SOX7通过靶向调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的研究SOX7调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制。方法将20只裸鼠皮下移植瘤模型随机分为SOX7 NC组(n=5)、SOX mimic组(n=5)、SOX7 NC+PHPS1组(n=5)和SOX7 mimic+PHPS1组(n=5),观察肿瘤生长情况。通过脂质体法将人结直肠癌细胞系SW480细胞转染后,将细胞分为6组,分别为SOX7 NC组、SOX7 mimic组、SOX7 NC+H_(2)O_(2)组、SOX7 mimic+H_(2)O_(2)组、SOX7 NC+PHPS1组、SOX7 mimic+PHPS1组。通过Western blot实验检测各组SW480细胞SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路相关蛋白的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测SW480细胞的侵袭迁移能力,通过CCK-8检测SW480细胞的增殖。结果小鼠体内实验显示:SOX7 mimic组肿瘤体积明显小于SOX7 NC组(P<0.01),经过PHPS1干预的肿瘤体积明显增大,SOX7 mimic+PHPS1组肿瘤体积和SOX7 NC+PHPS1组的差异无统计学意义。体外实验发现:SOX7 mimic抑制了SW480细胞Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达(P<0.01),促进了p-SHP-2蛋白表达(P<0.01);加入H_(2)O_(2)和SHP-2抑制剂后SOX7 mimic组和SOX7 NC组的Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT的蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义,SHP-2、p-SHP-2蛋白的表达水平降低,但差异无统计学意义;细胞划痕、Transwell侵袭迁移实验和CCK-8实验结果表明SOX7通过氧化应激和SHP-2通路抑制了SW480细胞的迁移、侵袭和增殖(P<0.01)。结论SOX7可通过靶向SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌增殖、侵袭和迁移。

下调SETDB1通过SOX7甲基化抑制口腔癌上皮-间充质转化、侵袭和转移的机制探讨

目的:探讨SETDB1通过SOX7甲基化抑制口腔癌上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、迁移和侵袭机制。方法:应用qRT-PCR和Western印迹法检测口腔癌KB细胞和口腔黏膜上皮ATCC细胞中SETDB1和SOX7 mRNA和蛋白表达水平。构建SETDB1 si-RNA,以脂质体介导法转染口腔癌KB细胞。siRNA-SETDB1为实验组(si-S),siRNA空载体为阴性对照组(si-N),未转染KB细胞为空白对照组(NC)。qRT-PCR和Western印迹法检测SETDB1 mRNA和蛋白表达水平,验证转染效果;焦磷酸测序检测SOX7甲基化水平。Western印迹法检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Vimentin、β-catenin和Slug蛋白表达,MTT法检测细胞存活能力,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。采用SPSS 21.0软件包进行统计学分析。结果:Rt-qPCR和Western印迹法检测结果显示,si-S组SETDB1 mRNA和蛋白表达量显著下降(P<0.05)。焦磷酸测序检测结果显示,下调SETDB1可显著降低SOX7甲基化率,增加SOX7蛋白表达。Western印迹法检测结果显示,下调SETDB1可显著抑制口腔癌KB细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin、β-catenin和Slug的表达(P<0.05)。细胞功能学结果显示,下调SETDB1可显著抑制KB细胞的存活、迁移和侵袭能力。结论:下调SETDB1可通过调控SOX7甲基化水平,抑制口腔癌细胞EMT、迁移和侵袭,为口腔癌临床诊断和治疗提供新思路和靶点。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

散发先天性心脏病致病基因SOX7新突变的发现及功能研究

目的:寻找散发先天性心脏病(CHD)致病基因SOX7新突变并研究其功能。方法:选取116例散发CHD患儿和228名无CHD对照儿童,对其SOX7基因进行测序分析,以发现新的致CHD突变。克隆SOX7基因并构建野生型人SOX7表达质粒,通过定点诱变产生突变型人SOX7表达质粒,使用脂质体转染多种表达质粒入HeLa细胞,应用双报告基因定量分析突变的功能效应。结果:在1例男性散发先天性室间隔缺损患儿中发现了SOX7基因新突变,即NM_031439.4:c.361C>T;p.(Gln121*)突变;在其他115例CHD患儿和228名无CHD对照者中未检测出该突变。双报告基因定量研究表明,突变型人SOX7对其关键靶基因GATA4的转录激活作用消失。结论:SOX7基因突变可能是一部分散发CHD的病因,这对CHD的个体化防治有潜在的临床意义。

