用Southern印迹技术检测9种恶性淋巴瘤细胞系IgCλ基因的重排(英文)

成熟B细胞具有Ig重链和轻链的基因重排,而大多数非B细胞来源的造血细胞仍维持在胚系结构.这种Ig基因重排可作为一个敏感的特异指标,即使小于5%克隆性细胞群,也可证明其克隆性.淋巴瘤为恶性克隆起源的血液病,Ig基因的重排测定可以帮助其分型和预示早期复发.本文用Southern印迹技术分析人9 种恶性淋巴瘤细胞系,并于正常胚系DNA比较.这9种恶性淋巴瘤细胞系由美国国立癌症研究所提供,均为B细胞恶性淋巴瘤.实验结果表明,正常胚系DNA lgCλ基因表现为14Kb,8Kb,5Kb片断,SU-DHL-2细胞系表现为重排,比正常胚系细胞多出一个 4Kb片断,NU—DHL—1细胞系亦为重排,分别为13.5Kb,7Kb,4.9Kb和3Kb.Raji细胞系亦有3Kb重排,SB细胞系表现为13,5Kb,7Kb,4.7kb重排,Daudi细胞系亦是如此.8392细胞系缺失5Kb片断,仅SU-DHL-4,SU-DHL-5,PA-3细胞系维持胚系结构.每种细胞系个体的特异性重排是其恶性克隆起源的基因标志,这对于了解B淋巴细胞肿瘤生成,发展,演变的机制有重要意义.B 淋巴细胞起源的恶性肿瘤中,Cλ基因的重 排为20%～75%,而T淋巴细胞起源的恶性肿瘤中,Cλ基因的重排为0%.在髓系起源的细胞中亦无Cλ基因的重排,因此Cλ基因的重排可鉴别T,B细胞的起源和淋,粒细胞的起源.因为每种恶性克隆均有自己的Cλ基因的重排方式。

Southern印迹技术检测人9种恶性淋巴瘤细胞系IgC_λ基因的重排

用Southern印迹技术分析人9种恶性淋巴瘤细胞系,并与正常胚系DNA相比,胚系DNAIg C_2基因表现为14kb、8kb、5kb片断,而Su-DHL-2、Nu-DHL-1、Raji、SB、Daudi细胞系表现为重排,8392细胞系表现为部分缺失,仅Su-DHL-4、Su-DHL-5、PA-3表现为胚系结构.每种细胞系个体的特异性重排是其恶性克隆起源的基因标志.这对于了解B淋巴细胞肿瘤生成、发展、演变的机制.鉴别髓、淋细胞和T、B细胞的恶性起源、基因分型、判断药物敏感性、检测微小残留疾病均有重要意义.

地高辛标记探针Southern印迹杂交技术要点及改进

Southern印迹杂交技术是检测特定DNA片段的常规方法之一,其操作程序繁琐,对基因组DNA的提取、纯化、酶切等均有较高要求,要获得理想杂交结果需要反复摸索。总结地高辛标记探针Southern印迹杂交的技术要点,并结合具体操作提出改良方案。

化学发光技术在Southern印迹杂交中的应用

目的:探讨化学发光技术(CSPD)在Southern印迹杂交中的应用情况。方法:随机引物法地高辛标记模板,化学发光法直接检测探针标记效率,进行模拟杂交确定最适探针浓度、检测探针敏感性。结果:化学发光法直接检测探针标记效率为0.1 pg,模拟杂交中化学发光法检测探针敏感性达到0.03 pg,最适探针浓度为40 ng/ml。结论:化学发光技术检测敏感性高,可用于基因组Southern印迹杂交检测单拷贝基因。

