Expression Detection of DMRTs and Two sox9 Genes in Takifugu rubripes (Tetraodontidae, Vertebrata)

Sex determination and sex differentiation are important phenomena in fish, but the mechanisms of sex determination in Takifugu rubripes are poorly understood. In our study, the expression patterns of genes for DMRTs (DMRT1, DMRT2 and DMRT3), sox9a and sox9b in T. rubripes tissues were verified with the Reverse Transcription (RT)-PCR detection. It is showed that DMRT1 expressions in testis and ovaries were much lower, and no expressions were found in muscle, blood and tailfin. However, expressions for DMRT2 and DMRT3 were not found in the tissues stated above. Transcripts of sox9a were detected in muscle, fin, ovary and testis, but not in blood, whereas sox9b expression was only detected in ovary. The expression patterns of DMRTs, sox9a and sox9b in T. rubripes gonads suggest that these genes may not be sex-specific.

SOX9调控肝星状细胞活化与增殖促进肝纤维化进展

目的探究SOX9基因对肝星状细胞活化与增殖的影响。方法通过每周三次腹腔注射15%的四氯化碳或玉米油构建肝纤维化及对照小鼠模型。HE染色、Masson染色观察小鼠肝纤维化造模情况,qPCR检测小鼠肝脏SOX9、α-SMA、Col1基因表达。用TGFβ1细胞因子诱导LX2细胞活化,qPCR检测LX2细胞活化状态及敲减SOX9基因后SOX9、α-SMA、Col1、CyclinD1、PCNA基因mRNA表达。结果HE、Masson染色表明肝纤维化模型成功构建。qPCR结果表示肝纤维化标志基因α-SMA(造模组:2.568±0.726,对照组:1.000±0.272,t=4.518,P=0.002)与Col1表达明显上升(造模组:3.125±0.775,对照组:1.000±0.398,t=5.454,P=0.001)。SOX9基因在纤维化的小鼠肝脏中也显著上升(造模组:1.986±0.634,对照组:1.000±0.288,t=3.126,P=0.014)。在活化的LX2细胞中SOX9基因表达显著上调(活化组:1.718±0.395,对照组:1.000±0.155,t=3.783,P=0.005),敲减SOX9基因后胶原合成基因α-SMA(敲减组:0.621±0.142,对照组:1.000±0.188,t=3.590,P=0.007)与Col1(敲减组:0.558±0.170,对照组:1.000±0.130,t=4.608,P=0.002)以及增殖相关基因CyclinD1(敲减组:0.614±0.106,对照组:1.000±0.166,t=4.392,P=0.002)和PCNA(敲减组:0.525±0.138,对照组:1.000±0.234,t=3.897,P=0.005)表达明显下降,肝星状细胞活化与增殖被明显抑制。结论SOX9基因在肝纤维化小鼠肝脏中表达明显上升,敲减SOX9基因可以明显减轻肝星状细胞的活化,可能成为治疗肝纤维化的靶点。

远海梭子蟹Sox9基因序列测序验证与进化分析

采用全长转录组文库结合三代高通量测序的方法得到远海梭子蟹Sox9基因的全长序列,通过引物设计及PCR产物直接测序验证三代测序结果,最终准确地获得Sox9基因序列。对Sox9基因全长序列进行生物信息学及基因进化分析。结果表明该基因CDS基因序列全长1461bp,蛋白质的无规则卷曲、α-螺旋、β-折叠区域分别占58.64%、25.93%、0%。进化树分析结果表明,远海梭子蟹Sox9与三疣梭子蟹的Sox10基因同源性较高,其核酸序列和氨基酸序列的相似性分别为96.24%和98.77%。远海梭子蟹的Sox9基因鉴定和蛋白质结构预测与功能分析,将为该物种遗传资源挖掘与利用分析奠定重要基础。