SOX7基因慢病毒载体的构建及其在缺氧条件下对HUVECs增殖与迁移功能的影响

目的构建过表达SRY-box transcription factor 7(SOX7)基因的慢病毒载体,建立SOX7基因过表达的人脐静脉内皮细胞株(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),并在常氧和缺氧条件下探究过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响。方法使用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术扩增SOX7基因,通过同源重组法构建以pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen为载体的SOX7-pHAGE重组质粒。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blot)法检测目的基因的mRNA和蛋白表达。将SOX7-pHAGE重组质粒和包装质粒共转染293T细胞,获得含有SOX7-pHAGE慢病毒悬液,经浓缩后感染HUVECs,构建SOX7稳定感染细胞株。应用qPCR和Western blot技术检测SOX7基因的mRNA和蛋白的表达。在常氧及缺氧条件下,通过细胞划痕实验和CCK-8法检测过表达SOX7对HUVECs迁移和增殖能力的影响。结果SOX7-pHAGE重组质粒经测序后,序列比对正确。qPCR和Western blot法成功检测出SOX7-pHAGE重组质粒转染的293T细胞在mRNA水平过表达约111.4倍(P=0.0028),在蛋白质水平上出现过表达条带;qPCR和Western blot技术成功检测到SOX7-pHAGE慢病毒感染的HUVECs在mRNA水平上显著升高约68.2倍(P=0.0030),在蛋白水平上显著升高约1.7倍(P=0.0043),SOX7-pHAGE重组质粒及SOX7稳定感染细胞株构建成功。在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的迁移能力没有发生改变(P>0.9999),而在缺氧条件下其迁移能力增强约1.2倍(P=0.0044)。在常氧条件下,SOX7稳定感染细胞株的增殖能力增强约1.3倍(P=0.0087),在缺氧条件下其增殖能力也显著增强约1.4倍(P=0.0228)。结论SOX7稳定感染细胞株可促进HUVECs的增殖能力。在缺氧条件下,SOX7稳定感染细胞株可回补HUVECs被抑制的迁移和增殖能力。

食管癌患者SOX7、KLK13、FHIT的表达及对术后复发转移的预测价值

目的:探讨SRY盒相关基因7(SOX7)、激肽释放酶相关肽酶13(KLK13)、脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在食管癌患者癌组织中的表达,并分析其与术后复发转移的关联性。方法:选取2022年1月—2023年1月某院行胸腔镜食管癌切除术治疗的86例食管癌患者为研究对象,术后随访1年(失访5例),根据随访结局将患者分为复发转移组(31例)和未复发转移组(50例)。比较不同组织(癌组织vs癌旁组织)、不同结局及不同病理学参数的食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达水平。绘制ROC曲线,分析癌组织各指标联合检测对食管癌患者术后复发转移的预测价值。结果:食管癌患者癌组织SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);复发转移组患者癌组织SOX7、KLK13、FHIT mRNA低于未复发转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度为中高分化的食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达水平高于分化程度为低分化的食管癌患者,肿瘤分期为Ⅲ期、伴有淋巴结转移的食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达水平低于肿瘤分期为Ⅰ~Ⅱ期、不伴有淋巴结转移的食管癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,癌组织SOX7、KLK13、FHIT mRNA预测食管癌患者术后复发转移的AUC分别为0.793、0.829、0.776,三者联合预测食管癌患者术后复发转移的AUC为0.909。结论:食管癌患者癌组织中SOX7、KLK13、FHIT mRNA表达降低,其表达水平受肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移及术后复发转移影响,联合预测食管癌术后复发转移结局的效能较高,可作为拟定诊疗计划的参考。

