流式细胞仪平台支撑本科细胞生物学实验课教学改革的实践

在流式细胞术检测细胞凋亡实验中,借助流式细胞仪平台,从教学模式、实验内容、仪器准备、教学素材等方面对细胞生物学实验课进行改革,取得了较好的教学效果。这种仪器平台与教学团队共同探索教学改革的模式,充分发挥大型仪器设备在人才培养方面的潜能,可为其他高校仪器平台建设提供参考。

流式细胞仪样品预处理系统的设计与实现

根据流式细胞仪对样品“均一化”的需求,研制了一套基于微流控细胞分选技术的流式细胞仪样品预处理系统,装置可以实现对粒径小于100µm细胞或微粒的驱动和分选.系统主要包含微流控分选芯片和样品驱动模块两部分,通过聚焦不同位置,实现了对不同粒径细胞/颗粒的有效分离.系统无需对细胞进行标记处理,经分选的细胞便于后续流式细胞仪检测.经验证,系统能够有效去除牡蛎血淋巴细胞样品中的大粒子杂质,提高细胞样品的稳定性和均一性,增加流式细胞仪检测结果的准确性.

基于流式细胞仪的激光器驱动系统研究与设计

为获得适用于流式细胞仪的功率稳定、波长稳定、低噪声的激光光源,设计了一款恒功率控制的半导体激光器驱动系统。系统采用多量子阱激光二极管,以STM32为主控核心,以MAX8521芯片为温度控制核心,采用双闭环功率控制,实现对激光器输出光功率的高精度低噪声控制。实验结果表明,该系统的温度波动在±0.016℃范围内,温度控制不稳定度为±0.055%,输出光功率长期不稳定度为±0.078%,光噪声率为0.109%,输出光波长稳定在637~638 nm,仪器分辨率的全峰宽变异系数均小于等于1.70%,优于YY/T0588-2017流式细胞仪行业标准的要求。所设计的半导体激光器驱动系统温控精度高、输出长期稳定、光噪声小、成本低,能够有效满足流式细胞仪检测的需求。

流式细胞仪对甘蓝花粉倍性的测定

利用流式细胞仪测定甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)花粉的倍性,以甘蓝GL21028的花粉为材料,以叶片为对照,比较花粉2种处理方式、3种不同细胞裂解液、2种核酸染料的效果差异。通过B缓冲液处理后获取的花粉细胞可以直接染色,为最简便处理方式;采用“Aru”buffer和Y 2种裂解液,染色剂DAPI,处理甘蓝叶片和花粉,通过流式细胞仪检测,样本细胞DNA成峰集中,细胞碎片很少;配制的Y裂解液能够适用甘蓝材料流式细胞仪的观察。甘蓝花粉通过B缓冲液处理后,可以直接作为流式细胞仪倍性鉴定的材料,不再需要其他处理,配制的Y裂解液可以得到较好的试验结果。

流式细胞仪在微生物学实验教学中的应用与实践

基于高校大型分析仪器面临使用效益的挑战,不仅细胞生物学实验使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,根据流式细胞仪的操作简单、分析速度快、精确度高等特点,微生物学实验课程也将其融入。通过设计“酵母菌死活细胞鉴定及计数”实验项目,实现现代生命科学仪器分析技术与微生物学实验的有效融合。在实验教学中通过新技术方法与传统实验方法进行对比,不仅提高了大型仪器的使用效益也丰富了实验教学内容,从而使得实验教学效果得到显著提升。

流式细胞仪及光学系统设计

本文设计了流式细胞仪和光学系统,以实现对细胞的高效分析和检测。首先,介绍流式细胞仪的原理和结构,重点讨论设计参数的选择与优化。其次,对鞘流系统进行仿真设计,以保证流体的稳定流动和样本的准确检测。再次,设计激发光源和光束成形系统并进行验证,保证光源的稳定性和光束的精准成形。最后,对散射光探测光路进行设计和验证,以准确捕获和分析样本散射光。本文研究可为流式细胞仪和光学系统设计提供参考。

流式细胞仪在恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群中的检测价值

目的 探讨流式细胞仪在恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群中的检测价值。方法 选取2019年4月至2023年4月于南昌市一人民医院住院的82名恶性淋巴瘤患者作为试验组,另选择同期82名健康体检者作为对照组,均采用流式细胞术测定外周血T细胞亚群(CD3^(+),CD4^(+),CD8^(+),CD4^(+)/CD8^(+))。比较所有受检者外周血T细胞亚群的变化。结果 试验组CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);两组CD4^(+)、CD8^(+)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据肿瘤类型将试验组分为霍奇金淋巴瘤组和非霍奇金淋巴瘤组,两组间各项外周血T细胞亚群指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组的CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);三组CD4^(+)、CD8^(+)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据肿瘤分期将试验组分为Ⅰ~Ⅱ期组和Ⅲ~Ⅳ期组,Ⅰ~Ⅱ期组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于Ⅲ~Ⅳ期组,差异均有统计学意义(P <0.05)。Ⅰ~Ⅱ期组CD3^(+)水平低于对照组,CD8^(+)高于对照组;Ⅲ~Ⅳ期组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 采取流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群水平,可以有效诊断患者病情、分期和免疫状态,应用效果显著。

