拟赤梢鱼卵巢早期发育与sox3基因cDNA克隆及表达分析

为初步阐明拟赤梢鱼(Pseudaspius leptocephalus)卵巢发育特征及sox3(sry related high mobility group box 3)基因在其卵巢发育过程中的作用,本研究通过组织切片观察了拟赤梢鱼卵巢早期发育过程,利用RACE技术克隆了该鱼sox3基因c DNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术分析了sox3基因在拟赤梢鱼不同组织及性腺不同发育时期的表达模式。结果显示,拟赤梢鱼卵巢在孵化后45 d分化形成,160 d时由Ⅰ期进入Ⅱ期,孵化后360 d,卵巢仍处于Ⅱ期。拟赤梢鱼sox3基因cDNA全长为1800 bp(GenBank登录号:MT952206),编码299个氨基酸,存在保守的HMG(histidine,methionine,glycine-rich)结构域。氨基酸序列比对和系统进化树分析结果显示,拟赤梢鱼SOX3蛋白与斑马鱼(Danio rerio)和翘嘴鲌(Culter alburnus)亲缘关系最近。此外,sox3基因在拟赤梢鱼卵巢中表达量最高,其次是脑和眼睛,在精巢和其他组织中微量表达;在性腺分化过程中,sox3基因在卵巢中表达量显著高于未分化性腺和精巢,在卵巢发育阶段表达量不断升高,而在精巢中持续低水平表达。综上,本研究推测sox3基因主要参与拟赤梢鱼卵巢的分化和发育。

MicroRNA-193b通过靶向调控SOX3基因对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miRNA-193b对宫颈癌细胞Hela增殖、凋亡的作用机制。方法将对数生长期的宫颈癌Hela细胞随机分为miRNA-193b模拟物(miRNA-193b-mimics)组、miRNA-193b模拟物阴性对照(miRNA-193b-mimics-NC)组及对照(Control)组。Real-time PCR检测三组细胞miRNA-193b表达水平;CCK-8法检测Hela细胞的细胞活力;EDU染色和细胞克隆实验检测Hela细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Real-time PCR、Western blot检测SOX3mRNA和蛋白的相对表达水平;双荧光素酶活性实验验证miRNA-193b对SOX3的靶向作用。结果与Control组和miRNA-193b-mimics-NC相比,miRNA-193b-mimics组细胞miRNA-193b表达水平明显增加(P<0.05);细胞活力与增殖能力明显下降,细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);SOX3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示SOX3为miRNA-193b的靶基因。结论MicroRNA-193b调控宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的作用机制可能与靶向调控SOX3表达有关。

金钱鱼Sox3基因cDNA克隆及组织表达

金钱鱼是中国重要经济型鱼类,但其人工繁殖难以取得成功。本研究利用cDNA末端快速扩增法(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)克隆了金钱鱼(Scatophagus argus)Sox3基因cDNA全长序列,分析该基因序列在不同物种间的差异,并用RT-PCR半定量方法分析其在雌、雄组织中的表达差异。结果表明:金钱鱼Sox3 c DNA全长1270 bp,包括5’非翻译区(5’-UTR)217 bp、3’非翻译区(3’-UTR)150 bp和开放阅读框(open reading frame,ORF)903 bp,编码300个氨基酸,该氨基酸序列34104位为HMG保守盒。金钱鱼Sox3氨基酸序列与大黄鱼(Larimichthys crocea)的同源性最高,为99.3%,其次是金头鲷(Sparus aurata),为98.7%。Sox3前体蛋白的系统进化树显示,金钱鱼与大黄鱼亲缘关系最近。金钱鱼Sox3基因的组织表达有明显的组织特异性及性别差异,在性腺中表达量最高,雄性个体脑和垂体次之,肌肉、肾脏、心脏和肠有低量的表达,肝脏、脾脏、胃和鳃中未检测到表达;雌性个体在卵巢中观察到表达水平最高,脑、垂体和鳃次之,脾脏、肌肉、肾脏、心脏和肠中有低量的表达,肝脏和胃中未检测到表达。本研究为研究Sox3基因在金钱鱼人工繁殖与养殖产业方面提供理论参考。