甲基转移酶SETDB1和SOX7甲基化在口腔癌中的相关性研究

目的检测口腔癌中SETDB1表达与SOX7甲基化水平,分析二者相关性及临床意义。方法收集口腔癌和癌旁组织,焦磷酸测序法检测SOX7基因甲基化水平,RT-qPCR检测SOX7和SETDB1 mRNA的表达,免疫组化及Western blot检测蛋白表达。统计分析SOX7甲基化水平与SETDB1相关性及其与临床病例特征的相关性。构建SETDB1下调siRNA转染口腔癌KB细胞,设siRNA-SETDB1为实验组(si-SET)、siRNA空载体为阴性对照组(si-N)和未转染KB细胞为空白对照组(NC)。检测3组SETDB1 mRNA和蛋白水平及SOX7甲基化。结果口腔癌组织SOX7基因甲基化率高于癌旁组织,SOX7 mRNA相对表达量低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。癌组织中SETDB1 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化结果显示癌组织SOX7蛋白表达阳性率SETDB1蛋白表达阳性率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示SETDB1在癌组织中表达高于癌旁组织,SOX7在癌组织中表达低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);口腔癌组织中SOX7甲基化和SETDB1具有相关性(r=0.324,P<0.05);SOX7甲基化和SETDB1与肿瘤TNM分期、组织分化和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。体外实验显示,RNA干扰SETDB1后si-RNA组中SETDB1 mRNA和蛋白表达量最低(P<0.05),SOX7基因甲基化率显著下降(P<0.05)。结论在口腔癌病变过程中SETDB1与SOX7基因甲基化具有相关性,SETDB1可能是催化SOX7发生甲基化修饰的重要甲基化转移酶,在口腔早期病变诊治中具潜在价值。

阿司匹林对人卵巢癌组织和SKOV3细胞SOX7表达和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:研究阿司匹林对人卵巢癌组织和SKOV3细胞SOX7表达和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测20例卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中SOX7、β-catenin和Cyclin D1 mRNA的表达;0、0.5、1.0、2.0和3.0 mmol/L阿司匹林体外作用SKOV3细胞48 h后,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞SOX7、β-catenin和Cyclin D1 mRNA的表达;MTT法检测0、0.5、1.0、2.0和3.0 mmol/L阿司匹林对SKOV3细胞增殖的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中SOX7 mRNA表达降低(t=3.614,P=0.001),β-catenin和Cyclin D1 mRNA表达升高(t=13.651和5.967,P<0.001)。0、0.5、1.0、2.0和3.0 mmol/L阿司匹林作用48 h后,SKOV3细胞中SOX7 mRNA的表达水平逐渐升高(F=12.151,P<0.001),而β-catenin和Cyclin D1 mRNA的表达水平逐渐降低(F=6.214和4.903,P<0.05)。阿司匹林浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖(F=20.481,P<0.001)。结论:阿司匹林可能通过上调人卵巢癌中SOX7的表达对Wnt/β-catenin信号通路产生影响。

SOX7基因在胰腺癌细胞株的表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的:检测SOX7基因在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨两者之间的关系。方法:采用RT-PCR检测SOX7基因在胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1、PANC-1和SW1990中的表达水平。重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株后,检测SOX7基因的mRNA表达和甲基化状态变化。结果:在胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1中SOX7基因的mRNA呈阳性表达,而在PANC-1和SW1990中SOX7基因表达沉默;与BXPC-3、CFPAC-1相比,PANC-1和SW1990中SOX7基因启动子区甲基化率较高。经过去甲基化处理后,PANC-1与SW1990中SOX7启动子区的甲基化率下降,基因重新表达。结论:胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990中的SOX7基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1、SW1990中SOX7基因的表达沉默。

lncRNA MALAT1通过miR-124-3p/SOX7分子轴促进视网膜血管内皮细胞增殖及迁移和血管生成

目的:探讨lncRNA MALAT1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响及其分子机制。方法:qPCR检测正常对照组、糖尿病患者无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变患者组血清中lncRNA MALAT1的表达水平以及葡萄糖培养对lncRNA MALAT1的表达水平的影响。qRT-PCR检测miR-124-3p表达水平;Western blotting检测SOX7表达水平;双荧光素酶报告系统检测lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7的靶向作用关系;CCK-8实验检测细胞的增殖活力;Transwell实验检测细胞的迁移能力;体外成管实验检测hRMECs血管形成能力。结果:lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者血清中的表达水平显著高于糖尿病患者无视网膜病变组和正常对照组(P<0.001);体外葡萄糖培养显著促进lncRNA MALAT1在hRMECs细胞的表达,并显著促进hRMECs细胞的增殖、迁移和血管形成(均P<0.05)。敲低lncRNA MALAT1显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7之间存在靶向结合作用。过表达miR-124-3p显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P <0.05);过表达lncRNA MALAT1+miR-124-3p,同时过表达miR-124-3p+SOX7,敲低lncRNA MALAT1+过表达SOX7均显著消除了过表达miR-124-3p对hRMECs细胞增殖、迁移和血管形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p对SOX7的负调控作用促进糖尿病视网膜病变中视网膜内皮细胞增殖、迁移和血管形成。lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者的异常上调可能是微血管功能障碍的潜在生物标志。

