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Isolated anti-HBc is an independent risk factor for tumor recurrence in intrahepatic cholangiocarcinoma after curative resection 被引量:2
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作者 Xiao-Bo Xu Chen Hu +1 位作者 Han-Jin Yang Shu-Sen Zheng 《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS CSCD 2022年第5期472-478,共7页
Background:Intrahepatic cholangiocarcinoma(ICC)is a poorly understood and aggressive malignancy with increasing incidence and mortality.Hepatitis B virus(HBV)infection is recognized as one of the important risk factor... Background:Intrahepatic cholangiocarcinoma(ICC)is a poorly understood and aggressive malignancy with increasing incidence and mortality.Hepatitis B virus(HBV)infection is recognized as one of the important risk factors of ICC.There are few reports focusing on whether isolated antibody to hepatitis B core antigen(isolated anti-HBc,IAHBc)have prognostic role in ICC,while positive hepatitis B surface antigen(HBsAg)has been reported to be associated with the prognosis of ICC.The aim of this study was to investigate the prognostic value of IAHBc in ICC patients after curative resection,in order to identify those who have the high risk of ICC recurrence in the early stage.Methods:We divided 209 ICC patients who underwent curative resection into 4 groups:groupⅠ(n=40),HBsAg(-)/antibody to hepatitis B surface antigen(anti-HBs)(-)/anti-HBc(+);groupⅡ(n=70),HBsAg(+)/anti-HBc(-);groupⅢ(n=55),HBsAg(-)/anti-HBs(+)/anti-HBc(+);and groupⅣ(n=44),HBsAg(-)/anti-HBc(-).We compared the recurrence-free survival(RFS)and overall survival(OS)among these four groups.Results:The median follow-up time was 16.93 months(range 1-34.6 months).The 1-and 2-year RFS and OS rates were 60%and 42%,and 78%and 63%respectively in all patients.Compared to the whole non-IAHBc patients(groupⅡ+groupⅢ+groupⅣ),IAHBc patients(groupⅠ)showed significantly lower RFS at 1 year(39.8%vs.64.4%,P=0.001)and 2 years(20.7%vs.46.7%,P=0.001).When compared to other three individual groups,IAHBc patients(groupⅠ)also had the lowest RFS.We did not find significant difference in OS among the four groups.Further multivariate analysis revealed that IAHBc was an independent risk factor of RFS.Conclusions:IAHBc is an independent poor prognostic factor for tumor recurrence in ICC patients after curative resection. 展开更多
