两个Ⅱ型Waardenburg综合征家系SOX10基因突变分析

目的通过对云南地区2例Ⅱ型Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome typeⅡ,WS2)患者相关基因突变位点进行分析,探讨WS2可能的分子致病原因。方法经知情同意,对具有Waardenburg综合征(waardenburg syndrome,WS)表型的先证者及其家属进行病史采集、体格检查、听力学评估、影像学检查。获取外周血,提取基因组DNA,高通量测序方法对耳聋相关基因进行检测,对先证者及其家属进行突变位点的Sanger测序验证分析。结果两个家系中有4名患者临床表现出虹膜异色和感音神经性耳聋,诊断为WS2。二代测序检出先证者1SOX10基因c.255G>A变异,为无义突变,导致所编码的蛋白质发生截短,可能丧失正常功能,该变异来自其母亲。先证者2及其父亲检测出SOX10基因c.1393C>T变异,为临床意义未明的变异,生物信息软件预测其致病可能性较高,该位点在多个物种间保守性高。结论基因检测可以辅助诊断Waardenburg综合征,SOX10基因c.255G>A、c.1393C>T杂合突变可能是本研究两个家系中WS2患者的分子致病原因。

SOX10基因在内耳发育中的作用

SOX10基因(性别决定区盒基因,SRY-box 10)是调控神经嵴发育的关键转录因子。人类SOX10基因突变会导致神经嵴性疾病,如以耳聋及色素异常为主要表型的Waardenburg综合征。近年来发现SOX10在内耳发育早期即广泛表达于耳板及耳囊,且其突变可导致不同程度内耳畸形。本文重点讨论SOX10基因在内耳发育时期的动态表达,及其在内耳发育中的重要作用。

SOX10基因新突变导致一Waardenburg综合征2型家系的分析

目的通过对WS2的临床分析和候选基因的突变检测,加深对WS2的认识,并探讨Waardenburg综合征2型的分子遗传学特征。方法收集一就诊于湘雅医院耳鼻咽喉科门诊的湖南家系,做出临床诊断,签署知情同意书获取血样。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增MITF、SNAI2、SOX10基因编码区的全部外显子,扩增的PCR产物酶切后在ABI3100自动测序仪上进行正反向直接测序分析,利用GeneTool软件及遗传学网站的信息分析数据。结果 (1)2位患者诊断为WS2;(2)先证者及先证者母亲的SOX10基因的编码区找到了一个国内外未曾报道过的杂合子新突变(c.113delG,p.Gly38AlafsX71),在家系中其他成员和100名家系外健康对照者中均未发现此突变。MITF和SNAI2基因突变检测均正常。结论 (1)本研究对Waardenburg综合征Ⅱ型一家系进行了临床特征和基因突变分析,有助于对该综合征的进一步认识;(2)所发现的SOX10基因(c.113delG,p.Gly38AlafsX71)国内外尚未见报道,属新突变,不仅丰富了人类基因突变数据库,而且为更好地了解该基因的功能提供了新的线索;(3)WS2患者在做基因筛查时SOX10和MITF要作为候选基因。

一例SOX10基因缺失所致的Waardenburg综合征2型合并低促性腺激素性性腺功能减退症的诊断和基因检测分析

低促性腺激素性性腺功能减退症(hypogonadotropic hypogonadism,HH)是以下丘脑–垂体–性腺激素轴功能障碍为主要特征的一类疾病,可致性激素水平低和生育能力受损。伴随嗅觉丧失/减退的HH被称为Kallmann综合征(Kallmann syndrome,KS)。Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)是一种罕见的常染色体显性遗传病,以感音神经性听力损失以及色素沉着异常为主要特征。本研究收集1例不明原因的低促性腺激素性性腺功能减退和先天性耳聋患者的临床资料,该患者进入青春期后无明显第二性征发育,在22q13.1区域(Chr.22:38106433-38525560)存在杂合缺失,至少419 kb,此区域覆盖了SOX10基因。患者父母、妹妹基因测序分析未见异常。通过总结分析该病例特点,分析探讨低促性腺激素性性腺功能减退症与Waardenburg综合征2型在分子生物学上的病因关联,丰富后续遗传学研究的临床资料,同时为此类疾病的诊疗措施提供参考。

