circ-SKA3通过miR-1303调控TLR4轴在动脉粥样硬化中的作用

[目的]探究环状RNA纺锤体与动粒相关蛋白3(circ-SKA3)通过miR-1303调控Toll样受体4(TLR4)轴在动脉粥样硬化(As)中的作用。[方法]收集2019年4月—2022年4月收治的30例As患者经颈动脉内膜剥脱术切除的颈动脉斑块及病变血管组织、对应斑块旁正常组织与静脉血,另收集30例健康对照者静脉血。微阵列分析、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、荧光原位杂交(FISH)实验检测circ-SKA3在As患者斑块组织和对照样本、血浆外泌体、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、As模型小鼠主动脉组织中的表达和定位。通过生物信息学、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀等方法验证circ-SKA3、miR-1303、TLR4之间的相互关系。通过CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验、血管形成实验检测HUVEC增殖、迁移、血管形成能力,蛋白质印迹法检测TLR4轴相关蛋白表达。油红O染色、HE染色、Masson染色观察As模型小鼠主动脉组织病变情况,免疫组织化学、免疫荧光检测As模型小鼠主动脉组织TLR4的表达情况。[结果]As患者斑块组织、血浆外泌体、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理的HUVEC和As模型小鼠主动脉组织中circ-SKA3、TLR4的表达水平上调(P<0.05),miR-1303的表达水平下调(P<0.05)。功能分析表明,circ-SKA3在体外实验中促进HUVEC损伤,在体内实验中促进As进展。机制分析表明,circ-SKA3可通过海绵吸附miR-1303促进TLR4表达,抑制circ-SKA3/miR-1303/TLR4轴可抑制As病变形成。[结论]circ-SKA3在As患者颈动脉斑块、血浆外泌体、ox-LDL处理的HUVEC和As模型小鼠主动脉中的表达显著增高,circ-SKA3/miR-1303/TLR4轴可促进体内外As模型发展。

SKA3在食管鳞状细胞癌中表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达意义及其与临床病理参数的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测SKA3蛋白在75例食管鳞状细胞癌组织和20例正常食管组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用癌症基因组图谱和基因芯片公共数据库分析SKA3 mRNA在203例食管鳞状细胞癌和102例正常对照中的表达。GEPIA在线工具分析SKA3与细胞周期调控基因的关系。Linkedomics及DAVID在线网站数据评价SKA3基因的共表达基因及其富集通路。结果在食管鳞状细胞癌组织中,SKA3 mRNA和蛋白的表达水平均高于正常食管上皮组织(P<0.05)。SKA3高表达与食管鳞状细胞癌患者肿瘤分化程度、临床分期及肿瘤神经侵犯密切相关(P<0.05)。SKA3与细胞周期调控基因CCND1、CDK1及CDK4的表达水平呈正相关(P<0.001)。结论在mRNA和蛋白水平上,SKA3在食管鳞状细胞癌中均高表达。SKA3高表达可能与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关,其可能通过调控细胞周期进程而促进食管鳞状细胞癌的进展。

NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中的表达及对非小细胞肺癌的影响

目的探究NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中表达对非小细胞肺癌的影响机制。方法使用Western blot检测检测人癌和癌周巨噬细胞中NUSAP1、p-PI3K以及MMP-9的相对蛋白表达量;使用慢病毒感染M2巨噬细胞,构建骨髓诱导M2与人非小细胞肺癌细胞株Lewis共培养体外模拟NSCLC肿瘤微环境,使用Western blot检测M2巨噬细胞中NUSAP1、p-PI3K以及MMP-9的相对蛋白表达量。使用细胞划痕实验检测非小细胞肺癌细胞的迁移能力。结果人体样本Western blot检测结果显示非小细胞肺癌组织中NUSAP1,PI3K与MMP-9的相对蛋白表达量显著高于癌周组织(P<0.05);体外实验通过小鼠巨噬细胞与Lewis共培养以模拟体内肿瘤环境,Western blot检测慢病转染敲低NUSAP1后p-PI3K与MMP-9均表达降低(P<0.05),上调NUSAP1后p-PI3K与MMP-9表达均升高(P<0.05)。MMP-9过表达(OV-MMP-9)抵消了由于敲低NUSAP1所造成的MMP-9表达水平降低,同时shRNA-NUSAP1+ovMMP-9组侵袭率明显高于shRNA-NUSAP1+OVNC组(P<0.05)。shRNANUSAP1(NUSAP1敲低)组比shNUSAP1组的迁移宽度明显增加,说明迁移能力受限;在敲低NUSAP1的基础尚过表达MMP-9(OV-MMP-9)后迁移能力明显变强,迁移宽度显著变小(P<0.05)。结论NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中通过促进PI3K通路的激活及MMP-9的表达从而促进非小细胞肺癌细胞的迁移。