史氏鲟Sox9基因cDNA的克隆及在早期发育过程不同组织中的表达

利用RT PCR和RACE的方法从史氏鲟 (Acipenserschrenckii)中克隆了Sox9基因cDNA的部分序列(114 0bp)。组织特异性表达分析表明Sox9基因在 1+ ～ 3+ 年龄史氏鲟的大脑、心脏、肝脏、眼睛、胰脏、肾脏、精巢和卵巢等 8种组织中均有表达 ,只是表达量随发育阶段和组织的不同而稍有差异。刚孵出 1日龄的史氏鲟鱼苗中Sox9微量表达 ,而孵出 15日龄的鱼苗中表达量上升。 1+ ～ 3+ 年龄的史氏鲟精巢和卵巢中Sox9基因均表达 ,说明Sox9基因在史氏鲟性别分化过程中所起的作用不明显。Sox9基因在史氏鲟不同发育时期的 8种组织中广泛表达 ,这可能与Sox9基因在脊椎动物软骨分化过程中的功能保守性有关。

SOX9在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨SOX9、SOX8在结直肠肿瘤中的表达情况及其预后意义。方法应用免疫组化EnVision法检测226例结直肠癌及41例腺瘤中SOX9、SOX8的表达,并分析蛋白表达与临床病理参数间的关系。结果SOX9、SOX8在结直肠肿瘤中均有表达。在正常黏膜、癌旁黏膜、腺瘤和腺癌中,SOX9的表达率逐渐增高,分别为9.1%(10/110)、14.0%(16/114)、48.8%(20/41)和60.1%(113/188)(P<0.01),SOX8阳性表达率为0%(0/117)、0%(0/125)、29.3%(12/41)和15.2%(31/204)。SOX9高表达仅见于结直肠肿瘤。SOX9在黏液腺癌和印戒细胞癌等中表达相对较低,而SOX8表达则主要见于黏液腺癌和印戒细胞癌。Kaplan-Meier生存曲线分析证实结直肠癌SOX9高表达为预后不良,COX比例风险模型证实SOX9高表达是结直肠癌的独立预后因素(P<0.05)。结论SOX9在结直肠癌高表达,且高表达是结直肠癌预后不良指标。

慢病毒介导的Sox9基因在兔骨髓间充质干细胞的过表达促进软骨损伤修复

目的 :明确在体内Sox9基因过表达的兔骨髓间充质干细胞对于关节软骨损伤修复的作用。方法:以慢病毒介导的Sox9基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),体外检测软骨特异性分子,将新西兰大白兔24只48个膝关节随机分为3组,动物麻醉后,双侧股骨滑车处的关节面上用直径4 mm的钻头钻孔,深度3 mm,穿透软骨下骨,造成全层关节软骨损伤,将转染后的细胞植入体内用以修复全层关节软骨损伤,实验组植入BMSCs-(Lenti-Sox9-EGFP)-藻酸钙复合物,实验对照组植入BMSCs-藻酸钙复合物,空白对照组只钻孔。术后6、12周分别进行光镜、电镜观察,以及HE、免疫组织化学染色检测软骨的修复程度。结果:经Sox9基因转染后的细胞在3 d时,Sox9基因表达最高,随后下降。转染后3 d,Ⅱ型胶原开始表达,到14 d时达到最高。表明Sox9过表达启动了兔骨髓间充质干细胞的软骨分化。组织学观察显示,实验组术后6周缺损处有透明软骨样组织填充,术后12周缺损处软骨和软骨下骨修复良好。两对照组,缺损处由纤维组织填充。免疫组织化学显示,修复组织内Ⅱ型胶原,免疫组化染色结果阳性强于两对照组。组织学评分结果显示实验组软骨损伤修复各时间点效果明显优于两对照组,差异有统计学意义。结论:Sox9基因过表达的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)促进软骨损伤的修复。