人Sox10基因启动子区高甲基化的预测和验证

目的运用生物信息学方法预测人Sox10基因启动子区甲基化情况并进行实验验证。方法从GenBank获取人Sox10基因序列,利用Methyprimer 11.0软件、Li lab、CpG Island Searcher预测其启动子区CpG岛。进一步运用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)方法检测人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中的甲基化情况。结果经过生物信息学分析发现,人Sox10基因启动子区存在2个CpG岛,分别为165(1 241～1 405)bp和105(1 478～1 582)bp。针对这两个CpG岛设计引物行MSP和BSP实验,研究发现,在人多形性胶质母细胞瘤和瘤周组织中Sox10基因启动子区CpG岛均出现部分甲基化,其中在多形性胶质母细胞瘤中的甲基化率为90.5%,在瘤周组织中的甲基化率为28.5%。结论本研究证实了人Sox10基因启动子区CpG岛在多形性胶质母细胞瘤中出现高甲基化,提示其表达下调可能受甲基化调节。

散发性先天性巨结肠与SOX10基因多态性的关联性

目的:探讨先天性巨结肠(HD)患者SOX10基因多态性与HD发病风险的关系。方法:收集散发性HD患者外周血标本95例为病例组,同时选取健康无便秘史患者80例作为对照组。提取外周血DNA,采用PCR和直接测序法分析SOX10基因多态性在病例组和对照组的分布情况。结果:直接测序发现SOX10基因有4个单核苷酸多态性位点(SNP),这些位点在病例组和对照组中分布差异无统计学意义,关联分析未发现SOX10基因的4个SNP位点与HD的发病风险相关。结论:SOX10基因的4个SNPs位点与散发HD的发病风险没有显著相关性,SOX10基因可能不是散发性HD患者的易感基因。

SOX10基因变异所致Waardenburg综合征4C型耳聋一个家系的基因检测及产前诊断

目的探究1个Waardenburg综合征4C型(WS4C)耳聋家系的遗传学病因,并为该家系的胎儿进行产前诊断。方法选取2020年10月23日因双耳感音神经性聋就诊于郑州大学第一附属医院的1例女性耳聋先证者及其家系成员(2代3人)作为研究对象,收集先证者及其家系成员的临床资料。应用全外显子组测序对先证者进行基因检测,使用多重连接探针扩增(MLPA)方法对测序结果进行验证并对先证者父母和胎儿进行检测。结果先证者为1岁8个月女性,双耳极重度感音神经性聋,长期慢性便秘,双眼虹膜异色。先证者母亲为双耳极重度耳聋患者,双眼虹膜异色。先证者父亲听力正常,虹膜颜色正常。基因测序结果提示先证者存在SOX10基因第1~4外显子杂合缺失变异,先证者母亲及其胎儿检测到SOX10基因杂合缺失,父亲SOX10基因拷贝数正常。依据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP1+PP4)。胎儿检测到该变异,将来发展为WS4C型耳聋患者的可能性大,先证者父母在遗传咨询后选择了引产。结论SOX10基因第1~4外显子杂合缺失变异考虑是该WS4C家系致病原因,可用于指导产前诊断。