SKA3促进子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法通过RT-qPCR和蛋白质印迹技术检测子宫内膜上皮细胞HEECs以及子宫内膜癌细胞KLE、JEC、Ishikawa细胞中SKA3 mRNA水平和蛋白表达,选取表达量最高的Ishikawa细胞用于后续研究。将Ishikawa细胞分为3组:对照组:正常培养Ishikawa细胞;si-SKA3组:根据脂质体2000说明书,将50 nmol/L siRNA-SKA3转染至Ishikawa细胞;NC组:根据脂质体2000说明书,将50 nmol/L siRNA-NC转染至Ishikawa细胞。通过CCK8和克隆形成实验检测3组细胞增殖情况,Transwell和划痕实验检测3组细胞侵袭和迁移情况,蛋白质印迹技术检测3组细胞CyclinD1、MMP-2、AKT、p-AKT蛋白表达。结果与子宫内膜上皮细胞HEECs比,各子宫内膜癌细胞系中SKA3 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。干扰SKA3表达后,Ishikawa细胞增殖能力、侵袭能力降低,划痕宽度变大,CyclinD1和MMP-2蛋白表达量均下降(P<0.05)。与对照组和NC组比,si-SKA3组细胞AKT蛋白表达无明显变化(P>0.05),p-AKT蛋白表达下降(P<0.05)。结论干扰SKA3能够抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖、迁移和侵袭,其机制可能与SKA3抑制PI3K/AKT信号通路有关。

慢病毒干扰SKA1对前列腺癌PC-3细胞增殖及CDK4和cyclin D1表达的影响

目的探究慢病毒介导纺锤体和动粒相关蛋白1(SKA1)沉默对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)水平的影响。方法构建慢病毒表达载体Lv-shSKA1,转染PC-3细胞。实验分为空白组、Lv-shCon组和Lv-shSKA1组。用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测细胞SKA1mRNA表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期,用蛋白质印迹(Western blot)技术检测SKA1、CDK4及cyclin D1蛋白表达。结果 (1)与LvshCon组比较,Lv-shSKA1组细胞中SKA1mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。(2)与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组细胞增殖速率显著较慢(P<0.05)。(3)与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组G0/G1期细胞数显著减少(P<0.05),S期细胞数显著增加(P<0.05)。(4)与Lv-shCon组比较,Lv-shSKA1组细胞CDK4、cyclin D1蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论慢病毒介导的SKA1沉默可抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,且细胞增殖相关蛋白CDK4、cyclin D1表达显著下调,提示SKA1可能是前列腺癌基因治疗的新靶点。

AEG-1和SKA3在甲状腺微小乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的探讨星形细胞上调基因-1(AEG-1)和纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)的表达与甲状腺微小乳头状癌(PTMC)临床病理特征和预后的关系。方法收集2015年5月至2016年8月经病理学检查确诊的92例PTMC患者的癌组织及对应癌旁组织石蜡标本。采用免疫组化SP法检测组织标本中AEG-1和SKA3的表达,并分析其表达与PTMC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析AEG-1、SKA3表达与患者无复发生存时间(RFS)的关系,采用Cox比例风险模型分析影响PTMC患者RFS的因素。结果AEG-1在癌旁组织和PTMC组织中的阳性表达率分别为17.4%(16/92)和72.8%(67/92),差异有统计学意义(P=0.000);SKA3在癌旁组织中的阳性表达率为15.2%(14/92),在PTMC组织中为66.3%(61/92),差异有统计学意义(P=0.000)。AEG-1蛋白表达与临床分期、淋巴结转移和腺外侵犯有关(P<0.05);SKA3蛋白表达与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,PTMC组织中AEG-1和SKA3蛋白表达呈正相关(r=0.489,P=0.025)。Kaplan-Meier生存分析显示,AEG-1阳性表达者的1、3、5年无复发生存率分别为98.5%、92.5%、83.6%,低于AEG-1阴性表达者的100.0%、96.0%和92.0%,两组比较差异有统计学意义(P=0.046)。SKA3阳性表达者的1、3、5年无复发生存率为98.4%、90.2%、80.3%,低于SKA3阴性表达者的100.0%、96.8%、96.8%,两组比较差异有统计学意义(P=0.032)。Cox多因素分析结果显示,临床分期、淋巴结转移、AEG-1和SKA3表达是影响PTMC患者RFS的独立因素(P<0.05)。结论PTMC组织中AEG-1、SKA3表达水平升高,AEG-1表达与临床分期、淋巴结转移和腺外侵犯有关,SKA3表达与临床分期和淋巴结转移有关,二者均为PTMC患者预后不良的影响因素。