关键词 CHOLANGIOCARCINOMA Hepatitis B virus isolated antibody to hepatitis B core antigen Occult hepatitis B infection
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Porcine hepatocyte isolation and reversible immortalization mediated by retroviral transfer and site-specific recombination 被引量:6
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作者 Meng, Fan-Ying Chen, Zhi-Shui +7 位作者 Han, Meng Hu, Xin-Peng He, Xing-Xing Liu, Yong He, Wen-Tao Huang, Wei Guo, Hui Zhou, Ping 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2010年第13期1660-1664,共5页
AIM: To develop a hepatocyte cell line, we immortalized primary porcine hepatocytes with a retroviral vector SSR#69 containing the Simian Virus 40 T antigen (SV40T ag). METHODS: We first established a method of porcin... AIM: To develop a hepatocyte cell line, we immortalized primary porcine hepatocytes with a retroviral vector SSR#69 containing the Simian Virus 40 T antigen (SV40T ag). METHODS: We first established a method of porcine hepatocyte isolation with a modified four-step retrograde perfusion technique. Then the porcine hepatocytes were immortalized with retroviral vector SSR#69 expressing SV40T and hygromycin-resistance genes flanked by paired loxP recombination targets. SV40T cDNA in the expanded cells was subsequently excised by Cre/LoxP site-specific recombination. RESULTS: The resultant hepatocytes with high viability (97%) were successfully immortalized with retroviral vector SSR#69. One of the immortalized clones showed the typical morphological appearance, TJPH-1, and was selected by clone rings and expanded in culture. After excision of the SV40T gene with Cre-recombinase, cells stopped growing. The population of reverted cells exhibited the characteristics of differentiated hepatocytes. CONCLUSION: In conclusion, we herein describe a modified method of hepatocyte isolation and subsequently established a porcine hepatocyte cell line mediated by retroviral transfer and site-specific recombination. 展开更多
关键词 Hepatocyte isolation Porcine hepatocytes Reversible immortalization Simian virus 40 large T-antigen
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不同ELISA检测方法在检测出壳雏鸡禽白血病病毒感染中的应用 被引量:1
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作者 崔慧珍 张亚文 +2 位作者 王一新 常爽 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期27-34,共8页
