miR-412抑制SOX6对黑色素瘤细胞的增殖及侵袭力影响的研究

目的检测微小RNA(miR)在人黑色素瘤中的表达情况,研究miR-412通过抑制性别确定区Y框转录因子6(SOX6)的表达影响黑色素瘤细胞增殖及侵袭能力的变化。方法癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析发现miR-412在黑色素瘤中异常表达,为研究其表达与肿瘤的相关性,采用Transwell小室,非锚定独立生长实验分析miR-412对黑色素瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。软件预测SOX6可能为其靶向基因,采用荧光素酶报告分析及Western blot实验检测SOX6与miR-412的靶向调节情况。结果TCGA数据库分析黑色素瘤组织中miR-412表达水平高于正常对照组,表达越高,生存时间越短。Transwell小室,非锚定独立生长实验显示miR-412过表达后促进细胞增殖及侵袭能力,而下调miR-412后抑制黑色素瘤细胞增殖及侵袭能力;通过靶点预测miR-412结合SOX6基因3’-非翻译区(UTR),导致SOX6蛋白因miR-412表达增高而下调;同时在miR-412下调的细胞中抑制SOX6表达可恢复黑色素瘤细胞的增殖及侵袭能力。结论miR-412过表达后促进黑色素瘤细胞增殖及侵袭能力,反之则抑制黑色素瘤细胞增殖及侵袭能力。miR-412通过靶向调控SOX6影响黑色素瘤细胞增殖及侵袭,提示miR-412在黑色素瘤的发病过程中起重要作用,是潜在的治疗靶点。

miR-202-5p靶向下调SOX6表达对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响研究

目的:探讨miR-202-5p靶向SOX6对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。将H9C2细胞随机分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧+miR-con组、缺氧复氧+miR-202-5p组、缺氧复氧+miR-202-5p+pcDNA组、缺氧复氧+miR-202-5p+pcDNA-SOX6组。qRT-PCR和Western blot检测心肌细胞miR-202-5p和SOX6的表达水平。CCK-8法检测心肌细胞存活率。流式细胞术检测心肌细胞凋亡。试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量变化。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-202-5p和SOX6的靶向调控关系。结果:缺氧复氧处理可显著抑制心肌细胞miR-202-5p表达,促进SOX6表达,提高ROS和MDA水平,降低GSH-Px水平,抑制细胞存活,促进细胞凋亡。上调miR-202-5p表达可显著降低ROS和MDA水平,提高GSH-Px水平,促进细胞存活,抑制细胞凋亡。miR-202-5p可靶向负性调控SOX6的表达。上调SOX6可部分逆转miR-202-5p对缺氧复氧处理心肌细胞的保护作用。结论:miR-202-5p通过靶向下调SOX6减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,发挥保护作用。

miR-422a通过调控SOX6抑制H2O2对PC12细胞的损伤

目的:研究微小RNA-422a(miR-422a)靶向调控人性别决定区Y框6(SOX6)对过氧化氢(H 2O 2)刺激下大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12(具有神经细胞特性)损伤的作用。方法:采用real-time PCR检测H 2O 2处理后PC12细胞中miR-422a表达的变化,在PC12细胞中转染miR-422a mimics,MTT法测定细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞术测定细胞凋亡水平。靶基因预测软件预测SOX6可能是miR-422a的靶基因,萤光素酶报告基因实验鉴定靶向关系。在PC12细胞中共转染miR-422a mimics和SOX6过表达载体,检测过表达SOX6对miR-422a mimics调控H 2O 2条件下PC12细胞活力、LDH漏出率和凋亡的影响。结果:H 2O 2处理后PC12细胞中miR-422a表达水平降低(P<0.05)。H 2O 2处理后的PC12细胞的活力降低,LDH漏出率和细胞凋亡率升高(P<0.05)。miR-422a mimics能够提高H 2O 2条件下PC12细胞活力,降低LDH漏出率和凋亡率(P<0.05)。miR-422a靶向负调控SOX6表达。SOX6过表达载体可以逆转miR-422a对PC12细胞活力提高和LDH漏出率、细胞凋亡率降低的作用(P<0.05)。结论:miR-422a通过靶向抑制SOX6可降低H 2O 2对PC12细胞的损伤作用。

