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呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建
被引量:
2
1
作者
徐剑宏
武俊
+3 位作者
洪青
张志琳
李顺鹏
王云端
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期613-617,共5页
用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonassp.CDS-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化E.coliDH5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。...
用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonassp.CDS-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化E.coliDH5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含Sphingomonassp.CDS-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒。将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至Sphingomonassp.CDS-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高。对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显。通过NotⅠ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA。以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA。该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究Sphingomonassp.CDS-1的生态学行为奠定了基础。
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关键词
sphingomonas
sp.
cds-
1
呋喃丹
降解
双标记
基因工程菌
下载PDF
职称材料
转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因
2
作者
徐剑宏
洪青
+2 位作者
武俊
严秋香
李顺鹏
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期677-681,共5页
用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克...
用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.
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关键词
sphingomonas
agrestis
cds-
1
呋喃丹
转座子挽救法
基因克隆
下载PDF
职称材料
题名
呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建
被引量:
2
1
作者
徐剑宏
武俊
洪青
张志琳
李顺鹏
王云端
机构
南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期613-617,共5页
基金
国家自然科学基金(30400013)
江苏省科技厅项目(BE2002345
+1 种基金
BE2003343
BG2005322)~~
文摘
用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonassp.CDS-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化E.coliDH5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆。挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含Sphingomonassp.CDS-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒。将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至Sphingomonassp.CDS-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高。对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显。通过NotⅠ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA。以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA。该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究Sphingomonassp.CDS-1的生态学行为奠定了基础。
关键词
sphingomonas
sp.
cds-
1
呋喃丹
降解
双标记
基因工程菌
Keywords
sphingomonas
sp.
cds-
1 ; Carbofuran ; Degradation ; Double-labelled; Genetic engineering strain
分类号
X172 [环境科学与工程—环境科学]
下载PDF
职称材料
题名
转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因
2
作者
徐剑宏
洪青
武俊
严秋香
李顺鹏
机构
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所
南京农业大学生命科学学院
出处
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期677-681,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.30400013)资助~~
文摘
用含Tn5转座子的自杀性质粒pSC123诱变呋喃丹降解菌Sphingomonas agrestis CDS-1,获得失去呋喃丹降解功能的突变株CDS-M1.以pMD18-T为载体在E. coli DH5α中构建了CDS-M1的基因组文库,采用转座子挽救法对Tn5插入位点两侧翼的序列进行克隆与测序,根据测序结果(共4551个碱基)设计引物,从CDS-1的基因组中扩增到同样大小的片段,把该片断克隆到广宿主载体pPZP201上,得到重组质粒pCDZ1,通过三亲接合的方法把pCDZ1导入CDS-M1中进行功能互补实验,结果显示CDS-M1的呋喃丹水解功能得到了恢复,表明该片断中包含呋喃丹水解酶相关基因.
关键词
sphingomonas
agrestis
cds-
1
呋喃丹
转座子挽救法
基因克隆
Keywords
sphingomonas agrestis cds-1
carbofuran
transposon rescue
gene cloning
分类号
X172 [环境科学与工程—环境科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建
徐剑宏
武俊
洪青
张志琳
李顺鹏
王云端
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
下载PDF
职称材料
2
转座子挽救法克隆鞘氨醇单胞菌CDS-1中呋喃丹水解酶相关基因
徐剑宏
洪青
武俊
严秋香
李顺鹏
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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职称材料
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