通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和AL... 通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K感染组,以无菌生理盐水作为对照组,在8胚龄时以卵黄囊接种的方式感染SPF鸡胚,建立鸡胚携带ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的垂直感染模型。采集各组雏鸡胎粪样品和血浆样品,死亡鸡胚肝脏样品,死亡雏鸡胎粪样品、血浆样品和肝脏样品,其中血浆和肝脏样品需接种鸡胚成纤维细胞系(DF-1细胞)进行病毒分离,各样品以4家公司提供的ALV-p27抗原ELISA试剂盒进行检测,并以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行平行检测,比较阳性检出率和灵敏度。结果显示,4家公司的ALV-p27抗原ELISA试剂盒对于同一样品的阴阳性判定结果基本一致,但灵敏度存在差异;胎粪样品直接ELISA检测不能将ALV阳性鸡只全部检出,相对于胎粪样品,血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测更具有灵敏度优势。本试验所建立的对比方法不仅有助于评估4家公司ELISA试剂盒的灵敏度,还进一步评估了胎粪样品直接ELISA检测与血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测2种评估方法的灵敏度,为科学选择灵敏特异的ALV检测方法提供了良好评价模型。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 胎粪 P27抗原 ELISA 病毒分离
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挤压膨化温度对大豆分离蛋白抗原性及结构的影响
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作者 常永锋 陈屹轩 +3 位作者 布冠好 高雪丽 赵青青 罗琼 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期13-19,共7页
旨在为开发大豆蛋白的脱敏技术提供参考,对大豆分离蛋白(SPI)进行挤压膨化处理,对不同挤压膨化温度下SPI的抗原性、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、氨基酸组成、溶解度、紫外吸收光谱、内源荧光光谱及表面疏水性进行分... 旨在为开发大豆蛋白的脱敏技术提供参考,对大豆分离蛋白(SPI)进行挤压膨化处理,对不同挤压膨化温度下SPI的抗原性、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、氨基酸组成、溶解度、紫外吸收光谱、内源荧光光谱及表面疏水性进行分析。结果表明:随着挤压膨化温度的升高,SPI抗原性呈现先降低再升高的趋势,145℃时SPI的抗原性下降最为显著;SPI中抗原蛋白β-伴大豆球蛋白的α、α′、β亚基以及大豆球蛋白的酸性亚基和碱性亚基均发生明显降解;SPI的氨基酸组成、必需氨基酸含量与氨基酸总量比值无明显变化,营养性保持良好;SPI溶解度降低;氢键、二硫键、疏水相互作用均是维持SPI空间结构的分子作用力,其中氢键起主要作用;SPI的紫外光谱和内源荧光光谱均出现不同程度的红移,紫外吸收强度及荧光强度发生变化,表面疏水性显著下降,SPI的三级结构发生改变。综上,挤压膨化能够在一定程度上降低SPI的抗原性,并影响其空间结构。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 挤压膨化 抗原性 蛋白质结构
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两步酶解法制备低致敏性乳清蛋白及其致敏性评价
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作者 张贤莉 黄玉浩 +4 位作者 韩玥颖 张磊 林芸芸 林洪 李振兴 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第7期103-112,共10页
目的探究两步复合酶解工艺处理对牛乳清蛋白(whey protein isolate,WPI)结构和致敏性的影响。方法实验采用邻苯二甲醛法、体积排阻色谱法分析WPI水解物在不同酶解时间下的水解程度,同时采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoassay,EL... 目的探究两步复合酶解工艺处理对牛乳清蛋白(whey protein isolate,WPI)结构和致敏性的影响。方法实验采用邻苯二甲醛法、体积排阻色谱法分析WPI水解物在不同酶解时间下的水解程度,同时采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoassay,ELISA)、细胞模型和小鼠模型对水解物进行体外和体内的致敏性评估,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)分析水解物中的残留过敏原表位。结果WPI经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶顺序酶解3.0 h后水解度达到14.19%,在水解2.0~3.0 h期间,WPI水解物主要由小肽(<5.0 kDa)组成。水解3.0 h后,水解产物与特异性抗体的结合能力降低了97.83%,细胞模型和小鼠模型结果证实,酶解产物的体外、体内致敏性显著降低,与空白对照组无显著性差异。UPLC-MS/MS结果表明WPI水解3.0 h产物中70.59%的肽段不含过敏原表位。结论复合酶解工艺有效降低了WPI致敏性,本研究构建的致敏性综合评价体系可为低敏乳制品水解工艺的开发提供指导。 展开更多