SOX7在肾细胞癌中的表达及其对肾癌细胞生物学行为的影响

目的:研究Y性别决定基因7(sex determining region Y-box 7,SOX7)在肾细胞癌的表达以及对肾癌细胞生物学行为的影响。方法:qRT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)检测SOX7在肾细胞癌组织和肾癌细胞(A498、ACHN、786-O)中的mRNA表达及甲基化状态;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测SOX7在肾细胞癌组织中的蛋白表达。采用qRT-PCR方法检测5-Aza-dC/TSA干预后肾癌细胞的SOX7 mRNA表达。在肾癌细胞ACHN中转染SOX7过表达质粒后,采用MTS、克隆形成、划痕实验和Transwell实验检测ACHN细胞增殖、迁移和侵袭的变化。结果:qRT-PCR及IHC结果显示,SOX7在肾癌组织中mRNA和蛋白的表达显著低于癌旁组织(P<0.01),并与淋巴结转移和TNM分期相关(P<0.05)。SOX7 mRNA在A498、ACHN、786-O细胞中的表达量均明显低于对照组HK-2细胞(P<0.01)。5-Aza-dC/TSA处理后肾癌细胞SOX7 mRNA表达均增高(P<0.01)。MSP结果显示,SOX7在肾癌组织中的甲基化率明显高于癌旁组织(P<0.01),并与TNM分期相关(P<0.05)。过表达SOX7可抑制ACHN细胞的增殖活性、迁移能力和侵袭能力。结论:SOX7在肾细胞癌中低表达,SOX7的高甲基化可能是肾癌发生的分子机制之一。

SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧(ROS)水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组(Vector组)和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组(pcDNA3.1-SOX7组)。转染48h,AnnexinV-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Westernblotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclinD1和cleaved-caspase3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24h、48h和72h的细胞活力。结果:pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组(P<0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclinD1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。

脑胶质瘤SOX7基因的甲基化状态及临床意义

目的探讨脑胶质瘤SOX7基因的甲基化状态及其与病人预后的关系。方法收集2013年6月至2015年1月手术切除的胶质瘤标本131例,另取颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织标本32例作为对照。应用甲基化特异PCR及RT-PCR方法检测SOX7基因的甲基化状态及mRNA表达水平。采用Kplan-Meier法分析生存曲线。结果胶质瘤SOX7基因甲基化率(71.8%,94/131)明显高于正常脑组织(32.4%,11/34;P<0.05)。高级别胶质瘤SOX7甲基化率(81.01%,64/79)明显高于低级别胶质瘤(57.69%,30/52)。胶质瘤SOX7 mRNA水平明显低于正常脑组织(P<0.05)。SOX7基因甲基化组生存期较非甲基化组明显缩短(P<0.01)。结论胶质瘤SOX7基因甲基化率升高,SOX7在胶质瘤中表达水平下调,SOX7基因的甲基化状态与病人生存期密切相关。

过表达SOX7对胆囊癌GBC-SD细胞增殖生物学特性的影响及其机制研究

目的探讨过表达SOX7(Sex determining region Y-box 7)基因对胆囊癌GBC-SD细胞株增殖、凋亡的影响及其可能涉及的细胞信号通路。方法用特异性的重组质粒pc DNA3.1-SOX7作为实验组转染GBC-SD细胞建立稳定过表达SOX7基因的细胞,空载体pc-DNA3.1-mock作为对照组。采用Edu细胞荧光染色法检测过表达SOX7基因对GBCSD细胞增殖的影响,同时采用Hoechst 33342细胞染色法检测GBC-SD细胞的凋亡。Western blot检测相关信号通路蛋白的表达。结果实验组中SOX7 mRNA的相对表达量为(353.0±28.1)%,相对于对照组(100.0±2.3)%表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞在450 nm吸光度值为(4.6±0.4),较实验组(2.4±0.2)明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Edu免疫荧光染色结果表明,对照组细胞增殖比例(33.3±3.4)%高于实验组(12.2±4.2)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hoechst 33342细胞凋亡荧光染色结果表明,对照组细胞凋亡比例(5.2±1.3)%较实验组(10.2±2.4)%降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot实验结果表明,对照组PTEN蛋白的相对表达量为(0.2±0.02),而实验组的相对表达量为(0.7±0.04),对照组磷酸化Akt的相对表达量为(0.8±0.03),而实验组为(0.4±0.02),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论过表达SOX7基因能显著抑制胆囊癌细胞GBC-SD的增殖,导致其凋亡增加。PTEN/Akt信号通路的激活可能与之有关。