纺锤体与着丝粒相关蛋白3在结肠癌中的表达及临床意义

目的探讨癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)在结肠癌中的表达及临床意义。方法在GEO数据库中选取GSE28000、GSE44076、GSE21815三个基因芯片作为目的基因芯片,分成肿瘤组和正常组两组,在三个基因芯片中筛选差异基因,查阅相关资料选取SKA3为想要的目的基因。取锦州医科大学附属第一医院手术后病理证实的结肠癌标本,分为癌组织和正常组织两组。应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定SKA3在正常组织和癌组织中的蛋白表达情况并分析SKA3在二者组织中的表达差异,对检测结果进行统计学分析。结果50对结肠癌组织和正常组织中,癌组织的SKA蛋白表达明显增强,明显高于正常组织的SKA3表达量且SKA3的高表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无关,与肿瘤的分期分级、淋巴结转移有关。结论SKA3的高表达可能与结肠的发生发展有关。

PRR11和SKA2在食管鳞癌中的表达及与临床预后的关系

目的:观察脯氨酸蛋白11(proline-richprotein11,PRR11)和动粒相关蛋白2(spindleand kinetochore associated 2,SKA2)在食管鳞癌组织中的表达,并分析与食管鳞癌临床病理参数、预后间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测PRR11和SKA2在100例食管鳞癌组织及其癌旁正常组织标本中的表达,统计学分析二者与食管鳞癌临床病理参数、预后间的关系。结果:PRR11在食管鳞癌组织和癌旁正常组织中阳性表达率分别为60.00%(60/100)和17.00%(17/100),SKA2在食管鳞癌组织和癌旁正常组织中阳性表达率分别为70.00%(70/100)和37.00%(37/100),食管鳞癌组织中PRR11和SKA2阳性表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001);PRR11和SKA2蛋白在不同TNM分期、组织分化程度及淋巴结是否转移中的表达差异均有统计学意义(P<0.05);在不同性别、年龄、肿瘤直径、不同肌层浸润、脉管浸润中表达差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关分析结果显示PRR11和SKA2蛋白在食管鳞癌组织中呈明显正相关(r=0.725,P<0.001);患者的无进展生存期(progression-freesur v ival,PFS)和总生存期(overallsur vival,OS)在PRR11和SKA2阳性表达与阴性表达之间差异均具有统计学意义(P<0.05);Cox多因素回归分析结果显示TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移、PRR11和SKA2表达是影响食管鳞癌预后的风险因素(均P<0.05)。结论:PRR11和SKA2过表达可促进食管鳞癌的发生发展,降低食管鳞癌患者的生存期,联合监测PRR11和SKA2的表达对食管鳞癌预后的判断具有一定的临床价值。

纺锤体动粒相关复合体-1(SKA1)促进葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的分子机制研究

目的研究纺锤体动粒相关复合体-1(SKA1)促进葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞增殖的分子机制。方法利用SKA1敲减及空载体慢病毒感染MUM-2B细胞分别作为SKA1敲减组和对照组,再以MTT法、流式细胞术及Caspase-3/7法检测各组细胞增殖、凋亡表型的变化;利用基因表达谱芯片筛选差异基因,KEGG富集分析探寻SKA1促进UM发生发展的潜在信号通路,再以Western blot检测信号通路中关键蛋白的表达变化;利用TCGA数据库UM样本RNA测序及随访数据,分析SKA1表达与预后的关系。结果与对照组相比,SKA1敲减组细胞培养3 d、4 d、5 d的光密度均显著降低(均为P<0.01),而凋亡细胞比例及Caspase-3/7活性均显著增加(均为P<0.01)。KEGG富集分析显示,差异基因富集于P53信号通路。Western blot检测结果证实,SKA1敲减后,P53通路中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP3)的表达显著下降(P<0.05)。SKA1高表达患者总生存率下降(P=0.021,HR=2.55,95%CI0.92~7.05)。结论SKA1通过P53/IGFBP3信号通路促进UM细胞增殖,而且SKA1高表达是影响UM患者预后的危险因素。