计算机模拟分子印迹技术用于环境污染物吸附的研究

计算机模拟技术为解决分子印迹材料在环境污染物吸附应用中面临的关键难题提供了理论依据和技术支撑。模拟技术可以指导材料结构设计与优化,扩大材料的适用范围,揭示材料的吸附动力学机理,并辅助材料的高效筛选。文章将综述计算机模拟在分子印迹技术中的应用,包括材料结构设计、吸附性能预测、吸附动力学模拟和材料筛选四个方面,这对扩大分子印迹技术的应用范围,发展高效、低成本的专一性吸附材料具有重要意义。研究表明,计算机模拟的全面应用可大幅提高分子印迹材料对广谱环境污染物的去除效率。未来应加强模拟模型的优化与实验结果的验证,以加速高性能分子印迹材料的开发。

分子印迹技术在大环内酯类药物检测中的应用

分子印迹技术是模拟酶-底物、抗原-抗体之间的相互作用,对印迹分子进行专一识别的技术,能够特异性识别模板或类似物,常被用于分析样品的预处理,可对样品进行高效提取和净化。大环内酯类药物是畜牧业中常用抗生素之一,广泛用于畜禽呼吸道、胃肠道感染等疾病的预防与治疗,但不规范使用可能导致其在动物产品及环境中残留,对人类健康产生威胁。文章针对分子印迹技术对大环内酯类药物残留检测的预处理技术研究进展进行综述,重点对分子印迹固相萃取和磁性分子印迹固相萃取进行介绍,并对分子印迹技术在大环内酯类药物残留分析预处理的应用前景进行展望,为优化大环内酯类抗生素检测前处理方法提供参考。

基于表面印迹技术的双酚A磁性分子印迹聚合物的制备、表征及应用

目的制备双酚A(bisphenol A,BPA)磁性分子印迹聚合物(magnetic molecularly imprinted polymer,MMIPs)并研究其吸附性能和在奶粉检测中的应用。方法以双酚A为模板分子,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyl triethoxysilane,APTES)为功能单体,采用反向微乳法和表面印迹技术制备了核壳型SiO2包裹Fe3O4磁性分子印迹聚合物(Fe3O4@SiO2 MMIPs),并对其进行透射电镜、扫描电镜、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射、热重分析和振动样品磁强计表征,并研究Fe3O4@SiO2 MMIPs的吸附性能和在奶粉检测中的应用。结果制备出的双酚A磁性分子印迹聚合物选择性好,吸附性能好,结合高效液相色谱法,成功应用于奶粉中双酚A的检测。双酚A在5~200μg/kg范围内呈现良好的线性关系,定量限为1.67μg/kg,回收率为89.9%~92.3%,日内、日间精密度均小于4.0%。结论Fe3O4@SiO2 MMIPs是一种较好的双酚A富集材料,可用于奶粉中双酚A检测的前处理工艺。

7种细菌性虫媒病病原体的反向线状印迹杂交检测技术的建立

【目的】建立快速高效的细菌性虫媒病的检测方法。【方法】运用反向线状印迹杂交技术(reverse line blot,RLB),通过对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型(Salmonella enterica subsp.enterica serovar Typhimurium)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)7种细菌的核糖体16S RNA进行序列比对,利用DNAStar和Primer premier软件设计出了用于PCR-RLB杂交反应的基因组DNA样品进行PCR扩增的通用引物(RLB-F,RLB-R),和特异性探针以及通用探针(Catch-all),通用下游引物(RLB-R)5'端用生物素标记和探针5'端连接氨基团(NH_(2)^(+))。【结果】成功建立高效、快速、特异且能同时检测7种细菌PCR-RLB的方法,并确定了通用引物最佳浓度为25μmol/L,金黄色葡萄球菌和福氏志贺菌探针的最佳浓度分别为50μmol/L,其他5种病原探针的最佳浓度为100μmol/L。使用PCR-RLB检测方法,可对上述7种细菌的检测敏感性可达到10^(-6)~10^(-11) ng/μL,远远高于PCR的10^(-3)~10^(-8) ng/μL。【结论】首次同时对7种细菌进行检测,并确定了不同引物及探针的最佳浓度。该方法不仅提高了检测效率,同时还提高了检测的灵敏度,为开发新的检测手段提供了理论依据。

