新鱼腥草素钠对新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

将96只非免疫健康三黄肉雏鸡随机分为4组,分别接种新城疫病毒La Sota株弱毒活疫苗,同时将新鱼腥草素钠按照不同的剂量皮下注射;在第二次免疫后的第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体、免疫器官指数以及外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值。结果表明,新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值具有一定作用,且与对照组差异显著(P<0.05);但不同给药剂量的新鱼腥草素钠影响不同,其中以中等剂量(2mg/kg)效果最为明显。免疫器官指数的测定表明,新鱼腥草素钠对新城疫疫苗免疫效果的影响不是通过促进免疫器官发育实现的。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

用鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗免疫1日龄SPF雏鸡和普通京粉雏鸡,间隔1、2周后免疫新城疫La Sota疫苗,以单独免疫新城疫La Sota疫苗为对照,免疫后2、3、4和5周对各组鸡采血测定新城疫HI效价,并在免疫5周后用新城疫强毒攻击,计算各组保护率。结果显示,1日龄时首免IBD免疫复合物疫苗间隔不同时间再免疫新城疫La Sota疫苗,与单独免疫新城疫La Sota疫苗相比,新城疫HI抗体水平均无显著差异(P>0.05)。证明IBD免疫复合物疫苗在SPF雏鸡和普通雏鸡上对新城疫La Sota疫苗免疫均无免疫抑制作用。

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株LaSota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验。免疫后,每7d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照。每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性。结果表明,LaSota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护。

重组鸡痘病毒表达的鸡IL-1β、IL-2和髓细胞生长因子对新城疫La Sota疫苗免疫效果影响

为研究在新城疫LaSota疫苗免疫不全的情况下,重组鸡痘病毒(rFPV)表达的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)和髓细胞生长因子(MGF)是否具有免疫增强作用。10日龄SPF鸡随机分成8组(I～VIII),每组18只,每只接种1个半数保护剂量(PD50)的LaSota疫苗,同时免疫不同剂量的表达鸡IL-1β、IL-2或cMGF的rFPV(rFPV-IL-1β、IL-2、cMGF)。结果:rFPV表达的IL-1β、IL-2或cMGF可以消除鸡痘病毒在免疫早期对雏鸡体重增长的影响;一定剂量的IL-1β和IL-2可使鸡脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞的总体水平提高;免疫21d后用新城疫的F48E8强毒经肌肉攻毒,一定剂量的IL-1β和IL-2(I和III组)能提高LaSota疫苗的免疫保护率,而cMGF却没有表现出这种作用。本研究表明rFPV表达的IL-1β和IL-2在一定的剂量下可以增强LaSota疫苗的免疫效果,具有免疫增强作用。

La Sota与V4疫苗F蛋白的B细胞表位活性检测与比较

根据La Sota和V4疫苗株F蛋白B细胞表位预测的结果,进行了表位区的鉴定和比较。将两疫苗株F基因预测存在差异的表位,根据序列位置邻近合并分成6段表位区,分别对每个毒株的6段表位区进行了亚克隆,并对每个毒株的预测区进行了表达。应用建立的Tricine缓冲体系50 g/L^200 g/L线性梯度聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳对表达情况进行了分析,得到5段多肽的大小分别是P1为8.0 ku,P2为10.8 ku,P4为11.6 ku,P5为13.5 ku,P6为10.5 ku。应用La Sota特异性抗血清,利用Western blot-ting对表达的各肽段进行了抗原性鉴定。结果表明,P1、P4、P5、P6段呈阳性反应,说明其中含有线性B细胞表位。这4段分别位于F蛋白的1 aa^48 aa,201 aa^274 aa,377 aa^458 aa和469 aa^530 aa,以前发现的中和性表位均不在这4段区域内。而P2段在West-ern blotting中无抗体反应性,表明它不含线性表位。比较研究发现NDV La Sota与V4株的P4区的B细胞表位活性存在着重要的差异,这种差异可能造成两个毒株的免疫原性差异。