SKA1通过Cdc42介导高尔基体堆叠调控胰腺癌细胞侵袭与转移

目的:探讨SKA1调控胰腺导管腺癌(PDAC)侵袭与转移的分子机制。方法:利用免疫组化染色法检测胰腺导管腺癌组织样本及癌旁组织中SKA1与下游分子Cdc42的表达水平、用免疫印迹方法在不同胰腺癌细胞系及正常胰腺导管上皮细胞中进行验证;利用慢病毒转染技术构建SKA1稳定敲减和过表达的胰腺癌细胞株;利用免疫荧光方法检测PDAC细胞内SKA1敲低或过表达对高尔基体结构的影响,及Cdc42抑制剂ZCL278对高尔基体结构变化的调控;并利用Transwell实验及细胞划痕实验检测ZCL278对SKA1促癌作用的影响;应用免疫印迹方法检测SKA1及Cdc42表达对自噬标志物的影响。结果:在胰腺导管腺癌组织与细胞中SKA1与Cdc42表达均显著高于正常组织或细胞,且二者表达呈显著正相关;并且发现SKA1低表达的患者具有更长的总体生存期,而Cdc42表达高低与总体生存期无关。接着我们发现SKA1可促进PDAC细胞内高尔基体堆叠,并且在SKA1过表达的细胞中Cdc42抑制剂ZCL278可以抑制这种堆叠现象。进一步我们发现抑制Cdc42可逆转SKA1过表达对胰腺癌侵袭与转移的促进效应,具有统计学差异,而在SKA1非高表达的细胞中无显著差异,最后我们发现Cdc42可受SKA1的表达调控诱导PDAC细胞发生自噬。结论:SKA1通过调控Cdc42介导的高尔基体致密堆叠进而影响胰腺癌发生自噬,最终促使胰腺癌细胞迁移和侵袭。

八聚体结合转录因子4、纺锤体和动粒相关蛋白2在肝癌癌变过程中的表达及其临床意义

目的探讨八聚体结合转录因子4(OCT4)、纺锤体和动粒相关蛋白2(SKA2)在原发性肝癌(PLC)组织中的表达,及其与PLC临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测2018年1月至2022年11月大庆龙南医院(齐齐哈尔医学院第五附属医院)和广东医科大学附属医院病理确诊的27例正常肝组织、44例肝硬化组织、87例PLC组织中OCT4和SKA2表达,结合临床资料、采用χ^(2)检验分析两者的表达与PLC患者临床病理特征和预后的关系。结果OCT4在正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中阳性表达率分别为11.11%(3/27)、36.36%(16/44)、67.82%(59/87),两两之间比较差异有统计学意义(χ^(2)=11.811、5.444、26.708,P<0.05)。SKA2在正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中阳性表达率分别为14.82%(4/27)、43.19%(19/44)、73.56%(64/87),两两之间比较差异有统计学意义(χ^(2)=11.618、29.547、6.148,P<0.05)。OCT4表达水平与PLC患者TNM分期(TNMstage)、癌细胞分化程度、血管浸润明显相关(χ^(2)=8.182、7.205、6.321,P<0.05),OCT4表达水平与PLC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理类型无相关(χ^(2)=0.001、0.049、0.037、0.057,P>0.05)。SKA2表达水平与PLC患者肿瘤大小、TNM分期、血管浸润明显相关(χ^(2)=7.325、5.539、5.256,P<0.05),SKA2表达水平与PLC患者性别、年龄、癌细胞分化程度、病理类型无相关(χ^(2)=0.044、0.003、0.836、0.028,P>0.05)。结论PLC组织中OCT4和SKA2表达水平升高,OCT4表达水平与PLC患者癌细胞分化程度、TNM分期、血管浸润明显相关,SKA2表达水平与PLC患者血管浸润、TNM分期、肿瘤大小明显相关,两者均为PLC患者预后不良的影响因素。