关键词 乳清蛋白 水解 残留抗原性 过敏原表位 致敏性评价
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新疆双峰驼抗血清中重链抗体的分离鉴定 被引量:7
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作者 夏丽洁 苏幼红 +3 位作者 张清华 夏雪琴 刘红春 李江伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第17期3660-3666,共7页
【目的】初步探讨新疆双峰驼Camelus bactrianus免疫系统中缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb)是否具有常规抗体的基本抗原结合功能。【方法】采用本实验室构建的丹毒丝菌表面蛋白A原核表达载体pGEX4T-1-spaA-N,进行诱导表... 【目的】初步探讨新疆双峰驼Camelus bactrianus免疫系统中缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb)是否具有常规抗体的基本抗原结合功能。【方法】采用本实验室构建的丹毒丝菌表面蛋白A原核表达载体pGEX4T-1-spaA-N,进行诱导表达,纯化获得重组抗原GST-SpaA-N,免疫双峰驼制备抗血清,经Protein A和Protein G亲和层析从抗血清中分离重链抗体及常规抗体,Western blotting鉴定重链抗体的抗原结合特性,间接ELISA比较重链抗体与传统抗体的抗原结合活性。【结果】经过Protein A/G纯化得到了IgG2。对各组分进行分析初步表明重链抗体约占血清IgG的60%—80%。采用GST-SpaA-N免疫双峰驼可以诱导高滴度的IgG2型重链抗体,在5次免疫后,骆驼抗spaA-N特异的重链抗体IgG2多抗血清的效价为1﹕51200。Western blotting结果显示分离的多克隆重链抗体可特异结合SpaA天然抗原,且ELISA分析结果表明重链抗体与常规抗体具有相同的抗原结合活性。【结论】首次从双峰驼抗血清中成功分离获得具有与常规抗体相同生物学功能的多克隆重链抗体,提示重链抗体可能在骆驼免疫防御中发挥重要作用。 展开更多
关键词 双峰驼 重链抗体 分离 抗原结合性
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糖基化改性对大豆蛋白抗原性及结构特性的影响 被引量:14
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作者 布冠好 朱婷伟 陈复生 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第1期34-39,共6页
以大豆分离蛋白和葡聚糖为原料,在干热条件下进行美拉德反应,制取不同时间下的糖基化复合物。以β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白抗原抑制率为指标,采用间接竞争ELISA方法测定糖基化产物的抗原性,在反应6 d时,糖基化产物中β-伴大豆球蛋白... 以大豆分离蛋白和葡聚糖为原料,在干热条件下进行美拉德反应,制取不同时间下的糖基化复合物。以β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白抗原抑制率为指标,采用间接竞争ELISA方法测定糖基化产物的抗原性,在反应6 d时,糖基化产物中β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白的抗原性分别降低了36.90%和18.12%。糖基化产物颜色加深,且游离氨基含量降低,说明大豆蛋白与糖发生了不同程度的反应。红外光谱中糖链的引入,使蛋白质分子展开,β-转角和无规则卷曲结构含量降低,影响了β-伴大豆球蛋白α亚基的抗原表位,从而可能使大豆蛋白的抗原性降低。糖基化反应影响抗原性的关键作用在于蛋白与糖结合部位对蛋白质结构变化的影响。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 葡聚糖 糖基化 抗原性 结构
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风味蛋白酶水解大豆分离蛋白的抗原性及功能特性变化 被引量:14
8
作者 王章存 王佩 +3 位作者 安广杰 胡金强 赵学伟 袁路阳 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第3期48-52,共5页