基于MiniSeq技术分析SOX10,NRG1,NRG3基因单核苷酸多态性与先天性巨结肠症的相关性

目的基于MiniSeq基因测序技术对先天性巨结肠症患者NRG1、NRG3和SOX10基因多个位点单核苷酸多态性进行检测,探讨基因多态性与先天性巨结肠症发病的相关性。方法选择本院在2019年2月到2023年2月期间确诊为先天性巨结肠症患儿74例作为病例组,并将同期83例健康儿童纳入对照组。基于MiniSeq基因测序技术对两组研究对象NRG1、NRG3和SOX10基因7个位点单核苷酸多态性进行检测,探讨不同基因型与先天性巨结肠症发病的相关性。通过Logistic回归分析确定先天性巨结肠症发病的独立危险因素,依据筛选出的因素构建预测先天性巨结肠症发病风险的列线图模型,并验证此模型。结果病例组和对照组患者的7个单核苷酸多态性位点中,rs10748842、rs139884、rs16879552、rs10883866及rs6584400位点各基因型在两组间的分布频率差异均不显著(P>0.05);病例组患者NRG1基因rs2439302位点CG和GG基因型人数显著高于对照组,并且rs7835688位点GC和CC基因型人数显著高于对照组(P<0.05);多因素分析表明,性别、母孕期主/被动吸烟、母亲接触有毒物质、rs2439302-G和rs7835688-C等位基因是影响先天性巨结肠症发病的危险因素,利用这些因素构建的列线图预测模型,内部验证前后曲线下面积分别为0.837、0.841,灵敏度分别为86.5%和89.2%,特异度分别为77.1%、78.3%,准确性良好。结论NRG1是先天性巨结肠症的易感基因,rs2439302-G和rs7835688-C为先天性巨结肠症发病的风险等位基因,而rs16879552、rs6584400、rs139884、rs10748842和rs10883866与先天性巨结肠症发病无明显相关性;基于性别、母孕期主/被动吸烟、母亲接触有毒物质、rs2439302-G和rs7835688-C构建的列线图模型对先天性巨结肠症发病风险有较好的预测效果。

SOX10基因突变致Ⅱ型Waardenburg综合征发病的实验研究

目的通过体外实验探讨SOXl0基因突变E248fs致Ⅱ型Waardenburg综合征（Waardenburgsyndrome，WS）发病的分子机制。方法野生SOX10及其致病突变E248fs表达质粒瞬时转染293T细胞，用荧光素酶活性检测系统观察野生／突变SOXIO蛋白对其靶基因MITF转录活性的调控作用以及突变蛋白对野生SOXIO蛋白功能的影响；用生物素标记的含序列eattgtc的DNA寡核苷酸链探针分别沉淀SOX10和E248fs蛋白，检测野生／突变SOXIO蛋白与靶基因MjTF启动子的结合力；免疫共沉淀检测观察并分析SOXIO和E248fs蛋白稳定性变化。结果E248fs突变蛋白完全失去调控MjTF启动子转录活性作用（P〈0．01），并对野生SOXIO蛋白功能产生显性负效应作用（P〈0．05），其与野生SOXIO蛋白均可与MJTF启动子特异DNA序列cattgtc结合，但较野生SOXIO蛋白衰减加快。结论尽管E248fs具有显性负效应，但其稳定性降低，使得其影响靶基因MITF转录活性，导致黑色素合成减少，最终以单倍体剂量不足效应致Ⅱ型WS。

瓯江彩鲤体色相关基因Sox10的分离与表达分析

为探明鱼类体色变异的相关调控因子，采用RT-PCR及RACE技术获得总长度为2830bp的瓯江彩鲤（Cyprinus carpio var．color）SoxlO基因eDNA序列。该基因序列的5’和3’非编码区分别为9bp和1375bp，开放阅读框1446bp，编码481个氨基酸。氨基酸序列的系统发育分析表明，瓯江彩鲤Soxl0基因的氨基酸序列与部分物种的相似性在59％～94％。RT-PCR分析表明，该基因在瓯江彩鲤皮肤、肌肉、眼睛和鳔表达量最高，鳃和心表达量次之，肾和肝没有表达。荧光定量PCR分析显示，Soxl0基因在体色类型为白色（“粉玉”体色）的表达量显著地高于其他体色（P〈0．05），“粉花”黑色皮肤中的表达量最低，显著低其他体色类型（P〈O．05），而其他体色类型的表达差异不显著俨〉0．05）。结果发现，SoxlO基因在瓯江彩鲤的体色变异中发挥着调控作用。