SOX9、L-SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原在青少年特发性脊柱侧凸患者顶椎终板软骨的共表达及意义

目的:观测SOX9、L-SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原在青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者顶椎终板软骨中的表达,探讨其与AIS发生、发展的关系。方法:12例AIS患者,每例在前路手术时截取顶椎终板软骨1份,每份标本均包含凸侧与凹侧。切片行HE染色观察其组织细胞形态;行免疫组织化学染色,应用病理图像分析系统观测凸侧与凹侧的SOX9、L-SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原表达的阳性细胞数和累积光密度(IOD),并计算这4个因子表达的相关性。结果:HE染色显示终板软骨有类似四肢长骨骺板样软骨内成骨组织形态,与凹侧比较凸侧显示了更强的软骨细胞活性。凸侧SOX9、L-SOX5、SOX6及Ⅱ型胶原表达的阳性细胞数和前三者的IOD值均明显大于凹侧,差异均有显著性(P<0.05),凸侧Ⅱ型胶原表达的IOD值与凹侧比较无显著性差异(P>0.05),4个因子表达的阳性细胞数之间的相关系数为0.46～0.91(P<0.05),IOD之间为0.64～0.98(P<0.05),均呈正性相关。结论:AIS患者顶椎凸侧与凹侧终板软骨的组织形态学及SOX9、L-SOX5、SOX6和Ⅱ型胶原的表达均存在差异,其可能是脊柱不同部位间机械应力差异下的继发性变化;4个因子的共表达异常触发AIS的可能性小。

过表达SOX6基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨过表达SOX6基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的卵巢癌SKOV3细胞随机分为两组,通过特异性重组质粒pc DNA3.1-SOX6转染建立稳定过表达SOX6基因的SKOV3细胞作为实验组,空载体pc-DNA3.1-mock转染的SKOV3细胞作为对照组。采用酶标仪测定两组450 nm波长处的光密度(OD)值作为细胞活性指标,采用Edu荧光染色法检测两组细胞增殖率,采用Hoechst33342细胞染色法检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测PTEN、蛋白激酶B(Akt)及p-Akt蛋白表达。结果实验组及对照组OD450值分别为2.1±0.1、4.3±0.5,细胞增殖率分别为(13.2±2.2)%、(43.3±4.2)%,细胞凋亡率分别为(15.2±3.2)%、(5.2±1.4)%,组间比较P均<0.05。与对照组比较,实验组PTEN蛋白表达升高,p-Akt蛋白表达降低,组间比较P均<0.05。两组Akt蛋白表达比较P>0.05。结论过表达SOX6基因能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移并促进细胞凋亡;其机制可能是抑制PTEN/Akt信号通路激活。

食管癌组织中miR-1269a、SOX6的表达变化及意义

目的观察食管癌组织中微小RNA(miRNA)-1269a及转录因子SOX6的表达变化,并探讨其意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测120例份食管癌组织和癌旁正常组织中miR-1269a及SOX6的表达,分析miR-1269a、SOX6的表达与患者临床病理特征的关系。结果食管癌组织中SOX6相对表达量低于癌旁正常组织,而食管癌组织中miR-1269a相对表达量高于癌旁正常组织(P均<0.05)。癌组织中miR-1269a与SOX6的表达呈负相关(r=-0.716,P=0.000)。食管癌组织中miR-1269a、SOX6表达与肿瘤TNM分期、组织分化程度及肿瘤浸润深度有关(P均<0.05),与患者年龄、性别及淋巴结转移无关(P均>0.05)。结论食管癌组织中miR-1269a表达上调,SOX6表达下调;二者联合检测有助于食管癌病情判断。