柴胡疏肝散对抑郁模型小鼠行为及海马神经再生的影响

目的探究柴胡疏肝散(Chaihu-Shugan San,CSS)对慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)致抑郁小鼠行为及神经再生功能的影响。方法将30只清洁级健康雄性C57BL/6成年小鼠按照随机数字表法分为空白组(Con组)、模型组(CUMS组)、柴胡疏肝散组(CSS组),每组10只。CUMS组和CSS组小鼠采用CUMS法建立抑郁模型,造模同时分别给予蒸馏水和CSS(2.7 g/kg)灌胃,Con组小鼠只给予等体积蒸馏水灌胃,不进行CUMS刺激。干预结束后,采用体质量增量、糖水偏爱实验、强迫游泳实验和悬尾实验检测小鼠抑郁样行为。采用免疫荧光染色法检测海马齿状回新生神经元数量。qRT-PCR法检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)、纺锤体与动粒相关复合物2(spindle and kinetochore-associated protein 2,SKA2)mRNA表达水平。采用SPSS 22.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果 (1)三组小鼠在造模后的体质量增量差异有统计学意义(F=8.859,P<0.05),CUMS组小鼠的体质量增量低于Con组和CSS组(均P<0.05)。三组小鼠在行为学测试中的糖水偏爱率、悬尾不动时间和游泳不动时间均差异有统计学意义(F=10.544,12.957,8.095,均P<0.05)。CUMS组小鼠的糖水偏爱率低于Con组[(87.46±2.78)%,(93.90±3.31)%,P<0.05],CSS组小鼠的糖水偏爱率[(91.65±2.61)%]则高于CUMS组(P<0.05)。CUMS组小鼠悬尾不动时间[(198.00±27.57)s]和游泳不动时间[(322.20±46.98)s]均高于Con组[悬尾不动时间(138.80±38.50)s,游泳不动时间(238.50±50.51)s,均P<0.05]。CSS组小鼠的悬尾不动时间[(139.00±21.29)s]和游泳不动时间[(265.20±44.90)s]均低于CUMS组(均P<0.05)。(2)免疫荧光染色结果显示,三组小鼠海马齿状回BrdU与NeuN双标的细胞数量差异有统计学意义(F=9.486,P<0.05)。CUMS组小鼠双标染色细胞数量[(31.66±3.21)个/视野]低于Con组[(63.66±15.17)个/视野]和CSS组[(58.00±6.00)个/视野](均P<0.05)。(3)qRT-PCR结果显示,三组小鼠海马齿状回BDNF、FGF2和SKA2的mRNA水平均差异有统计学意义(F=14.522,9.337,8.701,均P<0.05)。CUMS组小鼠海马齿状回BDNF mRNA(0.79±0.06)、FGF2 mRNA(0.74±0.18)和SKA2 mRNA(0.52±0.32)的相对表达量均低于Con组[BDNF mRNA(1.03±0.10),FGF2 mRNA(1.04±0.11),SKA2 mRNA(1.05±0.37),均P<0.05]。与CUMS组相比,CSS组BDNF mRNA(1.07±0.80)、FGF2 mRNA(1.30±0.29)、SKA2 mRNA(1.40±0.55)相对表达水平均较高(均P<0.05)。结论柴胡疏肝散能缓解抑郁模型小鼠的抑郁症状,其机制可能与提高海马区BDNF、FGF2、SKA2 mRNA的表达并促进神经干细胞增殖有关。

纺锤体和动粒相关蛋白2以及细胞分裂周期蛋白20在乳腺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨纺锤体和动粒相关蛋白2(SKA2)和细胞分裂周期蛋白20(CDC20)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌患者临床病理特征的关系。方法收集2015年5月至2021年3月临沂市人民医院107例乳腺癌组织和癌旁组织标本,应用免疫组织化学方法检测以上组织中SKA2和CDC20的表达,采用χ^(2)检验行相关分析。结果乳腺癌组织中SKA2表达率为67.29%(72/107),明显高于癌旁组织中SKA2表达率15.89%(17/107),两者差异有统计学意义(χ^(2)=62.928,P<0.01)。SKA2表达水平与乳腺癌TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移明显相关(χ^(2)=6.889、6.348、5.752,P<0.05),差异有统计学意义。SKA2表达水平与乳腺癌年龄、组织学分型、组织学分级无相关(χ^(2)=0.015、0.008、0.157,P>0.05),差异无统计学意义。乳腺癌组织中CDC20表达率为47.66%(51/107),明显高于癌旁组织中CDC20表达率12.15%(13/107),两者差异有统计学意义(χ^(2)=32.189,P<0.01)。CDC20表达水平与乳腺癌TNM分期、组织学分级、淋巴结转移明显相关(χ^(2)=7.330、5.888、4.275,P<0.05),差异有统计学意义。CDC20表达水平与乳腺癌年龄、肿瘤大小、组织学分型无相关(χ^(2)=0.002、0.205、0.094,P>0.05),差异无统计学意义。结论SKA2和CDC20在乳腺癌中表达异常增高、并与乳腺癌患者的不良预后密切相关,提示SKA2和CDC20可能是乳腺癌患者预后的重要生物标志物。