新城疫弱毒疫苗La Sota株对血清4型禽腺病毒致病作用的影响研究

Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)是常见的家禽垂直传播性病毒,感染鸡后可导致心包积液综合征。在生产中,先天感染FAdV-4的雏鸡免疫La Sota疫苗时会明显加重病情,因此我们推测新城疫弱毒疫苗的免疫具有加重或诱发和垂直传播感染的FAdV-4的致病作用。本研究随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种来模拟FAdV-4先天性感染,同时以接种生理盐水SPF鸡胚作为对照。待孵化出雏后,接毒组和对照组各取20只7日龄SPF鸡免疫新城疫Ⅳ系弱毒疫苗(La Sota株),同时各组其余鸡以相同方式接种等量PBS作为对照。结果显示:FAdV-4感染的雏鸡在免疫La Sota株后更容易发生严重的生长抑制和免疫器官损伤,说明免疫La Sota株能显著增强FAdV-4致病性。本研究结果显示,免疫弱毒疫苗La Sota增强了垂直传播感染的FAdV-4致病性,提示家禽养殖业种源净化的重要性。

法氏囊活性肽对新城疫La Sota株弱毒疫苗的免疫增强效果

将7日龄黄羽肉鸡300只均分为对照、常规疫苗剂量配合法氏囊活性肽、常规疫苗剂量减半配合法氏囊活性肽、生理盐水和法氏囊活性肽5组,通过血凝抑制试验测定血清抗体水平和间接ELISA检测鼻腔冲洗液中IgA水平及计算法氏囊指数等试验方法,研究法氏囊活性肽和新城疫La Sota弱毒疫苗配合应用的免疫效果。结果显示,29日龄后,常规免疫剂量配合法氏囊活性肽组的法氏囊指数、血清抗体滴度和IgA水平显著高于对照组(P<0.05),而常规剂量减半配合法氏囊活性肽组与对照组在法氏囊指数、血清抗体滴度和IgA水平上差异不显著(P>0.05);说明法氏囊活性肽对疫苗有免疫增强作用,疫苗剂量减半配合法氏囊活性肽应用可达到常规疫苗免疫效果。

经鸡胚感染的ALV-J对新城疫弱毒疫苗免疫的抑制作用及疫苗株对病毒载量的影响

为了解经鸡胚感染携带J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的雏鸡体内ALV-J对新城疫(ND)弱毒疫苗(La Sota株)免疫的抑制作用以及疫苗免疫后增强ALV-J对雏鸡致病作用的可能性,随机选择50个SPF鸡胚经卵黄囊接种模拟ALV-J感染,同时选取等量SPF鸡胚以相同方式接种PBS作为对照。出雏后于接毒组和对照组各取20只SPF鸡在7日龄时免疫ND弱毒疫苗(La Sota株)。2~6周龄时,记录各组鸡的体重和免疫器官指数,并对雏鸡的NDV抗体水平和血液ALV-J病毒载量进行动态检测。结果显示,感染ALV-J的SPF鸡5、6周龄时体重显著低于PBS对照组(P<0.05),而感染ALV-J再免疫新城疫弱毒疫苗后SPF鸡体重进一步降低(P>0.05);与PBS对照组相比,6周龄时感染ALV-J的SPF雏鸡胸腺萎缩和脾脏肿大(P>0.05),免疫新城疫弱毒疫苗后胸腺和脾脏损伤加剧(P<0.05);3、4周龄时感染ALV-J再免疫ND弱毒疫苗组的雏鸡NDV抗体水平极显著低于仅免疫ND弱毒疫苗组(P<0.01);4周龄时免疫弱毒疫苗后的SPF鸡血液中ALV-J病毒载量高于未免疫组(P<0.01)。研究表明,感染ALV-J的雏鸡在免疫ND弱毒疫苗(La Sota株)后增强了ALV-J对SPF雏鸡的致病作用,提示净化种源的重要性。

新城疫弱毒活疫苗中FAdV-4的分离鉴定及分子特征

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd V污染,探讨国内鸡群中FAd V感染和流行的可能原因。【方法】应用本实验室建立的FAd V PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAd V分离鉴定。经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征。【结果】分离到一株禽腺病毒,命名为L160962。基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9%-100%,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3%,但与A、B、D和E种FAd V的相似性分别为79.0%-83.3%。系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9%以上,应划分为血清4型FAd V。基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近。【结论】我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAd V污染,这可能是我国鸡群中FAd V大面积感染和流行的原因之一。