳定;最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性较好,60～70℃几乎完全失活;各种供试金属离子与化学试剂对酶活性都有不同程度的抑制作用,其中Ca2+、SDS和EDTA的抑制作用最强。

天山花楸叶中总黄酮超声提取工艺研究

目的研究天山花楸中总黄酮最佳提取工艺。方法采用正交实验,分别以比色法测定总黄酮提出率和高效液相色谱(HPLC)图谱中总黄酮相对积分峰面积为指标,考察提取温度、料液比、醇浓度对天山花楸叶中总黄酮提出率的影响。结果最终确定天山花楸叶中总黄酮的最佳提取条件为:温度60℃,醇浓度为60%,料液比1∶10(g∶ml),其中超声功率60 kHz,时间30 min,在相同条件下连续提取两次。结论该提取工艺合理,总黄酮提取率高,质量易于控制。

天山花楸药材质量标准研究

目的制定天山花楸药材质量标准,为该药用植物资源的开发利用提供科学依据。方法以《中国药典》2010版为依据,采用TLC方法对天山花楸药材中金丝桃苷进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法,梯度洗脱,测定天山花楸药材中金丝桃苷、苦杏仁苷的含量。结果天山花楸药材以正丁醇-乙酸乙酯-冰醋酸-水(9∶6∶3∶4)为展开剂,天山花楸中金丝桃苷薄层色谱鉴别,分析显示检查项中暂定天山花楸药材水分不得过8.0%,总灰分不得过9.0%、酸不溶性灰分不得过0.70%。醇溶性浸出物不得少于30%。结论实验方法简单、准确,可用于天山花楸药材的质量控制。

胶束毛细管电泳法测定天山花楸果实中苦杏仁苷的含量

目的建立了一种简单、快速分析天山花楸果实中苦杏仁苷含量测定的胶束毛细管电泳法（MEKC）。方法采用熔融石英毛细管（58．5cm×75μm，有效长度为48．5cm），缓冲体系为70mmol·L。的硼砂-200mmol．L^-1的十二烷基硫酸钠（pH9．50）；分离电压10kV（＋）→（-）；电泳时间40min;电泳温度25℃；压力进样0．5psi×10s；柱上检测Uv215nm（二极管阵列检测器）。结果苦杏仁苷在20min内得到较好分离，在25～225μg·mL^-1范围内与峰面积线性关系良好，线性方程为：Y=776．66X-6637．9（r=0．9997），样品平均回收率为100．8％，RSD值为2．8％。结论该方法简单、快速，结果准确可靠，可用于天山花楸中氰苷类成分测定及质量控制。

苯酚-硫酸法测定天山花楸果实中多糖含量

目的建立新疆天山花楸果实多糖含量测定方法。方法采用苯酚-硫酸法,以葡萄糖为对照品,检测波长490nm。结果天山花楸果实中多糖含量为4.11%,平均加样回收率为98.7%,RSD 1.8%(n=6)。结论该法操作简便,结果准确,重复性好,可用于天山花楸果实多糖的含量测定。

天山花楸平喘胶囊的提取工艺研究

目的优选天山花楸平喘胶囊的最佳提取工艺。方法以浸膏得率、总黄酮和氰苷含量为指标,以乙醇体积分数、提取温度、乙醇用量、提取时间为考察因素,采用正交设计法筛选最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为15倍量体积分数40%乙醇,提取温度40℃,提取3次,每次1h。结论验证实验结果表明,优选出的工艺合理可行。

天山花楸叶中多糖的含量测定及抑菌作用研究

目的测定天山花楸叶中多糖的含量并研究其抑菌作用。方法采用苯酚-硫酸法提取天山花楸枝叶中多糖,并测定多糖的含量,采用对照实验研究天山花楸多糖的抑菌作用。结果天山花楸枝叶中多糖的平均含量为2.56%;天山花楸枝叶中多糖具有一定的抑菌作用,且对枯草杆菌的抑菌作用较明显。结论该方法简便,结果准确,为进一步研究天山花楸枝叶提供实验依据和参考价值。

外标法与相对校正因子法测定天山花楸黄酮含量的比较

目的比较外标法与相对校正因子法测定天山花楸黄酮含量的差别。方法采用高效液相色谱(HPLC)外标法测定天山花楸中金丝桃苷、芦丁、异槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰素-3-O-(6″-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷的含量;以金丝桃苷为内标物,采用HPLC相对校正因子法建立金丝桃苷与芦丁、异槲皮苷、槲皮素-3-O-(6″-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰素-3-O-(6″-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷的相对校正因子,根据相对校正因子计算5种黄酮成分的含量,比较外标法与相对校正因子法的差异。结果 T检验外标法与相对校正因子法测定结果,差异无统计学意义(P>0.05)。结论外标法和相对校正因子法都可以用来测定天山花楸黄酮含量,但在缺少对照品或大批量检测的情况下,采用相对校正因子法测定天山花楸中的芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素-3-O-(6″-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰素-3-O-(6″-O-丙二酰基)-β-D-葡萄糖苷的含量快速可行,可作为新的质量评价模式用于天山花楸黄酮成分的质量评价。