MiR-96靶向调控Sox6促进小鼠β细胞胰岛素合成与分泌

目的探索miR-96对小鼠胰岛β细胞胰岛素合成与分泌的影响及其作用机制。方法将小鼠胰岛β细胞系(MIN6细胞)分为四组,通过脂质体LipfectamineTM2000介导将miR-96 mimics、mimicsNC、miR-96 inhibitor、inhibitor NC瞬时转染至4组细胞,荧光定量PCR和ELISA方法分别检测Ins1、Ins2mRNA的表达及细胞上清液中的胰岛素浓度,生物信息学分析miR-96与Sox6 3UTR的结合关系,荧光素酶报告基因检测miR-96与Sox6的结合情况,Western blot检测Sox6蛋白水平。结果与对照组比较,miR-96 mimics能增加葡萄糖刺激下MIN6细胞胰岛素的合成与分泌(P <0.01),而miR-96 inhibitor可下调胰岛素的合成与分泌(P <0.01)。miR-96与Sox6 3UTR的553-561位点结合。过表达miR-96可显著抑制Sox6荧光素酶活性及MIN6细胞中Sox6蛋白的表达。结论 miR-96靶向沉默Sox6进而促进β细胞胰岛素的合成与分泌。

SOX6和SOX9基因转染对人原发性骨关节炎关节软骨间充质祖细胞增殖和成软骨分化的调控作用

目的观察SOX6和SOX9基因转染对原发性OA关节软骨MPCs的促增殖、分化作用,为通过调控关节软骨MPCs以防治原发性OA提供理论依据。方法分别以pAdTrack-CMV-SOX6、SOX9腺病毒穿梭质粒构建SOX6、SOX9基因,并感染原发性OA关节软骨MPCs,比较基因感染组和未感染组成软骨诱导分化后TB、Ⅱ型胶原以及Ⅱ型胶原mRNA表达的变化。结果SOX6和SOX9能够分别稳定感染OA关节软骨MPCs;经二者分别感染的关节软骨MPCs成软骨诱导分化后,其TB染色、Ⅱ型胶原染色呈强阳性表达,未基因感染细胞为弱阳性着色;SOX6基因感染原发性OA关节软骨MPCs的Ⅱ型胶原mRNA表达量为未基因感染细胞的3.8倍(P<0.01),SOX9基因为未感染细胞的5.15倍(P<0.01)。结论构建的SOX6、SOX9基因序列与基因库报道序列完全一致;SOX6和SOX9能稳定感染原发性OA关节软骨MPCs,并显著促进感染细胞成软骨分化;提示通过适宜浓度的bFGF、TGF-β1对原发性OA关节软骨MPCs的作用及SOX6和SOX9基因感染,可能具有促进原发性OA关节软骨损伤修复的作用。

微小RNA-199b-3p靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-199b-3p(miR-199b-3p)靶向调控SOX6的表达及其对结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响。方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-199b-3p抑制剂及阴性对照(NC)转染至SW620细胞并分为抑制剂组和NC组,同时以未转染的SW620细胞作对照。采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测3组miR-199b-3p的表达以评价转染效果,MTT法和AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测转染后的增殖活性及凋亡率,QPCR和Western blotting检测各组凋亡相关基因(Bax和caspase-3)及SOX6的mRNA和蛋白水平,构建含有野生型及突变型SOX6-3’UTR的荧光报告基因质粒并采用双荧光素酶报告实验验证miR-199b-3p对SOX6的靶向调控作用。结果 QPCR检测显示,转染48 h后抑制剂组的miR-199b-3p的表达水平为0.526±0.034,低于未转染组的1.009±0.064和NC组的0.960±0.057,差异有统计学意义(P<0.05);与其余两组相比,抑制剂组转染24、48、72 h后的SW620细胞的增殖活性均降低(P<0.05);抑制剂组的凋亡率为(37.533±1.459)%,高于未转染组的(6.101±0.663)%和NC组的(8.753±1.061)%,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制剂组SW620细胞的SOX6、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均高于未转染组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明miR-199b-3p可显著抑制野生型SOX6-3’UTR的荧光荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-199b-3p可靶向调控SOX6的表达,且下调miR-199b-3p表达可抑制SW620细胞的增殖并诱导凋亡,为结肠癌的治疗提供潜在的分子治疗靶点。