研究了风味蛋白酶水解过程中大豆分离蛋白分子和抗原性变化规律以及酶解物的乳化、发泡等功能性质。结果表明:酶解10 min时,大豆主要抗原蛋白7S的3个亚基和11S的酸性亚基得到有效降解,且产生了分子质量为31、27、22 ku的新谱带,延长酶... 研究了风味蛋白酶水解过程中大豆分离蛋白分子和抗原性变化规律以及酶解物的乳化、发泡等功能性质。结果表明:酶解10 min时,大豆主要抗原蛋白7S的3个亚基和11S的酸性亚基得到有效降解,且产生了分子质量为31、27、22 ku的新谱带,延长酶解时间至120 min时,新生成的谱带变化不大,表现出抗酶解特性。ELISA分析显示,酶解10 min时,大豆11S球蛋白和7Sβ-伴球蛋白的抗原活性剩余率分别降至43%和56%。酶解30 min时,两种蛋白的抗原活性剩余率分别为25%和34%。此指标与电泳图谱中亚基变化趋势基本一致。酶解10 min时,乳化性和发泡性明显提高,延长酶解时间,则乳化和发泡性能显著降低。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白 风味蛋白酶 蛋白质亚基 抗原性 功能特性
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种公鸡精液禽白血病病毒检测方法研究及初步应用 被引量:10
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作者 俞燕 徐步 +10 位作者 范建华 高明燕 张笛 沈海玉 孔祥伟 孟凡峰 韦玉勇 龚建森 戴有理 孙淑红 崔治中 《中国家禽》 北大核心 2015年第22期14-19,共6页
研究旨在探讨种公鸡精液禽白血病病毒(ALV)检测的可行胜与实用性,为种禽场禽白血病净化材料的选择与方案制定提供参考依据。对绿壳蛋鸡种公鸡精液不同处理和检测方法效果,以及不同精液稀释度对病毒分离效果的影响进行了研究,并将... 研究旨在探讨种公鸡精液禽白血病病毒(ALV)检测的可行胜与实用性,为种禽场禽白血病净化材料的选择与方案制定提供参考依据。对绿壳蛋鸡种公鸡精液不同处理和检测方法效果,以及不同精液稀释度对病毒分离效果的影响进行了研究,并将确定的检测方法应用于绿壳蛋鸡、矮脚鸡和芦花鸡3个地方鸡种合计551只种公鸡的检测净化中,同时与血浆病毒分离或血浆斑点杂交检测结果进行比较。结果显示,以血浆病毒分离为标准,精液样品经稀释离心后,取上清接种DF-1细胞,确保在培养基中最终稀释度为1:28-1:56时病毒分离效果最佳。初步应用结果显示,不同鸡种精液p27抗原ELISA检测阳性率均最高,但并不能将血浆和精液病毒分离检测为阳性的鸡均检出,存在“假阴性”;同一鸡种血浆和精液病毒分离阳性率高低不同,在绿壳蛋鸡和矮脚鸡种公鸡中,二者阳性符合率均低于50%,两种方法不可互相取代;芦花种公鸡精液病毒分离阳性率显著高于血浆病毒分离,亦高于血浆斑点杂交,二者阳性符合率分别为100%-36.4%,精液病毒分离效果优于血浆病毒分离。结果表明,对种公鸡精液进行ALV检测具有可行性和必要性,由于不同鸡种净化进程不同、带毒排毒状态不一,检测方法也应灵活运用。 展开更多
关键词 禽白血病 精液 血浆 病毒分离 P27抗原
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流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用 被引量:17
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作者 王芳 孙宇 +5 位作者 朱汝南 赵林清 邓洁 廖斌 黄荣妍 钱渊 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2012年第4期289-292,共4页
目的对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒(QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法)进行抗原检测... 目的对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒(QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法)进行抗原检测,并与病毒分离法进行比较。对于抗原检测和病毒分离法结果不相符的标本采用RT-PCR验证。结果 QuickNaviTM-Flu抗原快速检测流感病毒的结果与病毒分离法的一致性好,其检测甲型流感病毒的敏感度为89.9%,特异度为94.4%。经RT-PCR验证,14例抗原检测与病毒分离法结果不相符样本中13例结果为阳性(与抗原检测一致),使得该抗原检测方法的敏感度和特异度升至91.0%和99.6%。抗原检测乙型流感病毒经RT-PCR验证前后的结果一致,敏感度和特异度分别为87.5%和100%。该方法检测出的阳性标本中包括了甲3型、乙型(Victoria和Yamagata系)流感病毒和新发的2009甲型H1N1,并与常见的呼吸道病毒之间无交叉反应。结论 QuickNaviTM-Flu作为流感病毒抗原检测的试剂盒,可一次同时检测出甲型和乙型流感病毒,耗时短,操作简便,具有良好的敏感度和特异度,适用于流感样病例病原的快速诊断。 展开更多
关键词 流感病毒 胶乳免疫层析法 抗原检测 病毒分离法
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旋毛虫成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1的克隆与表达 被引量:8
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作者 崔晶 王中全 +2 位作者 王会智 赵国强 张红卫 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期278-280,共3页