分子印迹技术在食品安全检测领域的应用研究进展

食品中有害化合物日益严格的检测限量、复杂多样的检测场景,对检测技术提出了更高的要求。目前食品安全检测技术仍存在检测成本高、周期长、样本前处理复杂等问题。分子印迹聚合物作为一种仿生识别材料,与传统生物抗体相比,具有成本低、制备周期短、稳定性高(可简化前处理)的优点,在食品安全检测领域应用广泛。本文首先介绍了分子印迹技术的原理、优势及劣势,总结了分子印迹聚合物的本体聚合法、原位聚合法、悬浮聚合法、溶胶-凝胶聚合法以及沉淀聚合法等制备技术,之后列举了其在检测食品中农兽药残留、非法添加剂、微生物及其毒素等方面的应用,最后展望了分子印迹技术在食品安全检测领域的发展趋势,以期为分子印迹技术在分析检测领域的深入发展与应用提供研究思路和理论依据。

用于复杂生物样品体系分离与识别的分子印迹技术最新进展

由生物样品中复杂组分所导致的基质效应会严重影响分离分析技术的准确性、灵敏度与可靠性。免疫亲和技术作为降低或消除基质效应的方法已被广泛应用于诊断分析和蛋白纯化等领域,但该技术仍存在明显的缺点,如成本高昂、制备流程繁琐、保存条件苛刻以及配体浸出等问题。目前,如何通过有效降低或消除复杂生物样品中的基质效应来实现痕量目标分析物的分离及识别仍是一个具有挑战性的问题。分子印迹技术(molecular imprinting technology,MIT)一直被广泛应用于固相萃取与色谱分离等领域,随着MIT的发展,各种新型印迹策略被提出;其中,分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymer,MIP)作为一种能够模拟抗原-抗体间相互作用的高分子聚合物,可以从各种复杂生物样品中提取出目标分析物,从而有效消除基质效应的影响。MIP不仅拥有高特异性与高亲和力的优点,而且与抗体和适配体等生物大分子相比,MIP还具有稳定性高、成本低廉以及制备简便等优势。近年来一些基于MIT的传统分离技术得到了深入发展,其中包括色谱固定相以及固相萃取吸附剂等。此外,结合了MIT与高灵敏检测技术的分析方法在疾病诊断和生物成像等领域也受到了广泛关注。本文着重介绍了近年来发展的新型印迹策略,并介绍了基于MIP的分离分析方法在各领域中的应用以及现阶段存在的不足,最后对MIT的未来发展方向做出了展望。

虚拟模板分子印迹技术在食品检测中的应用

虚拟模板分子印迹技术是选择与目标化合物结构、形状和大小相似的化合物作为虚拟模板制备分子印迹聚合物,可有效解决模板泄漏、目标化合物不宜获取或不适合作为模板的问题,是分子印迹技术研究的热点之一。本文综述了近年来虚拟模板分子印迹技术在食品检测领域的农兽药残留、真菌毒素和其他有机污染物中的进展,并分析了该技术的应用前景以及有待解决的问题,为虚拟模板分子印迹技术在食品检测方面的应用提供参考。

浅析分子印迹技术在食品添加剂检测中的应用

本文分析了分子印迹技术的原理和特点,以及其在食品防腐剂、着色剂、甜味剂、酸度调节剂、乳化剂和抗氧化剂等方面的应用研究进展,并提出了分子印迹技术在食品添加剂检测方面的优势和不足,旨在促进分子印迹技术的开发和应用。