miR-26b调控Sox6和Bhlhe22基因表达影响胰岛素分泌的机制研究

目的阐明miR-26b通过调控Sox6和Bhlhe22基因介导胰岛素的分泌的机制。方法进行胰岛β细胞INS-1培养,miR-26b的过度表达通过慢病毒转染,miR-26的干扰通过miR-26bminics。INS-1细胞可分为3类:野生型INS-1细胞、miR-26b过表达INS-1细胞和miR-26b抑制INS-1细胞。构建miR-26b沉默细胞株和过表达细胞株与验证,采用慢病毒转染技术再次分别构建Sox6和Bhlhe22基因沉默细胞株和Sox6和Bhlhe22基因过表达细胞株,使用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测胰岛素含量;采用实时聚合酶链式反应(QT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)方法检测Sox6和Bhlhe22基因及蛋白的表达。结果与对照组相比,miR-26b过度表达组Bhihe22、Sox6基因及蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-26b抑制组Bhihe22、Sox6基因及蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,miR-26b过度表达组胰岛素释放增加68.9%,而miR-26b抑制组胰岛素释放减少45.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-26b通过影响Sox6和Bhlhe22基因的表达,最终可能影响胰岛素的分泌,miR-26b可能参与调控胰岛素的分泌。

miR-223-3p/SOX6轴调控糖尿病肾病炎症反应与肾间质纤维化的机制研究

目的探讨miR-223-3p/SOX6轴调控糖尿病肾病(DN)炎症反应与肾间质纤维化的机制。方法采用db/db小鼠建立DN模型,测定血糖值与24h尿白蛋白排泄率,同时高糖(HG)培养HK-2细胞,PCR测定小鼠肾组织和HK-2细胞中miR-223-3p的表达量,苏木精-伊红染色与Masson染色观察肾组织的病理学表现,免疫组化测定炎性因子即肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)与纤维黏连蛋白(FN)表达;随后分别在细胞与DN小鼠中过表达miR-223-3p,检测细胞和组织炎症与纤维化状况,双荧光素酶报告基因系统与蛋白印迹法验证miR-223-3p与SOX6的靶向关系,最后在DN小鼠中同时过表达miR-223-3p与SOX6,观察其对肾组织的影响。结果与正常对照比较,DN小鼠miR-223-3p表达下调(P<0.05),HG培养的HK-2细胞miR-223-3p表达水平亦降低(P<0.05);过表达miR-223-3p可缓解细胞和DN小鼠肾组织炎症反应与纤维化(P<0.05);miR-223-3p可以靶向抑制SOX6的表达(P<0.05),且SOX6在DN模型中表达水平较高(P<0.05);过表达SOX6逆转了miR-223-3p对DN小鼠肾组织炎症与纤维化的缓解作用(P<0.05)。结论miR-223-3p可以通过抑制SOX6表达缓解DN模型小鼠肾组织炎症反应与间质纤维化,阻止DN疾病的进展。

SOX5、SOX6基因在豚鼠耳蜗中的表达及意义

目的探讨SOX5、SOX6基因在豚鼠耳蜗中的表达及该基因对耳蜗发育的影响与作用。方法活体解剖取出豚鼠耳蜗、肝脏、脑、肾脏和心脏等组织,应用Primer 5.0软件设计SOX5、SOX6引物。使用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测SOX5、SOX6基因的表达情况。结果SOX5基因在不同组织中均有表达,耳蜗中的表达相对较弱。SOX5和SOX6基因均在耳蜗组织表达。结论SOX5、SOX6基因的表达具有一定的组织特异性,两者均在耳蜗中的表达提示SOX5、SOX6基因对耳蜗的骨性组织发育可能存在一定作用。