目的 克隆和表达旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫编码 3 1kDa抗原的结构基因 (TspE1)。  方法 大鼠感染旋毛虫后第 17天收集成囊前期幼虫 ,提取虫体的总RNA。通过RT PCR特异性扩增目的基因 ,构建重组质粒pUC18 Ts HN3 ,将重组质粒 pUC1... 目的 克隆和表达旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫编码 3 1kDa抗原的结构基因 (TspE1)。  方法 大鼠感染旋毛虫后第 17天收集成囊前期幼虫 ,提取虫体的总RNA。通过RT PCR特异性扩增目的基因 ,构建重组质粒pUC18 Ts HN3 ,将重组质粒 pUC18 Ts HN3中的目的基因亚克隆入原核表达载体pGEMEX 1,构建重组子 pGEMEX 1 Ts HN3 ,经IPTG诱导 ,在E .coliJM 10 9(DE3 )中表达。对表达产物进行SDS PAGE分析和Westernblotting鉴定。  结果 SDS PAGE显示目的基因在大肠杆菌中获得高效表达 ,重组蛋白的分子量为 3 1kDa ,以诱导 4h时表达量最多。薄层凝胶光密度扫描分析结果显示 ,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的 2 6%。Westernblotting证实 ,融合蛋白条带能被感染旋毛虫的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别。 结论 旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1克隆和原核表达成功。 展开更多
关键词 旋毛虫 成囊前期幼虫 31kDa抗原 分子克隆 表达 旋毛虫病
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大豆蛋白中抗原物质的研究进展 被引量:3
12
作者 赵元 秦贵信 +2 位作者 张晓东 孙泽威 鲍男 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期613-617,共5页
自发现大豆蛋白中抗原物质可引起幼龄动物发生过敏以来,大豆抗原的研究受到广大学者所关注。在某种程度上,它们的存在影响了大豆的营养价值,从而限制了其广泛利用。本文综述了大豆抗原分离提纯与有效加工灭活的方法,以及大豆抗原在仔猪... 自发现大豆蛋白中抗原物质可引起幼龄动物发生过敏以来,大豆抗原的研究受到广大学者所关注。在某种程度上,它们的存在影响了大豆的营养价值,从而限制了其广泛利用。本文综述了大豆抗原分离提纯与有效加工灭活的方法,以及大豆抗原在仔猪、犊牛和鼠体内抗营养作用及消化动力学的研究进展,为进一步完善其致敏机理提供科学参考。 展开更多
关键词 大豆抗原 分离提纯 抗营养 消化 加工处理
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绵羊弓形虫TgSheepHn1对小鼠的病理损伤及其抗原分布特点 被引量:3
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作者 陆瑶瑶 翟少华 +3 位作者 祝子伏 董辉 王梦瑶 杨玉荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期519-523,共5页
目的为了探究绵羊弓形虫分离株ToxoDB#9(TgSheepHn1)感染Swiss小鼠后,弓形虫在各脏器的分布及病理组织学损伤特点。方法选取104浓度的弓形虫速殖子腹腔接种小鼠,采用H&E及IHC方法分析小鼠各脏器中弓形虫抗原的分布以及病理损伤特点... 目的为了探究绵羊弓形虫分离株ToxoDB#9(TgSheepHn1)感染Swiss小鼠后,弓形虫在各脏器的分布及病理组织学损伤特点。方法选取104浓度的弓形虫速殖子腹腔接种小鼠,采用H&E及IHC方法分析小鼠各脏器中弓形虫抗原的分布以及病理损伤特点。结果昆明小鼠在急性感染期病理损伤主要表现在肺脏、肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结及小肠,其他脏器损伤较轻或无明显损伤;弓形虫抗原在脾脏,肠系膜淋巴结,肾上腺,肝脏胆囊管肌层,生殖器官分布较多,大脑,心肌,肺脏,肾脏,膀胱及小肠也可观察到弓形虫抗原的分布。结论 TgSheepHn1对昆明小鼠的免疫及消化系统损伤较重,抗原分布广泛,免疫及生殖系统是该虫株的主要靶器官。 展开更多
关键词 弓形虫 速殖子 绵羊 分离株 抗原分布 组织损伤
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应用免疫磁珠法分离脐血CD_(34)^+造血细胞 被引量:8
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作者 董文川 喻新建 +3 位作者 童春容 高晖 陈珊珊 陆道培 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第3期275-277,共3页