原发性肝癌组织中SOX7 mRNA的表达

目的:探讨原发性肝癌(HCC)组织中SOX7mRNA的表达及意义。方法:应用实时荧光定量PCR检测SOX7mRNA在7种肝癌细胞系(HepG2、SNU449、SNU182、SMMC-7721、HUH-7、PLC-PRF-5及Hep3B)和40例HCC及其配对癌旁正常肝组织中的表达。结果:肝癌细胞系中SOX7mRNA低表达或者不表达。HCC组织中SOX7mR-NA表达水平为(1.189±1.213),正常肝组织中为(1.821±1.718),HCC组织中的表达水平较正常肝组织降低(t=2.040,P=0.048)。SOX7mRNA的表达与HCC患者的临床分期有关(Z=2.158,P=0.031)。结论:SOX7mRNA表达下调与HCC的发生发展有关。

SOX7启动子甲基化对膀胱癌增殖及凋亡的影响

目的SOX7基因在多种肿瘤中发挥抑癌作用,而对膀胱癌是否发挥作用报道较少。文中旨在探讨SOX7基因在膀胱癌中的表达情况,研究SOX7启动子甲基化对膀胱癌的调控及意义。方法采用GEPIA,Oncomine,MethHC和cBioPortal数据库预测SOX7在膀胱癌组织中的表达、启动子甲基化等。收集2017年1月至10月在上海市第十人民医院泌尿外科40份尿液标本。其中膀胱癌患者标本20份,正常对照者标本20份。通过甲基化特异性PCR检测尿液标本中SOX7基因的甲基化差异。培养膀胱癌细胞系,T24细胞中加入含有甲基化药物5-氮杂-2′脱氧胞苷(5-aza-dc)的培养基为5-aza-dc组,T24细胞加入同体积的DMSO为对照组。膀胱癌细胞系转染SOX7质粒为质粒组,转染空载质粒为空载组。Western blot检测SOX7在膀胱癌细胞系中的表达情况,通过CCK-8实验、平板克隆实验、流式细胞仪检测膀胱癌细胞去甲基化后的增殖,克隆形成及凋亡变化情况。结果数据库中膀胱癌组织甲基化水平明显高于正常组织(P<0.005)。膀胱癌患者尿液中15份(75%)SOX7甲基化水平增高,而正常人尿液中仅7份(35%),差异有统计学意义(P<0.05)。5-aza-dc组SOX7蛋白的表达量较对照组上调,当浓度达到20μmol/L时,SOX7蛋白表达量相对较高。质粒组SOX7蛋白表达量较空载组上调明显。CCK-8结果显示,第5天,5-aza-dc组的A值较对照组显著降低(P<0.05),质粒组T24细胞A值较空载组明显降低。克隆形成实验发现,5-aza-dc组每孔克隆形成数[(167.33±13.65)个]较对照组[(328.00±20.81)个]明显下降(P<0.05)。质粒组每孔克隆形成数[(136.00±15.00)个]较空载组[(280.67±13.43)个]明显下降(P<0.05)。5-aza-dc组T24细胞的凋亡率(27.89%)较对照组(3.79%)明显升高(P<0.05),质粒组细胞凋亡率(21.28%)较空载组(9.90%)亦明显增高(P<0.05)。结论SOX7在膀胱癌低表达,其表达受启动子甲基化调控,是膀胱癌的潜在生物学标志,在膀胱癌的发生、发展中发挥重要作用。