分子印迹技术在食品中有害物质选择性检测中的应用研究

分子印迹技术具有稳定性好、选择性强、灵敏度高和操作简便等特点,在食品中有害物质选择性检测领域具有广泛的应用前景。本文重点探析分子印迹技术基本原理、技术种类及技术特点,研究分子印迹技术在食品农药残留、抗生素残留、添加剂等有害物质检测中的具体应用,希望能为相关研究者提供有益借鉴。

一种简捷的Southern印迹杂交方法

在综合前人方法的基础上,发展了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案。使用0 4mol LNaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,晾干膜后无需固定就可以直接用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统,该缓冲系统中仅需10g LBSA作为封闭剂即可。整个洗膜过程可简化为一种溶液、2～3次洗涤。碱变性及转移后的尼龙膜,也可以用于地高辛(DIG)等非放射性检测系统,并可耐多轮杂交和洗脱。本方法可适用于包括高等植物基因组在内的多种生物材料的DNA检测。

分子印迹技术的回顾、现状与展望

分子印迹技术是近年来集高分子合成、分子设计、分子识别、仿生生物工程等众多学科优势发展起来的一门边缘学科分支。分子印迹聚合物由于具有与天然抗体同样的识别性能和与高分子同样的抗腐蚀性能的双重优点 ,因而广泛应用于生物工程、临床医学、环境监测、食品工业等众多领域。本文回顾了分子印迹技术近十多年来的发展过程 ,总结了目前的研究现状 ,并展望了分子印迹技术未来的发展趋势。本文共收录文献 1

分子印迹技术在天然产物分离纯化中的应用

天然产物体系复杂,且有效成分含量低,采用一般的分离方法富集难度较大。分子印迹技术是制备高选择性分离介质的有效技术手段,分子印迹聚合物(MIPs)的选择性强,分离操作简单,在各种分离纯化中展现了良好的应用前景。文章综述了目前分子印迹技术在天然产物的分离纯化中的研究进展。

基于硅胶表面修饰的分子印迹技术研究进展

简述了分子印迹聚合物传统合成方法存在的问题以及表面修饰的分子印迹合成方法新进展 ,重点介绍了基于硅胶表面修饰的 4种分子印迹聚合物合成方法 :牺牲硅胶骨架法、水解缩聚法、化学气相沉积法和接枝共聚法 ,及其在处理放射性污水、毛细管电色谱、高效液相色谱和催化等方面的应用。

分子印迹技术及其在催化领域中的应用

分子印迹技术是制备具有分子识别功能聚合物的一种技术,广泛应用于分离分析和催化领域中,尤其是在模拟酶催化中表现出很高的催化活性和专一性。分子印迹聚合物有多种制备方法,如原位聚合法、悬浮聚合法、表面印迹法、电化学聚合法等。分子印迹催化剂主要以过渡态类似物、底物类似物、产物类似物为模板,以及利用辅酶因子来制备。主要应用在化学反应和生物酶的催化等方面。

分子印迹技术在分析化学中的应用进展

分子印迹技术具有专一性和高选择性的特点,其技术关键是功能单体和模板分子的筛选、聚合及模板分子的洗脱。分子印迹聚合物的制备方法主要有:包埋法、亲和印迹法、冷冻干燥法、表面印迹法等。在分析化学中分子印迹技术广泛用于色谱分析、环境痕量分析、膜分离、手性物质拆分,也可用于分离/富集金属离子、样品前处理、传感器、中药有效成分筛选等。从分子水平上认识分子印迹和识别的机理,探索新的合成方法,实现分子印迹技术从有机相向水相过渡、从非极性溶剂环境转向极性溶剂环境,不断扩展新的应用领域是该技术今后的研究方向。

分子印迹技术用于蛋白质的识别

分子印迹技术是一种新型的高效分离技术。合成含识别蛋白质的分子印迹聚合物具有巨大的应用价值,又极具挑战性,已成为许多分子识别领域工作者的研究热点。本文总结了近10年来该领域的研究进展,讨论了已有不同方法的发展状况以及相对优缺点,阐明了其可能发展的方向和前景。