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G1-like与F/98-like进化谱系的P B2、M基因在H5N6亚型禽流感病毒重配中的竞争优势研究
1
作者
刘娇
郝小利
+7 位作者
李秀丽
刘东
石磊
陈凯彪
刘开拓
王晓泉
顾敏
刘秀梵
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期1087-1093,共7页
为评价不同H9N2亚型病毒供体在H5N6亚型禽流感病毒(AIV)重配中的作用,本研究选取全套内部基因与S基因型H9N2 AIV高度同源的3株H5N6 AIV流行株MZ34、YB0597和JT131,利用反向遗传学技术在MZ34的8基因重组质粒基础上另外添加F/98-like来源...
为评价不同H9N2亚型病毒供体在H5N6亚型禽流感病毒(AIV)重配中的作用,本研究选取全套内部基因与S基因型H9N2 AIV高度同源的3株H5N6 AIV流行株MZ34、YB0597和JT131,利用反向遗传学技术在MZ34的8基因重组质粒基础上另外添加F/98-like来源的PB2和M质粒,即以MZ34(8)+F/98(PB2+M)的10质粒组合(Group 1)共转染细胞进行重组H5N6病毒的竞争性拯救;PCR扩增经3轮空斑纯化后PCR扩增拯救病毒的PB2和M基因并测序鉴定。同时,为排除来源于同一母本病毒的8质粒易于自我组合包装的可能干扰,又将MZ34的PB2和M质粒替换为YB0597或JT131来源的质粒,构成另外的2种10质粒组合Group 2:MZ34(6)+YB0597(PB2+M)+F/98(PB2+M)和Group 3:MZ34(6)+YB0597(PB2)+JT131(M)+F/98(PB2+M),经共染获得拯救病毒,对其PB2和M基因PCR扩增后测序鉴定。结果显示,从Group1、Group 2和Group 3中拯救获得的重组H5N6病毒中PB2基因的构成情况S∶H分别为41∶23、48∶15以及37∶19,M基因的构成情况S∶H分别为40∶24、31∶32以及25∶31,而PB2和M基因的组合情况SS∶SH∶HS∶HH分别为27∶14∶13∶10、26∶22∶5∶10以及17∶20∶8∶11。表明相较于H型的F/98-like PB2与M基因,S型的G1-like PB2基因在各10质粒转染组的拯救的H5N6病毒重配中具有更显著的竞争优势,而G1-like M基因仅在Group 1组拯救的重组病毒中表现出优势,但G1-like PB2与M基因间的竞争优势叠加效应不明显。本研究为解析S基因型H9N2 AIV作为H7N9、H10N8等新型重组流感病毒内部基因供体的相关机制提供重要参考。
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关键词
H
5
N6亚型禽流感
H9N2内部
基因
竞争优势
G
1
-like
PB2和M
下载PDF
职称材料
一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析
2
作者
李榕
寇伟
+3 位作者
谭兰
贺怡
梁卓
李鸿彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第10期82-87,共6页
利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结...
利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。
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关键词
棉花纤维
spiral1-like5基因
微管结合蛋白
表达
下载PDF
职称材料
棉花GhSP1L基因克隆与表达分析
3
作者
李榕
寇伟
+2 位作者
梁卓
谢全亮
李鸿彬
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期1569-1575,共7页
【目的】棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(Gh SP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】通过RT-PCR从棉纤维中克隆Gh SP1L基因,进行Gh SP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体p ET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析...
【目的】棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(Gh SP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】通过RT-PCR从棉纤维中克隆Gh SP1L基因,进行Gh SP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体p ET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况;RT-PCR检测Gh SP1L基因的表达特征。【结果】从陆地棉纤维组织中克隆得到Gh SP1L基因的全长c DNA,其开放读码框为318 bp,编码106个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为11.76 k Da。对氨基酸序列进行生物信息学分析,其N端和C端较为保守,含有SCOP结构域,属于SP1L家族蛋白,能够在其他微管蛋白协助下与微管结合,SPR1的定位可能与其结合的微管结合蛋白相关。构建了p ET28a-Gh SP1L原核表达载体,并通过体外诱导表达后获得分子质量约为12 k Da左右的重组蛋白Gh SP1L;半定量RT-PCR结果表明,Gh SP1L基因开花后3 d的纤维组织中表达量较高。【结论】Gh SP1L基因的克隆、序列分析和表达,重组蛋白的诱导表达,为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。
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关键词
棉花纤维
spiral
1
-like
基因
微管结合蛋白
表达
下载PDF
职称材料
题名
G1-like与F/98-like进化谱系的P B2、M基因在H5N6亚型禽流感病毒重配中的竞争优势研究
1
作者
刘娇
郝小利
李秀丽
刘东
石磊
陈凯彪
刘开拓
王晓泉
顾敏
刘秀梵
机构
扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
江苏省人兽共患病学重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期1087-1093,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31702245)
江苏省优秀青年基金项目(BK20170068)
+3 种基金