维药天山花楸果实化学成分研究

目的研究天山花楸(Sorbus tianschanica Rupr.)果实化学成分。方法采用硅胶柱色谱法,运用IR、NMR波谱分析技术解析化合物结构。结果从天山花楸果实中分离鉴定了5种化合物:金丝桃苷(Ⅰ)、绿原酸丁酯(Ⅱ)、绿原酸甲酯(Ⅲ)、苹果酸-1-甲酯(Ⅳ)、苹果酸-1-乙酯(Ⅴ)。结论 5种化合物均为首次从该植物果实中分得,化合物Ⅱ为蔷薇科花楸属植物中首分。

天山花楸口服液制备工艺研究

优选天山花楸果实口服液制备工艺参数。以总黄酮含量为指标,采用正交实验考察。最佳制备工艺为5倍量溶剂(水),温度为80℃,提取2次,每次2h。花楸果实口服液的制备工艺准确,简便,可以满足生产要求。

天山花楸化学成分的液质联用分析

[目的]采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术识别天山花楸总黄酮类中的化学成分。[方法]反相C18色谱柱,以乙腈-0.3%甲酸为流动相,检测波长360 nm,梯度洗脱。利用紫检测器和电喷雾质谱负离子模式在线检测化学成分,扫描范围250~700 amu。通过此方法分析糖苷及其苷元。[结果]通过标准品对比及解析质谱,识别了7个化合物,分别为绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮素3-O-己糖苷、槲皮素3-O-己糖苷丙二酸复合物、山奈素3-O-己糖苷、山奈素3-O-己糖苷丙二酸复合物。[结论]HPLC/ESI-MS2技术可准确迅速识别天山花楸黄酮类化合物,方法稳定可靠。

高效液相色谱法测定天山花楸中金丝桃苷的含量

目的:建立天山花楸枝叶中金丝桃苷的含量测定方法。方法:采用HPLC Shim-pack VP-ODS柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(25:75,V/V),流速为1.0ml/min,柱温为25℃,检测波长为360nm。结果:金丝桃苷在0.04～0.32mg/ml之间线性关系良好,r=0.9992,平均回收率99.7%,RSD为2.6%;结论:本法快速、灵敏、准确、可靠、重复性好,可用于天山花楸药材的质量控制。

天山花楸正丁醇部位降糖效果研究

[目的]对天山花楸的有效成分进行提取分离,探索正丁醇部位的降糖效果。[方法]采用回流提取法对天山花楸进行提取,梯度洗脱,获得正丁醇部位,以链脲佐菌素(STZ)诱发小白鼠糖尿病模型,利用该部位进行降血糖试验。[结果]正丁醇部位给药组与模型组相比,有明显降糖效果。[结论]天山花楸具有一定的抗糖尿病作用。

天山花楸果实多糖的提取工艺优化

为确定以花楸果实多糖的提取工艺,先用分光光度法测定超声提取的天山花楸不同部位多糖的含量,再设计正交试验筛选超声提取天山花楸果实多糖的最佳工艺条件。结果表明:天山花楸各部位中果实含糖量最高,为4.63%。最佳工艺条件为以95%乙醇溶液醇沉、料液比1:45(g/mL)、超声时间45min、超声功率240W,天山花楸果实中多糖含量可达到5.92%。其中,料液比是影响天山花楸多糖得率的显著性因素。

基于网络药理学及分子对接技术探究天山花楸抗哮喘的作用机制

目的通过网络药理学方法和分子对接技术研究天山花楸抗哮喘作用机制。方法依托课题组前期实验结果建立天山花楸化合物库,利用SWISS ADME筛选潜在活性成分;通过TCMSP和BATMAN-TCM数据库收集药物靶点,GeneCards、Herb和DisGeNET数据库获取哮喘相关的靶点;运用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络图,使用R语言进行GO和KEGG富集分析;使用AutoDock进行分子对接。结果筛选出天山花楸作用于哮喘的靶点240个,其中核心靶点19个;GO富集分析主要涉及氧化应激的细胞反应、上皮细胞增殖、膜筏、激活转录因子结合等。KEGG富集通路分析显示天山花楸干预哮喘主要涉及IL-17、肿瘤坏死因子、Toll样受体、Th17细胞分化、HIF-1等信号通路。分子对接结果显示活性成分和关键靶点有良好的结合能力。结论天山花楸可通过多靶点、多途径发挥抗哮喘作用。