一个Waardenburg综合征Ⅱ型家系SOX10基因的突变分析

目的对1例Waardenburg综合征Ⅱ型先证者及其家系成员进行SOX10基因的突变分析，探讨其可能的分子生物学致病原因。方法抽提先证者及其家系成员的外周血基因组DNA，芯片捕获高通量测序方法对MITF、PAX3、SOX10、SNA12、END3和ENDRB基因的全部外显子及其侧翼序列进行检测。根据高通量测序结果，对先证者及其父母进行突变位点的Sanger测序验证分析。结果Sanger测序结果显示先证者存在SOX10C．127c〉T（P．R43X）杂合突变，导致SOX10基因第43位编码精氨酸的密码子（CGA）突变为终止密码子（UGA），产生截短蛋白，影响蛋白质功能的正常发挥。经检索人类基因突变数据库，该突变为未报道过的新突变。患儿父母未检测到该突变。结论先证者SOX10基因C．127c〉T（P．R43X）杂合突变可能是其分子生物学致病原因。

两例WS2患儿的家系及SOX10基因变异分析

目的对2例中国云南地区Ⅱ型Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome type 2,WS2)患儿进行耳聋基因筛查,探讨其分子生物学致病原因。方法对先证者及家系成员进行病史采集、体格检查、听力学评估及颞骨CT检查。获取外周血提取基因组DNA,采用第二代测序方法对406个耳聋基因编码区的全部外显子及部分内含子和启动子进行检测,对先证者及其父母进行变异位点的Sanger测序验证分析。结果2例患者临床表现为双侧极重度感音神经性聋,双侧虹膜异色,诊断为WS2,二代测序分别检出SOX10基因杂合变异(c.698-2A>C;c.346C>G(p.Q116E)),根据美国医学遗传学与基因组学学会(American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG)指南判定为致病性变异,家系内均为自发突变。二代测序结果经Sanger测序证实。结论本研究在中国人群中发现2个SOX10基因变异位点(c.698-2A>C;c.346C>G),丰富了该基因变异的临床表型。

SOX10点突变致Waardenburg综合征2型一家系分析

目的对1例Waardenburg综合征2型先证者及其家系成员进行基因测序分析,探讨其可能的分子生物学病因,进一步探讨Waardenburg综合征2型的分子遗传学特征。方法对所收集家系进行临床诊断,提取家系成员的外周血DNA,目标基因进行区域捕获测序,扩增的PCR产物酶切后进行测序分析,利用软件及遗传学网站的信息分析数据。结果先证者存在SOX10基因杂合突变c.346C>T(p.Q116X),该突变为无义突变,可能造成蛋白截短体,经家系验证分析,先证者父母该位点均无变异,此变异为新发突变,保守性分析提示具有高度保守性,多个物种氨基酸序列一致。结论 SOX10基因c.346C>T(p.Q116X)在此Waardenburg综合征2型一家系为一新发突变位点,该突变可能造成蛋白截短,进而影响SOX10基因功能,该结果为进一步深入研究Waardenburg综合征,了解SOX10基因功能提供了线索。

西藏地区Waardenburg综合征患者基因突变及人工耳蜗植入术后听觉言语康复效果分析

目的分析中国西藏地区一Waardenburg综合征家系的临床特征及致病基因,总结Waardenburg综合征患者人工耳蜗植入术后听觉言语康复效果。方法采集该家系成员的病史、体格检查、听力及影像学等临床资料,利用已知耳聋基因目标区域高通量测序和Sanger测序验证,进行耳聋致病基因分析与鉴定。通过电话随访调查患者人工耳蜗术后听觉言语康复效果,使用量表包括听觉行为分级(CAP)、言语可懂度分级(SIR)、有意义听觉整合量表(MAIS)、有意义言语使用量表(meaningful use of speech scale,MUSS)。结合文献回顾,分析Waardenburg综合征患者人工耳蜗术后康复效果。结果该患儿表现为重度感音神经性耳聋,伴虹膜异色,皮肤异常,诊断为II型Waardenburg综合征。高通量测序及Sanger测序验证结果显示患儿携带SOX10基因c.409Adel杂合突变,患儿父母均未携带此突变,考虑为基因突变导致,该突变此前尚未报道。患儿人工耳蜗术后9年听觉言语康复效果良好,CAP、SIR分级分别为6级、4级,MAIS、MUSS评分分别为37分、32分。结论本研究发现1例西藏地区II型Waardenburg综合征患者新发SOX10基因突变位点c.409Adel,丰富了中国藏族人群致聋基因突变谱。Waardenburg综合征患者人工耳蜗术后远期听觉言语康复效果满意。