中华鳖SOX9基因在胚胎期性腺中的表达模式及在性逆转中的表达变化

SOX9基因在脊椎动物性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。从mRNA和蛋白水平分析中华鳖SOX9基因在不同组织中的差异性表达、在胚胎性腺和成年睾丸中的细胞定位以及在性逆转中的表达变化,研究SOX9基因在中华鳖性别分化中的调控作用。Real-time PCR结果显示,SOX9基因在中华鳖雄性性腺中特异性表达。免疫荧光染色分析显示,SOX9蛋白在雄性18期胚胎性腺中开始表达,随着性腺的发育,SOX9蛋白定位于性腺Sertoli前体细胞细胞核中;而在雌性胚胎性腺并未见其表达。此外,在雌激素诱导的雄性向雌性性逆转胚胎中,SOX9基因显著下调,而在芳香化酶抑制剂诱导的雌性向雄性性逆转胚胎中,SOX9基因表达则显著上升。研究表明,SOX9基因为中华鳖雄性特异性基因,参与雄性性腺的发育过程,可能在中华鳖早期性别分化过程中起调控作用。

牙鲆sox9基因的克隆与表达研究

通过Genome walking方法克隆得到了牙鲆(Paralichthys olivaceus)sox9的基因组全长序列,对其在成鱼各组织的差异表达进行了RT-PCR分析。结果显示:牙鲆sox9基因全长3 573 bp,包含3个外显子和2个内含子,编码的蛋白全长478 aa,含有高度保守的HMG结构域;sox9基因在性腺的表达具有两性差异,精巢中的表达明显强于卵巢中的表达,属1个性别相关基因,但其在肝脏、心脏、鳃、脑、眼和胃等多种组织中也有不同程度的表达。据此进一步分析和讨论等sox9基因在牙鲆性腺发育中的作用。

一新型SOX9基因致病性突变:R178L(G→T)

人SOX9基因同时参与胚胎骨骼形成和睾丸发育调控.对一例多发畸形的早产女性胎儿进行SRY基因扩增和SOX9基因突变分析,发现其具有男性特异性SRY基因,且SOX9基因发生R178L(G→T)的突变,提示该病例为SOX9基因突变导致的广泛性先天发育不良合并常染色体男→女性性反转.该突变此前未见报道,这也是中国人群中首次报道致病性SOX9基因突变.

Sox9在温度依赖型性别决定中的功能初探

在一些爬行动物中,个体的性别完全取决于胚胎发育过程中的环境温度,称之为温度依赖型性别决定(temperaturedependent sex determination,TSD).TSD的分子机制长期是个谜,特别是调控早期性腺分化的分子基础仍不清楚.本文通过表达分析和基因敲低手段研究了Sox9基因在红耳龟雄性性腺分化中的生物学功能,为TSD动物的性别决定和性腺发育的分子机制的研究奠定了基础.qRT-PCR显示,从性腺分化前的17期起,Sox9呈现产雄温度(male-producing temperature,MPT)性腺特异性高表达,而在产雌温度(female-producing temperature,FPT)性腺中表达水平极低.免疫组化进一步证实了SOX9蛋白的MPT特异性表达趋势,其定位于Sertoli前体细胞核中.温度置换实验显示,与MPT性腺相比,MPT→FPT性腺中(16期置换)的Sox9表达量从17期起就显著降低,表明Sox9能快速响应温度变化.同时MPT性腺经过雌激素处理后,Sox9表达量亦快速下调.功能缺失研究显示,经过Sox9-RNAi处理后,90.9%(20/22)的MPT性腺结构明显雌性化,皮质区高度发育,髓质区退化,揭示Sox9的敲低能导致雄性向雌性性逆转.上述研究表明,Sox9是红耳龟早期睾丸分化的关键调控因子,参与TSD的雄性分化通路.

