黑鲷精子的超低温冻存及DNA损伤的SCGE检测

以0.5mL的麦细管为冻存管和DMSO为抗冻剂进行超低温冷冻黑鲷精子,对冻精核DNA的损伤情况进行单细胞凝胶电泳(SCGE)检测,其结果表明,以Cortland溶液为稀释液,5%、10%、15%及20%DMSO为抗冻剂的超低温冻存的黑鲷精子活力、受精率与鲜精无显著差异。其中以10%DMSO为抗冻剂的冻存效果最佳,冻精的激活率、运动时间、寿命及受精率分别达(92.91±1.25)%、(39.90±2.70)min、(53.82±2.84)min及(89.35±1.99)%;而以25%及30%DMSO为抗冻剂时,冻精活力及受精率显著下降。SCGE检测结果显示,DMSO浓度为5%、10%、15%及20%时,黑鲷冻精与鲜精的彗星率及损伤系数差异不显著;DMSO浓度为25%及30%时,冻精与鲜精的彗星率及损伤系数差异显著;冻精的彗星率与抗冻剂DMSO浓度成正相关。黑鲷鲜精及冻精核的DNA损伤主要为轻度和中度损伤,重度损伤比例较低,完全损伤仅存在于25%及30%DMSO为抗冻剂的冻精中,且比例低。分析认为,较高浓度的DMSO是引起冻精核DNA损伤的主要原因。

黑鲷精子的超低温保存研究

对黑鲷精子的超低温保存技术进行了初步探讨 ,黑鲷(Sparusmacrocephalus)精子经过超低温保存后复苏率、存活率最高可以达到61.37 %和61.4 %。保存黑鲷精子时发生冷冻伤害的温度范围是 -20～ -60℃ ,适宜的降温速率为20℃/min ;使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20 % ;样品体积对保存效果有相关性 ;利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高 pH值的溶液 ;使用20 %DMSO和20℃/min降温速率处理 ,在液氮中保存黑鲷精子66d后解冻 ,其复苏率和存活率分别为59.81%和58.45%。