异源四倍体鲫鲤Sox9a基因保守区序列的克隆及内含子剪接位点分析

用特异于HMG box保守区的兼并引物扩增了异源四倍体鲫鲤及其原始亲本 (红鲫和鲤鱼 )的Sox基因 .异源四倍体鲫鲤的扩增产物共有 4条带 ,大小分别约为 2 0 0 ,6 0 0 ,90 0和1 90 0bp,而其原始亲本的扩增产物只有 3条带 ,且在雌雄个体中未发现性别特异扩增带 .回收雄性四倍体鱼 6 0 0bp扩增带 ,经亚克隆及测序分析得到一个新的编码 71个氨基酸残基的基因 .该基因与虹鳟鱼 (Oncorhynchusmykiss)、蟾蜍 (Xenopuslaevis)、鲤鱼 (Cyprinuscarpio)等的Sox9基因相似性达 97% ,据此命名为Atsox9a .通过计算机分析和RT PCR方法确定该基因含有内含子 ,并获得其内含子的序列和剪切位点 ,此内含子剪切位点在进化上是保守的 .