骨质疏松易感SNP rs4325274通过增强子远程调控SOX6基因的功能机制研究

骨质疏松症是一种典型的多基因复杂疾病,遗传力高达85%,其发病率已跃居常见疾病的第5位。尽管已经鉴定出大量骨质疏松易感SNP,但大多数SNP位点位于基因组非编码区,且功能机制未知。本研究旨在通过生物信息学分析和功能实验探究骨质疏松非编码功能性易感SNP rs4325274的分子调控机制。首先,通过表观注释发现该SNP所在区域处在增强子上,eQTL和Hi-C分析结果发现SNP调控的潜在靶基因是SOX6;然后,利用多种数据库进行Motif预测,并结合GEO数据库中的ChIP-seq数据分析进行了验证,结果发现转录因子HNF1A更倾向于结合SNP rs4325274-G碱基;进一步通过双荧光素酶报告基因实验验证了该SNP对SOX6基因表达的增强作用;最后,利用shRNA敲低转录因子HNF1A实验,检测靶基因SOX6的表达变化。以上研究结果初步解析了非编码区功能性SNPrs4325274作为增强子远程调控SOX6基因表达的分子机制,为复杂疾病非编码易感SNP的遗传调控研究提供新思路。

SOX6基因对H2O2诱导的星形胶质细胞损伤的机制

目的探讨干扰SOX6基因表达对H2O2诱导的星形胶质细胞(AS)凋亡、线粒体膜电位及PI3K/AKT信号通路影响。方法从乳大鼠大脑皮质分离培养AS细胞,将细胞分为阴性对照组(NC组):AS转染无干扰作用的siRNA;H2O2组:20μmol/L的H2O2处理AS细胞24 h;H2O2+NC组:无干扰作用的siRNA转染AS细胞24h后,20μmol/L的H2O2处理细胞24 h;H2O2+si-SOX6组:SOX6特异性siRNA转染AS细胞24 h后,20μmol/L的H2O2处理细胞24 h。通过LDH试剂盒、流式细胞术及JC-1探针分别检测细胞毒性、凋亡率及线粒体膜电位;Western blotting检测SOX6、Cyt.C、caspase3、caspase9、Bcl-2、Bax和p-AKT蛋白表达。结果H2O2可明显上调AS细胞SOX6、Cyt.C、caspase3、caspase9和Bax表达,下调Bcl-2和p-AKT表达,提高细胞毒性,诱导细胞凋亡,而干扰SOX6基因表达可明显减弱H2O2对细胞SOX6、Cyt.C、caspase3、caspase9、Bcl-2、Bax和p-AKT表达及细胞毒性和凋亡影响。结论干扰SOX6基因表达可通过抗凋亡途径保护H2O2诱导的AS损伤,此保护作用与线粒体通路及PI3K/AKT信号通化激活有关。

miR-7081-5p靶向SOX6对羊驼黑色素细胞色素的调控

【目的】miR-7081-5p在白色和棕色羊驼皮肤中呈差异表达,推测miR-7081-5p可能参与色素生成。【方法】运用生物信息学和双荧光素酶报告实验对miR-7081-5p的靶基因进行预测和验证;通过脂质体转染的方法,运用qRT-PCR和Western blotting检测miR-7081-5p过表达对靶基因和黑色素生成相关基因表达水平的影响;使用碱溶法检测miR-7081-5p过表达对黑色素含量的影响;使用分光光度计检测miR-7081-5p过表达对酪氨酸酶活性的影响。【结果】生物信息学预测SOX6是miR-7081-5p靶基因之一,双荧光素酶报告实验证实SOX6是其靶基因之一。qRT-PCR和Western blotting结果显示:在羊驼黑色素细胞中,过表达miR-7081-5p显著降低了SOX6、MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表达,其中mRNA表达水平分别降低了40.51%、63.63%、59.22%、58.84%和63.80%,蛋白质表达水平分别降低了71.69%、65.23%、63.23%、58.52%和62.95%。黑色素含量检测结果显示:过表达miR-7081-5p显著降低了总黑色素、真黑素和褐黑素的相对含量,分别下降了49.03%,62.4%和63.8%。酪氨酸酶活性检测结果显示:过表达miR-7081-5p,黑色素细胞内酪氨酸酶活性显著降低了63.06%。【结论】miR-7081-5p靶向SOX6抑制了羊驼黑色素细胞的色素生成。