江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)
江苏高校“青蓝工程”资助
扬州大学“高端人才支持计划”资助
扬州大学“研究生培养创新工程”项目(XKYCX19-172)
文摘
为评价不同H9N2亚型病毒供体在H5N6亚型禽流感病毒(AIV)重配中的作用,本研究选取全套内部基因与S基因型H9N2 AIV高度同源的3株H5N6 AIV流行株MZ34、YB0597和JT131,利用反向遗传学技术在MZ34的8基因重组质粒基础上另外添加F/98-like来源的PB2和M质粒,即以MZ34(8)+F/98(PB2+M)的10质粒组合(Group 1)共转染细胞进行重组H5N6病毒的竞争性拯救;PCR扩增经3轮空斑纯化后PCR扩增拯救病毒的PB2和M基因并测序鉴定。同时,为排除来源于同一母本病毒的8质粒易于自我组合包装的可能干扰,又将MZ34的PB2和M质粒替换为YB0597或JT131来源的质粒,构成另外的2种10质粒组合Group 2:MZ34(6)+YB0597(PB2+M)+F/98(PB2+M)和Group 3:MZ34(6)+YB0597(PB2)+JT131(M)+F/98(PB2+M),经共染获得拯救病毒,对其PB2和M基因PCR扩增后测序鉴定。结果显示,从Group1、Group 2和Group 3中拯救获得的重组H5N6病毒中PB2基因的构成情况S∶H分别为41∶23、48∶15以及37∶19,M基因的构成情况S∶H分别为40∶24、31∶32以及25∶31,而PB2和M基因的组合情况SS∶SH∶HS∶HH分别为27∶14∶13∶10、26∶22∶5∶10以及17∶20∶8∶11。表明相较于H型的F/98-like PB2与M基因,S型的G1-like PB2基因在各10质粒转染组的拯救的H5N6病毒重配中具有更显著的竞争优势,而G1-like M基因仅在Group 1组拯救的重组病毒中表现出优势,但G1-like PB2与M基因间的竞争优势叠加效应不明显。本研究为解析S基因型H9N2 AIV作为H7N9、H10N8等新型重组流感病毒内部基因供体的相关机制提供重要参考。
关键词
H
5
N6亚型禽流感
H9N2内部
基因
竞争优势
G
1
-like
PB2和M
Keywords
H
5
N6 subtype avian influenza
H9N2 internal genes
competitive advantage
G
1
-like
PB2 and M
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析
2
作者
李榕
寇伟
谭兰
贺怡
梁卓
李鸿彬
机构
石河子大学生命科学学院
石河子大学农业生物技术重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第10期82-87,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31260339)
兵团创新项目(2012BB050
+1 种基金
2013CB010)
石河子大学杰青项目(2012ZRKXJQ03)
文摘
利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。
关键词
棉花纤维
spiral1-like5基因
微管结合蛋白
表达
Keywords
Cotton fiber
spiral
l
-like
5
gene Microtubule associated protein Expression
分类号
S562 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
棉花GhSP1L基因克隆与表达分析
3
作者
李榕
寇伟
梁卓
谢全亮
李鸿彬
机构
石河子大学生命科学学院
石河子大学农业生物技术重点实验室
出处
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期1569-1575,共7页
基金
兵团种质资源创新专项(2012BB050)
国家自然科学基金项目(31260339)
石河子大学杰出青年项目(2012ZRKXJQ03)~~
文摘
【目的】棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(Gh SP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】通过RT-PCR从棉纤维中克隆Gh SP1L基因,进行Gh SP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体p ET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况;RT-PCR检测Gh SP1L基因的表达特征。【结果】从陆地棉纤维组织中克隆得到Gh SP1L基因的全长c DNA,其开放读码框为318 bp,编码106个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为11.76 k Da。对氨基酸序列进行生物信息学分析,其N端和C端较为保守,含有SCOP结构域,属于SP1L家族蛋白,能够在其他微管蛋白协助下与微管结合,SPR1的定位可能与其结合的微管结合蛋白相关。构建了p ET28a-Gh SP1L原核表达载体,并通过体外诱导表达后获得分子质量约为12 k Da左右的重组蛋白Gh SP1L;半定量RT-PCR结果表明,Gh SP1L基因开花后3 d的纤维组织中表达量较高。【结论】Gh SP1L基因的克隆、序列分析和表达,重组蛋白的诱导表达,为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。
关键词
棉花纤维
spiral
1
-like
基因
微管结合蛋白
表达
Keywords
cotton fiber
spiral
1
-like
gene
microtubule associated protein
expression
分类号
S502 [农业科学—作物学]
S503.52 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
G1-like与F/98-like进化谱系的P B2、M基因在H5N6亚型禽流感病毒重配中的竞争优势研究
刘娇
郝小利
李秀丽
刘东
石磊
陈凯彪
刘开拓
王晓泉
顾敏
刘秀梵
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
下载PDF
职称材料
2
一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析
李榕
寇伟
谭兰
贺怡
梁卓
李鸿彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
下载PDF
职称材料
3
棉花GhSP1L基因克隆与表达分析
李榕
寇伟
梁卓
谢全亮
李鸿彬
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
下载PDF
职称材料
已选择
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