慢病毒介导SOX9基因转染骨髓间充质细胞中的基因表达

目的:构建携带小鼠SOX9基因的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质细胞,观察小鼠SOX9基因在小鼠间充质细胞中的表达。方法:从含有小鼠SOX9基因的质粒提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增目的基因。连接目的基因与经Age-Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体,转化感受态的大肠杆菌对质粒进行扩增,筛出阳性转化子,经293T细胞包装,收集病毒后,通过基因测序和限制性核酸内切酶酶切的方法对质粒进行鉴定。Lenti-SOX9-EGFP体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠SOX9基因的表达。结果:成功构建了携带SOX9基因慢病毒载体,Lenti-SOX9-EGFP能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western Blot检测显示经SOX9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞表达目的基因产物。结论:利用慢病毒介导SOX9基因成功地转染小鼠骨髓间充质细胞,而且SOX9基因在小鼠骨髓间充质细胞中得到表达,这为SOX9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础。

Sox9和amh基因在雌、雄虹鳟和伪雄鱼各组织中的表达模式分析

本研究利用Real-timePCR分析和比较sox9与amh基因在雄、雌虹鳟Oncorhynchus mykiss及及其伪雄鱼各组织中的表达模式。结果表明:sox9基因在这三种鱼性腺、脑、脾、肝以及脑垂体中的表达显著高于其他组织(P<0.05)。在性腺组织中,sox9基因在雄鱼中的表达量显著高于伪雄鱼(P<0.01),而在伪雄鱼中的表达量又显著高于普通雌鱼(P<0.01)。脑组织中,雌鱼sox9的表达显著高于雄鱼和伪雄鱼(P<0.05)。Amh基因在性腺和脑组织中的表达显著高于其他组织(P<0.05)。该基因在伪雄鱼性腺和脑中的表达均显著高于雄鱼和雌鱼(P<0.05)。结果表明,外源雄激素的诱导可导致伪雄虹鳟性腺和脑组织中sox9和amh基因的表达显著高于雌性虹鳟,促进其性腺的雄性化发育。本研究可为全雌性虹鳟制种技术研究奠定重要理论基础。

软骨细胞分化过程中SOX9的作用

背景:软骨细胞是软骨修复工程种子细胞的来源,软骨细胞分化与软骨内骨化密切相关,软骨内骨化是必不可少的骨骼发育过程。SOX9对软骨细胞调控起着重要作用。目的:综述SOX9在不同水平对软骨细胞分化的调控机制的最新研究进展。方法:应用计算机检索CNKI、PubMed及万方医学数据库从建库至2020年12月发表的相关文献,中文关键词为“软骨,软骨细胞,SOX9基因表达调控,转录后调控,蛋白质加工,翻译后修饰,功能伙伴”;英文关键词为“Cartilage,chondrocyte,posttranscriptional regulation,posttranslational modification,SOX9,transcriptional regulation,Gene Expression Regulation,SOX9 Transcription Factor”。最终纳入61篇符合标准的文献进行综述。结果与结论:在基因、RNA和蛋白质水平上参与SOX9调控的关键机制已经被发现,通过SOX9关键因子作用可以直接或间接促进软骨细胞成骨生长,有正向促进,也有反向抑制,以及各因素之间相互作用。SOX9是软骨细胞分化及促进软骨形成的关键因子;通过系统分析SOX9在不同水平调控的分子机制为软骨组织工程化提供理论基础,可以更快实现软骨疾病的临床治疗应用。

腺病毒介导的Sox9基因对椎间盘退变动物模型的疗效

目的:探讨腺病毒介导的Sox9基因对兔腰椎间盘退变模型的疗效。方法:采用新西兰大白兔的纤维环损伤法制作腰椎间盘退变模型,24周后,用注射法将腺病毒介导的Sox9基因注射到退变的椎间盘组织观察退变椎间盘组织的变化,行磁共振扫描拍片观察椎间盘变化情况,同时,取椎间盘用精确定量RT-PCR观察Ⅱ型胶原(Col2 al)mRNA的变化。结果:核磁共振扫描拍片证实椎间盘退变有所恢复,精确定量RT-PCR法证实Sox9基因在转录水平上调了Col2 al。结论:腺病毒介导的Sox9基因对兔椎间盘退变模型有明显治疗作用。