lncRNA SNHG14通过miR-181c-5p/SOX6信号轴调控缺血性脑卒中神经元细胞凋亡

目的通过IS体外模型探究lncRNA SNHG14在神经元细胞凋亡中的作用机制。方法通过氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的神经元细胞损伤来模拟IS。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG14、miR-181c-5p、SOX6基因表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Caspase-3检测试剂盒测定Caspase-3活性,RNA免疫沉淀实验和萤光素酶报告分析实验验证miR-181c-5p与SNHG14、SOX6的相互作用。结果sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于sh-NC组(P<0.05),OGD+sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于OGD+sh-NC组低(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞活性率较OGD+sh-NC组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞凋亡率、Caspase-3相对表达量较OGD+sh-NC组低(P<0.05)。miR-NC组miR-181c-5p相对表达量较miR-181c-5p mimics组低(P<0.05),inhibitor NC组较miR-181c-5p inhibitor组高(P<0.05)。SNHG14-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SNHG14-WT+miR-NC组低(P<0.05),SNHG14-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SNHG14-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。SOX6-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SOX6-WT+miR-NC组低(P<0.05),SOX6-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SOX6-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。miR-NC组SOX6 mRNA相对表达量较miR-181c-5p mimics组高(P<0.05),miR-181c-5p inhibitor组较inhibitor NC组高(P<0.05)。对照组细胞活性率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05),OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组较OGD组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组细胞凋亡率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组Caspase-3相对表达量较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。结论SNHG14可调节IS模型中神经元细胞凋亡,作用机制可能是通过靶向miR-181c-5p/SOX6信号通路实现的。

Sox6基因调控鸡骨骼肌分化和肌纤维类型的研究

本实验室前期研究发现一个拷贝数变异区域与鸡的重要经济性状显著相关,并且该区域与Sox6编码区域重叠,提示Sox6基因对骨骼肌生长发育具有调控作用。研究首先采用RTqPCR分析Sox6基因在不同胚龄隐性白母鸡的胸肌和腿肌中的表达情况和表达差异。接着在原代成肌细胞中过表达Sox6基因,通过RT-qPCR、免疫荧光和HE染色观察Sox6对原代成肌细胞的肌纤维类型调控情况和分化的影响。结果表明,Sox6 mRNA表达量在不同胚龄的胸肌和腿肌上的表达趋势相近,但在胸肌上的表达量高于腿肌,并且在E14、E17和7W时,胸肌表达量显著高于腿肌(P<0.05),提示Sox6可能对快肌起到重要作用。原代成肌细胞上面过表达Sox6后定量快慢肌特异基因发现Sox6能够促进MyH1B,抑制sMyHC1的表达;免疫荧光和HE染色观察发现Sox6能够促进成肌细胞的分化和肌管的形成,从而证明了Sox6对骨骼肌的分化和肌纤维类型调控具有一定的作用。

