基于ROCK-2/Moesin信号通路探究下调SIP1对子宫内膜癌细胞凋亡侵袭迁移的影响

目的:探究下调SIP1对子宫内膜癌细胞凋亡、迁移、侵袭影响及其作用机制。方法:人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞分为对照组,NC组,SIP1下调组(转染si-SIP1),Y27632组(ROCK抑制剂),SIP1下调组+Y27632组(转染si-SIP1+ROCK抑制剂),通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力,通过Western blot检测各组细胞凋亡关键蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、细胞凋亡基因Bcl-2相关蛋白x(Bax)、Caspase家族蛋白3(Caspase3)、Rho相关激酶2(ROCK-2)和Moesin蛋白表达水平。20只SPF级BALB/c小鼠通过皮下荷瘤建立子宫内膜癌荷瘤模型,对照组(n=10)采用人子宫内膜癌HEC-1A细胞荷瘤,SIP1下调组(n=10)小鼠采用下调SIP1的人子宫内膜癌HEC-1A细胞荷瘤,每3天用游标卡尺测量瘤体积,连续测量21d绘制肿瘤生长曲线,实验终点测量每只小鼠肿瘤质量并检测肿瘤组织中ROCK-2及Moesin蛋白表达水平。结果:细胞实验结果表明,与对照组和NC组相比,SIP1下调组、Y27632组、SIP1下调+Y27632组细胞凋亡比例显著上升,细胞迁移数量减少,细胞侵袭数量减少(P<0.01),NC组与对照组没有显著的统计学差异(P>0.05)。Western blot结果表明,与对照组和NC组相比,SIP1下调组、Y27632组、SIP1下调+Y27632组细胞ROCK和Moesin蛋白表达水平有降低趋势(P<0.01)。小鼠实验结果表明,与对照组相比,下调SIP1后小鼠肿瘤生长速度显著降低,肿瘤质量显著降低(P<0.01),肿瘤组织ROCK-2及Moesin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:下调SIP1可导人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞凋亡,抑制其迁移和侵袭能力,介导ROCK-2/Moesin信号通路。

姜黄素通过鞘氨醇激酶-1-一磷酸鞘氨醇信号通路抗糖尿病大鼠肾脏纤维化的研究

目的:研究姜黄素对链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤的改善作用,及其对糖尿病大鼠肾脏鞘氨醇激酶-1-一磷酸鞘氨醇(SphK1-S1P)信号通路和肾脏纤维化的抑制作用。方法:本研究采用STZ诱导的糖尿病大鼠,观察灌胃给药0.15g/kg的姜黄素对糖尿病大鼠肾脏功能和病理形态的影响,对大鼠肾组织的SphK1、S1P、纤维连接蛋白(FN)及转化生长因子(TGF)-β1等指标的影响。用Real-time PCR和Western blotting方法检测SphK1,FN和TGF-β1的表达;用LC-MS/MS方法检测SphK1活性和S1P含量。结果:0.15g/kg的姜黄素能够明显改善糖尿病大鼠的肾功能与肾脏病理变化,明显降低糖尿病大鼠肾脏SphK1的表达和活性以及S1P的含量,进而抑制SphK1-S1P诱导的FN和TGF-β1的表达。结论:姜黄素对于糖尿病肾脏纤维化的改善作用机制可能与其抑制肾脏SphK1-S1P信号通路密切相关。