Waardenburg综合征致病基因SOX10重组真核细胞表达质粒的构建、表达及意义

目的通过构建基因SOX10及其突变体表达质粒初步研究其外源性表达和定位表达，为研究Waardenburg综合征（Waardenburgsyndrome，WS）发病机制提供实验基础。方法通过分子克隆技术双酶切pECE-SOX10和pCMV—Flag后连接构建SOX10基因重组真核细胞表达质粒pCMV-SOX10-Flag，以其为模板分别构建SOX10基因新发突变G37fs、G38fs和E248fs表达质粒，DNA测序鉴定。SOX10、G37fs、G38fs和E248fs表达质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞，Western印迹和细胞免疫荧光分别检测和观察野生和突变SOX10蛋白在NIH3T3细胞中的外源性表达和定位表达。结果SOX10及其突变体G37fs、G38fs和E248fs表达质粒经DNA测序鉴定序列正确，三者在NIH3T3细胞中正确表达，E248fs与SOX10仅在细胞核中分布，G37fs和G38fs在细胞质与细胞核中均有分布。结论成功构建了SOX10基因及其突变体真核细胞表达质粒，突变对SOX10蛋白的亚细胞定位产生影响，为在体外实验进一步研究中国人SOX10基因突变致WS发病的分子机制奠定了实验基础。

SOX10新突变致Waardenburg综合征Ⅱ型家系基因突变研究

目的通过对Waardenburg综合征II型(WSⅡ型)一家系临床分析和候选基因的突变检测,丰富了WSⅡ型的基因突变谱,并探讨WSⅡ型的分子遗传学特征。方法问卷式采集1个WSⅡ型家系的临床资料,绘制家系图谱,签署知情同意书并获取先证者及一级亲属的血样。通过聚合酶链反应(Polymerase chainreaction,PCR)扩增SOX10、SNAI2、PAX3、MITF、EDNRB和EDN3候选基因编码区的所有外显子。相应扩增产物酶切后进行测序,利用Mutation Surveyor 4.0软件及分子生物学网站的信息分析数据。结果根据患者及其母亲的临床表现和相关检查结果结合WSⅡ的诊断标准,为WSⅡ型;家系中SNAI2、PAX3、MITF、EDNRB和EDN3基因检测未发现突变;在家系先证者及母亲的SOX10基因的编码区发现了一个国内外尚未报道过的新突变SOX10(c.482del GTAGC),而在家系其他成员中均未发现此突变。结论此次研究对WSⅡ型一家系进行临床分析和基因突变研究,所发现的SOX10(c.482del GTAGC)基因突变国内外尚未见报道,属新突变;不仅丰富了人类基因突变数据库,而且为Waardenburg综合征的病因学研究和临床研究提供了有利资料。