流式细胞仪共享平台建设与标准化管理探索

生物学国家级实验教学示范中心利用现代化预约管理系统,将学院的流式细胞仪纳入统一管理,探讨流式细胞仪共享平台建设及其标准化管理。实践表明,流式细胞仪数据的准确性和可重复性得到有力保障,仪器利用率提升和使用寿命延长,有助于学生掌握流式技术和研究方法,充分发挥了流式细胞仪对科研和教学的支撑作用。

流式细胞仪检测香花油茶、越南油茶基因组大小方法的建立及应用

为香花油茶(Camellia osmantha)、越南油茶(C. vietnamensis)优良品系基因组大小遗传多样性分析及特异种质筛选、倍性差异分析提供参考,针对解离液种类、内参植物、试验材料组织器官等关键环节,以细胞核解离情况、次生代谢物质降解情况、细胞峰出峰稳定情况、主峰清晰程度、主杂峰分离程度、取材容易程度、内参与待测样品基因组大小差异情况、基因组大小测定准确性及变异系数等方面为评价指标,构建基于香花油茶良种义禄(Camellia osmantha var. Yilu)、越南油茶优良品系鸿鸪23(C. vietnamensis var. Hongu 23)为试材的流式细胞术基因组大小检测技术体系,并用于香花油茶、越南油茶优良品系的测定。结果表明:研究发现4种常见的解离液WPB、Tris-MgCl2、OTTO、mGb中WPB、mGb解离效果较好,内参植物以豌豆、玉米为优先,试验材料组织器官以嫩叶或根尖为宜;香花油茶优良品系基因组大小在5.12~9.31 Gb之间变化,均值为7.60 Gb,1号、37号、45号种质在基因组大小分布上存在极端性,推测其存在倍性差异或其亲本间存在种间杂交;越南油茶优良品系基因组大小在9.17~9.85Gb之间变化,均值为9.47 Gb。香花油茶与越南油茶优良品系群体间在基因组大小上存在明显差异。

流式细胞术检测荧光素标记结核杆菌的方法

目的:建立流式细胞术检测荧光素标记结核杆菌(M.tb)的方法。方法:以异硫氰酸荧光素(FITC)、二乙酸荧光素(FDA)、PKH26和碘化丙啶(PI)标记M.tb,应用流式细胞仪检测M.tb标记率。结果:FITC标记M.tb,在PBS缓冲液中,不同浓度FITC(10~40μg/ml)标记率随浓度增加而增高,FITC浓度10μg/ml标记率为85%,FITC浓度增加到40μg/ml标记率可达到93%,差异具有统计学意义(P<0.05);而在CB缓冲液中,不同浓度FITC(10~40μg/ml)标记M.tb标记率均在90%左右,差异无统计学意义(P>0.05)。FDA标记M.tb标记率均达到92%以上。PKH26标记M.tb标记率均达到90%以上。PI标记M.tb,酒精作用1 min标记率在47%左右,酒精作用2 min标记率达到97%左右,且标记率随时间增加而增高(P<0.05)。结论:建立流式细胞术检测荧光素标记M.tb的方法可为结核病基础研究提供实验思路。创新性建立应用荧光素FITC、FDA、PKH26、PI标记M.tb,并利用流式细胞术检测标记率,可为结核病基础研究提供实验思路。

流式细胞分选仪研究进展与展望

流式细胞技术一直是生物细胞研究的重要手段,近年来流式细胞分选仪在细胞富集、筛选后再利用等方面的应用使得对能够满足高通量、高细胞信息提取、高细胞活性要求的流式细胞分选仪的需求增加。本文阐述基于光学探测方法的流式细胞分选仪结构、工作原理及其发展现状出发;提出在光学流式细胞分选仪研究领域出现无标记化和微流控芯片化两种新的发展趋势。在两种发展趋势下,无标记成像方法、微流控片上分选系统和片上压电致动器集成分选等新兴技术越来越多地应用到光学流式细胞分选仪的研发设计中,本文从技术特性、性能优势、应用前景等方面对这些技术的研究进展以及面临的挑战进行了总结和展望,供流式细胞分选技术的使用者及研究者参考。