SOX6在膀胱癌发生发展中的作用及相关机制

目的:研究SOX6在膀胱癌中的表达特征,并探讨其在膀胱癌中发挥的生物学效应及相关机制。方法:利用免疫组化检测膀胱癌组织和癌旁组织中的SOX6的表达,蛋白印记(Western blot)及荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测SOX6在膀胱癌细胞(T24、BIU-87、EJ、5637)和正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)中表达情况。通过SOX6高表达质粒和空载质粒分别转染膀胱癌细胞(EJ、5637),使用Transwell方法检测两组细胞的侵袭能力,采用划痕实验检测迁移能力,Western blot法检测E-cadherin和Vimentin的表达,使用CCK-8实验检测两组细胞的增殖能力,流式细胞术检测凋亡情况,并研究对膀胱癌细胞的蛋白酶体活性的影响。结果:与癌旁组织和正常膀胱上皮细胞相比,膀胱癌组织和细胞中SOX6的表达显著下降,在细胞EJ和5637尤其明显。与对照组对比,转染SOX6高表达质粒的EJ 和5637膀胱癌细胞的迁移、侵袭、增殖能力减弱,凋亡增加,上皮间质转化能力减弱,同时蛋白酶体活性显著降低。结论:SOX6在膀胱癌中作为抑癌基因发生作用,通过降低蛋白酶体活性来抑制膀胱癌的发展。

microRNA-499通过靶向调节SOX6抵抗缺氧诱导的神经细胞损伤

目的:探讨microRNA-499(miR-499)在缺氧诱导的PC12细胞损伤中的作用及其调控机制。方法:将PC12细胞随机分为:对照(control)组、缺氧(hypoxia)组、miR-499过表达(miR-499 mimic+hypoxia)组、mimic阴性对照(mimic-NC+hypoxia)组、SOX6过表达(miR-499 mimic+pc DNA3.1-SOX6+hypoxia)组和SOX6阴性对照(miR-499 mimic+pc DNA3.1+hypoxia)组。MTT试剂检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)试剂盒检测LDH漏出量;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶活性检测测定miR-499和SOX6的靶向关系;Western Blot检测SOX6的蛋白表达。结果:与对照组相比,缺氧组的miR-499表达下调,细胞活性降低,LDH漏出量增加,细胞凋亡率提高;与缺氧组相比,miR-499过表达组的细胞活性提高,LDH漏出量减少,细胞凋亡率降低。MiR-499直接靶向SOX6,SOX6过表达能够逆转miR-499过表达的作用。结论:MiR-499过表达能够通过直接靶向SOX6来抵抗缺氧诱导的PC12细胞损伤,提高细胞活力,减少LDH漏出量,并降低细胞凋亡率。

SOX6-SOCS3通过STAT3信号通路调控缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖

目的探究SRY盒转录因子6(SRY-Box transcription factor 6,SOX6)-细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth cells, HPASMCs)增殖中的作用及其可能机制。方法 (1)4%O2缺氧处理HPASMCs分为3组:常氧组、缺氧24 h组、缺氧48 h组(n=3)。(2)使用小RNA干扰SOX6或SOCS3表达,干扰SOX6表达分为4组:si-SOX6-NC组、si-SOX6-1组、si-SOX6-2组、si-SOX6-3组(n=3),干扰SOCS3表达分为3组:si-SOCS3-NC组、si-SOCS3-1组、si-SOCS3-2组(n=3)。(3)构建慢病毒过表达SOX6细胞后缺氧处理48 h,分为4组:常氧对照组、过表达SOX6组、缺氧对照组、缺氧+过表达SOX6组(n=3)。(4)采用CCK-8检测各组细胞增殖,RT-qPCR、Western blot检测各组SOX6、SOCS3、磷酸化信号转导与转录激活因子3(phosphorylated-signal transduction and activators of transcription 3,p-STAT3)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果缺氧可降低SOX6和SOCS3的表达(P<0.01),不仅能诱导HPASMCs增殖(P<0.05),还能显著上调p-STAT3、PCNA的表达(P<0.05)。在常氧条件下,干扰SOX6或SOCS3可显著增强HPASMCs的增殖(P<0.05),细胞中p-STAT3、PCNA的表达也显著升高(P<0.01)。在缺氧条件下过表达SOX6可显著抑制缺氧诱导的HPASMCs增殖(P<0.01),并显著降低p-STAT3、PCNA的表达(P<0.01)。结论 SOX6-SOCS3可抑制缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。