椎间盘髓核细胞中Sox9与Ⅱ型胶原基因表达的关系

目的:探讨椎间盘髓核组织中Sox9基因表达的变化及其与Ⅱ型胶原基因表达的关系。方法:将30个椎间盘组织按Thompson分期分为Ⅰ～Ⅳ期,应用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测各期间盘组织中Sox9、Ⅱ型胶原基因的mRNA和蛋白表达;应用SPSS10.0统计学软件,采用单因素方差分析、t检验和Pearson相关性检验分析两者的相互关系。结果:椎间盘髓核组织中Sox9mRNA的表达量在总体上低于Ⅱ型胶原,Sox9蛋白表达位于细胞核中而Ⅱ型胶原主要位于细胞间质内,Sox9在ThompsonⅠ期椎间盘的细胞核内表达很强而在Ⅳ期则很弱甚至缺失;从ThompsonⅠ～Ⅳ期两种基因的mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,各分期间有显著性差异(P<0.05)。ThompsonⅠ～Ⅳ期标本中Ⅱ型胶原与Sox9表达量的下降趋势相近。结论:Sox9和Ⅱ型胶原基因表达水平与Thompson分期密切相关,随椎间盘退变程度加重表达逐渐降低,且两者下降趋势相近。

Sox9基因在马蹄内翻足大鼠模型足踝软骨组织表达的实验研究

目的:研究Sox9基因在软骨组织表达异常是否与马蹄内翻足发病相关。方法:制作先天性马蹄内翻足(idiopathiccongenital talipes equinovarus,ICTEV)大鼠模型,取其足踝软骨组织,用RT-PCR及免疫组化方法对Sox9基因表达量和部位与对照组进行对比分析。结果:Sox9基因在ICTEV大鼠模型足踝软骨组织的表达无论是在mRNA还是蛋白水平均比对照组高。结论:Sox9基因在ICTEV大鼠模型足踝的软骨组织表达升高可能与马蹄内翻足发病相关。

SOX9基因修饰骨髓间充质干细胞并诱导其向髓核样细胞分化的实验研究

目的探讨SOX9慢病毒载体感染兔骨髓间充质干细胞(MSC)并诱导其向髓核样细胞的分化。方法构建SOX9基因慢病毒载体并感染MSC,将MSC分为未转导组、空转导组及SOX9转导组。采用流式细胞仪检测MSC的感染率及凋亡率,MTT检测MSC的增殖情况,RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色检测MSC中SOX9、Ⅱ型胶原及Aggrecan在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建SOX9基因慢病毒载体并感染MSC,感染率为100%。慢病毒载体感染对3组MSC的增殖及凋亡无明显影响;感染2周后,SOX9转导组MSC中SOX9及Ⅱ型胶原在mRNA及蛋白水平的表达均明显高于未转导组与空转导组(P<0.01),Aggrecan mRNA及蛋白仅在SOX9转导组MSC中表达;SOX9转导组MSC中Ⅱ型胶原及Aggrecan荧光染色呈阳性,而空转导组及未转导组MSC均呈阴性。结论 SOX9慢病毒载体感染的MSC可被诱导向髓核细胞分化。

沙培林联合SOX9基因siRNA对胃癌细胞生长抑制的机制研究

目的探讨沙培林或SOX9siRNA对胃癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法 人胃癌BGC803细胞分为空白对照组、沙培林组、siSOX9组和沙培林+siSOX94个处理组,其中siRNA的转染参照LipofectamineTM2000说明,MTT、流式细胞术、Westernblotting分别检测细胞活力、凋亡率及SOX9、β-catenin、cyclinD1和Bax的蛋白表达。结果转染SOX9siRNA的BGC803细胞SOX9蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05)。沙培林组和siSOX9组细胞活力降低,凋亡率升高,β-catenin和cyclinD1蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而沙培林和siSOX9联合使用对细胞活力、凋亡率及β-catenin、cyclinD1和Bax的蛋白表达影响更显著,且与沙培林组和siSOX9组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论沙培林或SOX9siRNA均可抑制胃癌细胞活力,诱导细胞凋亡,联合对细胞活力抑制及凋亡促进作用更明显,机制可能与Wnt/β-catenin信号的下调有关。