SOX7与SOX9在鉴别前列腺癌与前列腺增生中的作用

目的探讨SOX7和SOX9在鉴别前列腺癌与前列腺增生中的临床意义。方法收集147例前列腺癌与28例前列腺增生患者病理组织及临床资料,运用免疫组化实验分析SOX7与SOX9的表达及其作用。结果 SOX7在前列腺癌组织中表现为低表达(P=0.025),而SOX9为高表达(P=0.043),SOX7与SOX9呈负相关(r=-0.263,P=0.001)。将SOX7与SOX9免疫组化评分与前列腺癌病理参数相结合进行分析,发现SOX7在血清PSA水平<10ng/ml(P=0.048)、Gleason评分<7(P=0.018)、肿瘤TNM分期<T2a(P<0.001)和病理分期T2a^T2c(P=0.002)前列腺癌患者中有较高的表达,而SOX9在Gleason评分≥7(P=0.001)和肿瘤TNM分期≥T2a(P=0.005)的前列腺癌患者中有较高的表达,差异有统计学意义。结论通过检测SOX7和SOX9的水平可鉴别前列腺癌与前列腺增生,并可以初步判断前列腺癌的恶性程度。

转录因子SOX7基因在贲门腺癌中的异常表达及其甲基化状态

目的:检测贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)组织及相应癌旁非肿瘤组织中Y性别决定区基因7(sex determining region Y-box 7,SOX7)的甲基化状态及其对SOX7 mRNA表达、Wnt通路中心因子β-catenin异质表达的影响及与临床病理特征之间的相关性。方法:选择河北医科大学第四医院胸外科2006-2012年手术切除的GCA及癌旁组织各130例,应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)、RT-PCR分别检测130例GCA及癌旁组织中SOX7基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学方法检测标本中β-catenin蛋白的表达。分析SOX7的甲基化状态与临床病理特征、SOX7 mRNA表达、β-catenin蛋白的异质表达及上消化道肿瘤家族史(upper gastrointestinal cancers,UGIC)的关系。结果:GCA组织中SOX7的甲基化率显著高于癌旁组织为[57.7%(75/130)vs 30.8%(40/130),P<0.01],其高甲基化仅与肿瘤患者的淋巴结转移情况有关(P<0.05),与肿瘤组织的病理分级及临床分期均无关(P>0.05)。GCA组织中SOX7mRNA的表达量明显低于癌旁非肿瘤组织[(0.414±0.054)vs(0.695±0.034),P<0.01〗],其β-catenin蛋白的异质表达率显著高于癌旁组织(85.4%vs 43.1%,P<0.01);GCA组织中SOX7基因mRNA表达情况及β-catenin蛋白的异质表达率均与该基因的甲基化状态有关(P<0.05),并且SOX7基因的甲基化状态与贲门癌患者的上消化道家族史密切相关(P<0.01)。结论:Cp G岛甲基化是SOX7基因表达下调的机制之一,并可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路的激活在贲门腺癌的发生中扮演着重要的角色。

SOX7 is involved in aspirin-mediated growth inhibition of human colorectal cancer cells

AIM:To confirm the role of sex-determining region Y-box 7(Sox7) in aspirin-mediated growth inhibition of COX-independent human colorectal cancer cells.METHODS:The cell survival percentage was examined by MTT(Moto-nuclear cell direc cytotoxicity) assay.SOX7 expression was assessed by using reverse transcription-polymerase chain reaction and Western blotting.SB203580 was used to inhibit the p38MAPK signal pathway.SOX7 promoter activity was detected by Luciferase reporter assay.RESULTS:SOX7 was upregulated by aspirin and was involved in aspirin-mediated growth inhibition of SW480 human colorectal cancer cells.The p38MAPK pathway played a role in aspirin-induced SOX7 expression,during which the AP1 transcription factors c-Jun and c-Fos upregulated SOX7 promoter activities.RESULTS:SOX7 is upregulated by aspirin and is involved in aspirin-mediated growth inhibition of human colorectal cancer SW480 cells.

SOX7对胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭的影响

目的探讨转录调节因子SOX7对人胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭能力的影响。方法以人胃癌MKN45细胞株作为研究对象,用脂质体介导转染pIRES2-EGFP-SOX7重组质粒并建立稳定过表达SOX7的MKN45细胞株,用Real-timePCR和Western blot验证SOX7过表达的情况,并检测转染前后MKN45细胞增殖和侵袭能力的变化,并用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9的表达情况。结果 Real-time PCR和Western blot证实转染后的MKN45细胞SOX7表达明显上调,转染组较对照组增殖和侵袭能力明显下降,且Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9表达明显下调。结论 SOX7在体外可以有效抑制人胃癌MKN45细胞株的增殖和侵袭,其机制可能是通过负性调控Wnt/β-catenin信号通路引起的。