红鲫胚胎发育过程中Sox8基因对壬基酚胁迫的响应

【目的】明确红鲫SRY相关高迁移率族盒蛋白8基因(Sox8)表达模式及壬基酚(NP)暴露对红鲫胚胎发育过程中Sox8基因表达的影响,为揭示NP胁迫下红鲫胚胎发育畸形的分子机制提供科学依据。【方法】运用RACE克隆红鲫Sox8基因cDNA全长序列,通过ProtParam、ProtScale、InterPro、PredictProtein、DeepTMHMM等在线软件进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测红鲫Sox8基因在各成体组织及不同胚胎发育阶段的表达情况,以及不同浓度NP暴露对红鲫胚胎期Sox8基因表达的影响。【结果】红鲫Sox8基因c DNA序列全长2163 bp,其开放阅读框(ORF)1176bp,共编码391个氨基酸残基;红鲫SOX8蛋白相对分子量为43798.30Da,理论等电点(pI)为6.90,脂溶指数为49.92,不稳定指数为66.04,总平均亲水性指数(GRAVY)为-1.026,其N端含有Sox_N二聚化结构域和HMG-box结构域;基于SOX8氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示红鲫与鲫的亲缘关系最近。红鲫Sox8基因在各成体组织中广泛表达,以脑组织中的Sox8基因相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05,下同);在红鲫胚胎发育过程中,Sox8基因的表达从受精后到14体节期呈逐渐下降趋势,但从21体节期开始Sox8基因相对表达量显著增高,直到孵化期始终维持在较高水平。在大多数情况下,NP暴露能显著影响红鲫胚胎发育过程中Sox8基因的表达,特别是14体节期后的发育阶段,NP暴露主要是不同程度地激活Sox8基因表达。【结论】Sox8基因表达在红鲫成体中具有组织特异性,且在胚胎发育过程中呈先降低后升高的变化趋势。NP暴露能显著影响红鲫胚胎发育过程中Sox8基因的表达,14体节期后Sox8基因表达水平升高可能是NP致畸红鲫胚胎的重要原因之一。

Sox8基因HMG盒区内含子剪接位点分析

Sox基因参与广泛的发育调控过程。为了确定Sox8基因HMG盒区内含子的大小及剪接位点 ,通过计算机分析本室克隆得到的泥鳅Sox8基因包括HMG盒区在内的一段基因组序列 ,推测在HMG盒区可能存在一个内含子 ,进一步通过RT -PCR方法 ,克隆泥鳅Sox8基因HMG盒区cDNA片段 ,与基因组序列比较分析 ,确认在泥鳅Sox8基因的HMG盒区存在一个内含子 ,并确定了该内含子的序列及剪切位点。同时 ,比较分析了人和泥鳅Sox8在HMG盒区的内含子的剪切位点。结果显示 ,Sox8基因HMG盒区内含子剪切位点在进化上是保守的。

四种禽类Sox8基因部分cDNA序列的克隆及其序列分析

应用RTPCR法扩增了鸭、孔雀、榛鸡和鹧鸪的Sox8基因的部分cDNA序列并测序。

SOX9在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨SOX9、SOX8在结直肠肿瘤中的表达情况及其预后意义。方法应用免疫组化EnVision法检测226例结直肠癌及41例腺瘤中SOX9、SOX8的表达,并分析蛋白表达与临床病理参数间的关系。结果SOX9、SOX8在结直肠肿瘤中均有表达。在正常黏膜、癌旁黏膜、腺瘤和腺癌中,SOX9的表达率逐渐增高,分别为9.1%(10/110)、14.0%(16/114)、48.8%(20/41)和60.1%(113/188)(P<0.01),SOX8阳性表达率为0%(0/117)、0%(0/125)、29.3%(12/41)和15.2%(31/204)。SOX9高表达仅见于结直肠肿瘤。SOX9在黏液腺癌和印戒细胞癌等中表达相对较低,而SOX8表达则主要见于黏液腺癌和印戒细胞癌。Kaplan-Meier生存曲线分析证实结直肠癌SOX9高表达为预后不良,COX比例风险模型证实SOX9高表达是结直肠癌的独立预后因素(P<0.05)。结论SOX9在结直肠癌高表达,且高表达是结直肠癌预后不良指标。