目的:分离脐血CD细胞,以了解其造血增殖活性。方法:应用免疫磁珠法(Isolex50系统)分离脐血CD细胞,并对其实验方法进行了改进。结果:常规方法CD纯度较低,经过改进,脐血CD细胞由分离前的(1.39±0.76)%增加至(59.46... 目的:分离脐血CD细胞,以了解其造血增殖活性。方法:应用免疫磁珠法(Isolex50系统)分离脐血CD细胞,并对其实验方法进行了改进。结果:常规方法CD纯度较低,经过改进,脐血CD细胞由分离前的(1.39±0.76)%增加至(59.46±17.35)%,CD细胞富集倍数为(62.31±55.19)倍。分离后组分CFU-GM、BFU-E、CFU-Mix较分离前分别增加了(41.05±15.77)、(13.14±8.66)及(34.80±19.58)倍,而阴性组分所形成的集落显著减少。结论:免疫磁珠法可以有效地分离CD细胞,造血祖细胞集落大多来源于CD细胞。 展开更多
关键词 造血干细胞 脐带血 免疫磁珠法 CD34 分离
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猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较 被引量:26
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作者 刘文兴 蔡雪晖 郭宝清 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第4期193-195,共3页
在我国吉林省某地猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗体阳性猪群的4头2日龄弱仔猪实质脏器中分离到2株PRRSV。间接荧光抗体试验(IFA)结果表明,PRRSV(LV.VR-2332)抗血清与2个分离株呈阳性反应;... 在我国吉林省某地猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗体阳性猪群的4头2日龄弱仔猪实质脏器中分离到2株PRRSV。间接荧光抗体试验(IFA)结果表明,PRRSV(LV.VR-2332)抗血清与2个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株(LV.VR-2332)也呈阳性反应;而分离株与HCV、PrV、PPV、TGEV、PEDV和HEV无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到2株地方性PRRSV。进一步用六种PRRSV单抗(A~F)进行IFA试验,结果2个分离株与VR-2332的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。 展开更多
关键词 病毒 分离 生殖-呼吸道 PRRSV 综合征 IFA
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抗轮状病毒IgY和Fab’的分离与纯化 被引量:4
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作者 孙淑清 段春燕 +1 位作者 胡彦涛 孟岩 《化学工业与工程》 CAS 2006年第4期317-319,共3页
抗轮状病毒IgY可用两步盐析结合凝胶过滤从蛋黄中分离出来,用SDS-PAGE检测其纯度可达到95%以上。纯的IgY经胃蛋白酶分解得到的抗体片断(Fab),经SDS-PAGE和MALDI质谱法测定,其纯度达到99%以上。结果表明,所设计的分离抗轮状病毒IgY和Fab... 抗轮状病毒IgY可用两步盐析结合凝胶过滤从蛋黄中分离出来,用SDS-PAGE检测其纯度可达到95%以上。纯的IgY经胃蛋白酶分解得到的抗体片断(Fab),经SDS-PAGE和MALDI质谱法测定,其纯度达到99%以上。结果表明,所设计的分离抗轮状病毒IgY和Fab的方法简单、有效。经ELISA法检测,Fab的活性仍保持在IgY原始活性的70%以上。 展开更多
关键词 免疫球蛋白(IgY) 抗体片断(Fab’) 轮状病毒 分离
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抗轮状病毒IgY和Fab的研制 被引量:2
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作者 孙淑清 孟岩 +1 位作者 段春燕 胡彦涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B06期125-128,共4页
目的对抗轮状病毒(RV)IgY和胃蛋白酶水解片断Fab进行分离与纯化。方法免疫鸡得到抗HRVIgY,用两步盐析结合凝胶过滤将其从蛋黄中分离出来,纯的IgY经胃蛋白酶水解得抗体片断Fab。结果抗HRVIgY用SDS-PAGE检测纯度可达到95%以上。抗轮状病毒... 目的对抗轮状病毒(RV)IgY和胃蛋白酶水解片断Fab进行分离与纯化。方法免疫鸡得到抗HRVIgY,用两步盐析结合凝胶过滤将其从蛋黄中分离出来,纯的IgY经胃蛋白酶水解得抗体片断Fab。结果抗HRVIgY用SDS-PAGE检测纯度可达到95%以上。抗轮状病毒(RV)IgY和抗体片断Fab经SDS-PAGE和MALDIMS法测定,其纯度达到99%以上,经ELISA法检测,Fab的活性保持在Igy原始活性的70%以上。结论我们所设计的分离和纯化抗HRVIgY和Fab的方法简单、有效。 展开更多
关键词 免疫球蛋白(IgY) 抗体片断(Fab) 轮状病毒 分离