综合分析TCGA与GEO甲基化数据鉴定胆管癌预后相关基因SOX9和FZD10

目的鉴定胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)甲基化与表达谱综合生物标志物,预测CCA患者预后。方法从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)下载33例CCA样本和8例正常样本基因组甲基化数据及临床信息表达谱数据,同时从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)下载甲基化数据进行验证。鉴定差异甲基化基因(DMGs)与差异表达基因(DEGs)的交集基因,采用Cox比例风险回归模型鉴定甲基化生物标志物,并使用ROC曲线来评估该模型的性能。在验证组中对该模型进行验证,通过GO功能注释,探讨DNA甲基化标志物的生物学功能。结果通过对TCGA甲基化数据分析,共鉴定出600个差异甲基化基因和6876个差异表达基因,并从中筛选出与生存相关的2个甲基化基因(SOX9和FZD10),最终将SOX9和FZD10组合基因构建预后预测模型,作为CCA预后的生物标志物。ROC曲线下面积(AUC)为0.90。SOX9和FZD10组合生物标志物能够将CCA患者区分为高风险组和低风险组,低风险组患者总生存期明显高于高风险组(2.07年vs 0.92年)。多因素Cox回归分析表明,SOX9和FZD10组合生物标志物是CCA患者预后的独立预测因子。基因本体(GO)功能分析表明,SOX9和FZD10参与转录因子、转录调控、肿瘤蛋白多糖调节和干细胞的调控。结论本研究经过多组学分析,在TCGA数据中筛选出SOX9和FZD10基因组合的甲基化预后标志物,可以将CCA患者分为高风险组与低风险组,并且该组合基因是CCA独立的预后预测因子。

SOX9基因判断前列腺癌恶性程度及生化复发的预测

目的:探讨SOX9基因在判断前列腺癌恶性程度及预测前列腺癌去势后生化复发的作用。方法:通过Oncomine公共数据库查询SOX9基因在前列腺癌中的表达情况;RT-QPCR法检测SOX9基因在前列腺癌细胞株DU145、LNCap、PC3和正常前列腺细胞株RWPE-1中的表达;免疫组织化学法检测106例前列腺癌癌组织与癌旁组织中的SOX9基因表达情况,并结合前列腺癌患者临床病理参数进行分析;建立SD大鼠手术去势模型,检测SOX9基因在去势后大鼠前列腺组织中的表达情况。结果:SOX9基因在前列腺癌组织中呈高表达;SOX9基因在PC3细胞株中的表达水平显著高于RWPE-1细胞株(P=0.004);106例前列腺癌癌组织中62例呈SOX9阳性表达,癌旁组织中26例呈SOX9阳性表达;SOX9基因在前列腺癌组织中的表达水平明显强于癌旁组织,两者比较,差异有统计学意义(P=0.000);SOX9高表达与前列腺癌患者血清PSA水平(P=0.007)、Gleason score(P=0.034)和肿瘤TNM分期(P=0.013)呈正相关,而与年龄(P=0.179)无明显相关性;对照组和模型组分别有2只、9只SD大鼠前列腺组织SOX9染色阳性,两组比较,差异有统计学意义(P=0.005)。结论:SOX9基因的高表达与肿瘤的恶性程度相关,可结合血清PSA水平对前列腺癌疑似患者进行早期诊断并判断前列腺癌的恶性程度,还可用来预测生化复发速度。