流式细胞仪在细胞绝对计数方法中的应用及其进展

细胞绝对计数是一项重要的实验参数,对于医学研究以及临床检验等方面具有重要的作用。细胞绝对计数的发展从使用血细胞计数板到应用流式细胞仪,已衍生出多种方法。本文将阐述不同的细胞绝对计数方法,比较不同方法的原理及优缺点,为医学研究以及临床检验等方面选择适宜的绝对细胞计数方法提供参考。

基于注册审评的流式细胞仪配套检测试剂的临床评价概述

从体外诊断试剂注册技术审评角度出发,以流式细胞仪配套检测试剂为例,从法规依据、临床评价的分类及要求、临床评价的主要关注点等方面进行了阐述,尤其对临床评价的样本量要求、评价指标、对比试剂的选择、临床试验的监查与质控等方面进行了重点介绍,旨在为注册申请人对该类产品进行临床评价提供技术指导,同时为技术审评部门对临床评价资料的技术审评提供参考。

流式细胞分选仪的维护管理及异常处理

流式细胞分选仪是科研、临床检验等领域的重要设备,该设备昂贵精密、操作复杂、运行维护成本高。因此,科学管理使用、规范维护保养及精通常见异常处理有助于减少故障频次,使用寿命,保障仪器的稳定运行,从而为科研及临床检验等提供有力支撑。以流式细胞分选仪(Moflo XDP)为例,结合丰富的使用经验,深入分析了该设备的维护管理及异常处理方法,分享设备管理经验,供大型仪器管理工作者参考。

流式细胞仪进样速度对细胞计数的影响

流式细胞术（flow gytometry，FCM）是利用流式细胞仪，用高灵敏度检测器记录下散射光及各种荧光信号，对液流中的细胞或其他微粒进行快速测量的新型分析和分选技术．流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，

流式细胞仪鉴定猕猴桃倍性技术研究

利用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)对不同倍性猕猴桃DNA的相对含量进行测定,建立一套简易、快速的鉴定猕猴桃倍性方法。以二倍体"红阳"猕猴桃为对照,‘81-5'、‘皖翠'猕猴桃为试材,通过筛选最优鉴定叶片部位;改良解离液配方;提高滤膜的目数;过滤次数;增加离心次数等优化鉴定技术。结果表明,露地栽培条件下,茎尖下初展叶是倍性鉴定的最佳部位;两次离心;解离液中2%PVP-30;500目滤膜抽滤两次可以有效解决仪器堵管现象,有效去除杂质峰并获得清晰样品峰。通过优化后的鉴定技术可实现同时测定2个以上倍性的猕猴桃混合样品。

利用流式细胞仪研究温度对两种藻竞争的影响

为研究温度对微囊藻优势形成的影响,本试验利用流式细胞仪研究了不同温度时铜绿微囊藻(Microcystis aerugi- nosa)与蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)间的竞争关系,在单独培养和混合培养条件下分别对两种藻细胞密度比值和细胞内叶绿素a(Chla)荧光强度进行了测定．结果表明在本试验条件下,随着温度的升高(18℃,25℃和32℃),混合培养组中微囊藻优势逐渐明显,小球藻Chla荧光强度随着温度的升高而升高,微囊藻Chla荧光强度随着温度的升高却有所降低．说明在光照适宜、高营养盐的水体中,较高的温度对铜绿微囊藻成为优势种具有明显的促进作用,进而影响着微囊藻水华的形成．

使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究

本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。

用流式细胞仪鉴定中华猕猴桃的多倍体

中华猕猴桃叶中酚类物质多而黏性较大,对流式细胞仪检测多有不便。文章参照已有方法,改进细胞核提取液配方和提取方法,建立了快速、准确鉴定秋水仙素诱导中华猕猴桃多倍体的方法,效果较好。

外周血循环中肺癌细胞的流式细胞仪定量分析

目的 运用流式细胞仪定量分析外周血循环中肺癌细胞。方法 外周血经Ficoll梯度离心分离单核细胞组分,后者用CD45、细胞角蛋白(CK)及肺癌特异性单抗(2F7/S5A)染色后,应用流式细胞仪检测CD45- CK+ 2F7/S5A+ 细胞。然后计算每升血中上述细胞含量。结果 (1)外周血单核细胞的表型为CD45+ CK- 2F7/S5A- ,而小细胞和非小细胞肺癌细胞系均为CD45- CK+ 2F7/S5A+ 。因此,应用此方法能从106 白细胞中检测到1个肺癌细胞,敏感性达到每毫升血中检测到5 个肺癌细胞;(2)15 例正常人及7 例肺部良性疾患外周血中CD45- CK+ 2F7/S5A+ 细胞均为阴性,而40例肺癌患者外周血14 例发现阳性细胞,阳性率达35 % ,阳性细胞含量平均为1×105 /L。结论 本方法具有较好的敏感性和特异性。