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1987~1996年四川省流感病毒分离和病毒抗原变异研究 被引量:3
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作者 许凤琴 余佳 +4 位作者 陈丹林 龙波 吴海燕 曾莉 李天舒 《预防医学情报杂志》 CAS 1998年第1期13-15,共3页
为进一步了解流感病毒的变异规律和特点,对四川省近10年流感病毒分离和病毒抗原情况进行了研究,结果自1987年四川出现流感病毒新变种甲/四川/2/87(H3N2)后,1989年又首次分离出一株人甲型流感病毒重组株甲/四... 为进一步了解流感病毒的变异规律和特点,对四川省近10年流感病毒分离和病毒抗原情况进行了研究,结果自1987年四川出现流感病毒新变种甲/四川/2/87(H3N2)后,1989年又首次分离出一株人甲型流感病毒重组株甲/四川/57/89(H1N2)。1993年乙型流感病毒在人群中活动开始加强,至1996年已成为优势株。同时它们的抗原性也在发生变异,其变异方向也不一致。在相同时间和相同地点分离出抗原结构不相同的两种乙型病毒。 展开更多
关键词 流感病毒 分离 抗原变异 监测 重组株 四川
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福建省2株麻疹病毒的分离与鉴定 被引量:4
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作者 杨秀惠 洪荣涛 +4 位作者 周勇 郑金凤 潘伟毅 蔡志坤 陈秋婷 《海峡预防医学杂志》 CAS 2004年第2期11-13,共3页
[目的 ]了解福建省目前流行的麻疹野病毒的型别与抗原性。[方法 ]细胞培养分离病毒 ;PT PCR扩增病毒N基因碳末端 45 0个核苷酸 ,并对其产物测定基因序列以定型 ;细胞中和试验进行抗原性分析。[结果 ]B95a细胞分离到了 2株麻疹野病毒 ,V... [目的 ]了解福建省目前流行的麻疹野病毒的型别与抗原性。[方法 ]细胞培养分离病毒 ;PT PCR扩增病毒N基因碳末端 45 0个核苷酸 ,并对其产物测定基因序列以定型 ;细胞中和试验进行抗原性分析。[结果 ]B95a细胞分离到了 2株麻疹野病毒 ,Vero细胞未分离到 ,表明B95a细胞敏感性较高 ;分离到的病毒经PT PCR及基因序列测定证实为麻疹野病毒H1基因型 (中国流行的优势株 ) ;分离的野病毒株与疫苗株同时进行血清中和试验显示 :目前使用的疫苗产生的抗体对流行的野病毒仍具有中和作用 ,但中和滴度低于疫苗株。[结论 ]在保证生物安全的前提下 ,B95a细胞是目前分离麻疹病毒的首选细胞 ;新变异来的麻疹H1基因型也在我省流行 ,且目前使用的疫苗所产生的抗体 ,在体外中和野毒株的滴度低于疫苗株。 展开更多
关键词 麻疹病毒 病毒分离 疫苗免疫 抗原性分析
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应用蛋白印迹-免疫沉淀-质谱法筛选卵巢癌肿瘤抗原 被引量:1
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作者 柳斌 杨金亮 +6 位作者 宋鑫 黄欣 阚兵 秦慧 文艳君 赵霞 魏于全 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期890-892,共3页
背景与目的肿瘤抗原的筛选对卵巢癌的早期诊断有重要意义。目前,噬菌体抗体库技术(phageantibodylibrary)、核糖体展示技术(ribosomedisplay)和血清学筛选重组cDNA表达文库(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SE... 背景与目的肿瘤抗原的筛选对卵巢癌的早期诊断有重要意义。目前,噬菌体抗体库技术(phageantibodylibrary)、核糖体展示技术(ribosomedisplay)和血清学筛选重组cDNA表达文库(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)技术等作为常用的肿瘤抗原筛选方法已得到广泛应用。本研究采用蛋白印迹鄄免疫沉淀鄄质谱方法筛选和鉴定卵巢癌肿瘤抗原,以期建立一种新的筛选肿瘤抗原的方法及技术路线。方法应用蛋白印迹(Westernblot)法筛选出差异明显的卵巢癌患者血清,用该血清与SKOV3细胞裂解物反应,免疫沉淀富集抗原,与正常血清的免疫沉淀样品比较,获得差异蛋白条带,然后进行质谱鉴定、生物信息学分析。结果采用蛋白印迹筛选到标记为7号的卵巢癌患者血清,与其他血清比较有明显的差异,经免疫沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳与正常血清免疫沉淀样品比较,发现在接近66.2ku的位置处有一差异蛋白条带,经质谱鉴定、生物信息学分析为热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70及细胞角蛋白(cytokeratin)9。结论采用蛋白印迹鄄免疫沉淀鄄质谱法进行卵巢癌肿瘤抗原的筛选和鉴定是一种行之有效的方法。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 肿瘤抗原/分离和提纯 免疫沉淀 质谱
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