Waardenburg综合征4个家系的临床表型与基因变异分析

目的探讨4例Waardenburg综合征(WS)先证者的致病原因。方法选取2021年7月至2022年3月就诊于郑州大学第一附属医院的4例WS先证者及其家系为研究对象。先证者1为2岁11月龄女性患儿,于2021年11月3日因"言语不清2+年"就诊;先证者2为10岁女性患儿,于2021年7月13日因"双耳听力差8年"就诊;先证者3为28岁男性患者,于2022年3月23日因"右耳听力下降10+年"就诊;先证者4为2岁龄男性患儿,于2022年3月9日因"左耳听力差1年"就诊。收集先证者及其家系成员的病史资料,并进行听力学检查和颞部CT检查。提取先证者及其家系成员血样基因组DNA进行全外显子组测序,并进行Sanger测序验证。结果先证者1表现为双耳极重度感音神经性耳聋、双眼蓝色虹膜及内眦外移,存在父源PAX3:c.667C>T(p.Arg223 Ter)无义杂合变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)的变异评级指南,该变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4),先证者1确诊为WSⅠ型。先证者2表现为右耳中度感音神经性耳聋、左耳极重度感音神经性耳聋、双眼蓝色虹膜及内耳发育畸形,存在SOX10:c.1018_1022del(p.Val340Serfs Ter60)移码杂合变异,先证者2的父母此位点为野生型,考虑为新发变异。根据ACMG的变异评级指南,SOX10:c.1018_1022del变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4+PM6),先证者2确诊为WSⅡ型。先证者3表现为右耳极重度感音神经性耳聋、左耳听力未见异常。存在SOX10:c.23delC(p.Ser8TrpfsTer5)移码杂合变异,变异来源未知。根据ACMG的变异评级指南,SOX10:c.23delC变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4),先证者3确诊为WSⅡ型。先证者4表现为左耳极重度感音神经性耳聋、右耳听力未见异常,存在母源性MITF:c.7G>T(p.Glu3 Ter)无义杂合变异。根据ACMG的变异评级指南,MITF:c.7G>T变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4),先证者4确诊为WSⅡ型。结论本研究通过基因检测确诊了4例WS型患者,能够为WS家系提供了分子病因学诊断和遗传咨询,进一步增强了临床医师对WS的认识。

一个Waardenburg综合征家系的致病基因突变分析

目的分析一个Waardenburg综合征(WS)家系成员的临床表型和基因突变。方法收集一个WS综合征患者家系的临床资料,采用Sanger测序法对家系成员进行WS综合征相关基因的外显子测序分析。结果家系中共有2例患者,先证者及其弟弟具有WSⅡ的先天性感音神经性耳聋和虹膜色素异常的临床特征,均携带SOX10基因新发c.52G>T(p.E18X)杂合致病突变;先证者父亲、母亲和姐姐SOX10基因序列测序分析均未见异常。结论在一个Waardenburg综合征家系中发现未见报道的SOX10基因新发突变,对于该病遗传咨询和产前诊断具有重要意义。

七例Waardenburg综合征患者基因突变分析

目的对7例Waardenburg综合征患者的MITF、PAX3、SOXl0和sNA砣基因进行突变分析，为该病的基因诊断提供分子遗传学依据。方法应用Sanger测序检测MITF、PAX3、SOⅪ0和SNA陀基因的全部外显子，并用Polyphen2预测非同义SNP对蛋白质功能的影响。结果共检测到7个突变位点，分别为c．649—651delAGA（p．R217del）、c．72delG（p．G24{s）、c．185T〉C（p．M62T）、c．118C〉T（p．Q40X）、c．422T〉c（p．L141P）、C．640C〉T（p．R214x）和c．128G〉T（p．G43V）。其中，MITF基因的c．649—651delAGA（p．R217del）和c．640C〉T（p．R214X）突变位点为已报道的，PAX3基因的c．72delG（p．G24fs）、c．185T〉C（p．M62T）、c．118C〉T（p．Q40X）、c．128G〉T（p．G43V）突变和SOX10基因c．422T〉C（p．L141P）突变为未见报道的新突变。非同义SNP c．185T〉C（p．M62T）、c．128G〉T（p．G43V）和c．422T〉c（p．L141P）均考虑为有害突变。结论对Waardenburg综合征患者的基因突变分析结果丰富了Waardenburg综合征致病基因的突变谱，为明确病因提供了重要依据。

中国人群Waardenburg综合征的临床及基因变异特点分析

Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)是一种较为罕见的遗传病,又称听觉-色素综合征,呈常染色体显性或隐性遗传。在中国人群中WS的致病基因主要包括PAX3、MITF、SOX10和EDNRB。本文对中国人群WS相关的基因变异、分子机制及研究现状做一综述。