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Split-marker重组技术构建泛素C末端水解酶基因缺失菌株(英文) 被引量:3
1
作者 喻娜娜 吴翠娇 +5 位作者 赵巍 牛倩倩 王斌 闫志勇 钱冬萌 宋旭霞 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第11期2017-2021,共5页
目的:对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)泛素末端水解酶(creB)基因进行敲除。方法:通过氨基酸序列分析软件初步分析烟曲霉CreB蛋白结构.利用split-marker重组技术构建重组片段,并通过PEG-原生质体方法对烟曲霉野生菌株进行转化,采用PCR... 目的:对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)泛素末端水解酶(creB)基因进行敲除。方法:通过氨基酸序列分析软件初步分析烟曲霉CreB蛋白结构.利用split-marker重组技术构建重组片段,并通过PEG-原生质体方法对烟曲霉野生菌株进行转化,采用PCR方法对转化子进行筛选,最后选取初步筛选的转化子进行测序鉴定。结果:结构分析显示烟曲霉CreB蛋白具有泛素特异蛋白酶(ubiquitin-processing protease)UBP亚家族六个结构域。本实验构建了转化片段并转化,在抗性平板中获得了25个Hyg抗性转化子,进一步采用PCR方法筛选到20个转化子,最终通过测序分析获得一株creB基因缺失菌株。结论:Split-marker重组技术是对烟曲霉creB基因进行敲除的快速有效的方法。获得的creB缺失菌株可用于基因功能研究。 展开更多
关键词 烟曲霉 泛素C末端水解酶 split-marker重组技术
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尖孢镰刀菌亚麻专化型FolGLS2基因功能分析
2
作者 高伟娜 侯占铭 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期294-302,共9页
亚麻是我国主要的油料作物,且长期受亚麻枯萎病的侵害。β-1,3-葡聚糖合酶的催化亚基FKS/GLS为细胞壁合成所必需,本研究为鉴定尖孢镰刀菌亚麻专化型FolGLS2的功能,进行了FolGLS2基因的克隆、敲除以及敲除突变体表型和致病力的测定等试... 亚麻是我国主要的油料作物,且长期受亚麻枯萎病的侵害。β-1,3-葡聚糖合酶的催化亚基FKS/GLS为细胞壁合成所必需,本研究为鉴定尖孢镰刀菌亚麻专化型FolGLS2的功能,进行了FolGLS2基因的克隆、敲除以及敲除突变体表型和致病力的测定等试验。结果显示,FolGLS2基因全长5947 bp,cDNA开放阅读框为5847 bp,编码1948个氨基酸。表型观察发现,敲除突变体菌落小而紧实,生长速率明显降低;菌丝缩短、增粗且无法产生分生孢子;菌丝细胞壁对于常规原生质释放酶液具有抗性,无法释放原生质体;感染试验显示,突变体致病力明显减弱。上述结果表明,FolGLS2基因编码β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基,对菌丝营养生长、菌落形态、分生孢子发生、细胞壁组成及致病性具有调控作用。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌亚麻专化型 split-marker技术 FolGLS2 基因敲除
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尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因参与调控分生孢子发生和菌丝生长
3
作者 李春阳 侯占铭 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期175-183,共9页
通过对尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因敲除及敲除突变体互补试验,探究该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。对Folcdc15基因进行DNA测序后,使用Split-Marker技术,构建含有潮霉素抗性基因(hph)缺失盒。通过PEG介导法转入野生型原生... 通过对尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因敲除及敲除突变体互补试验,探究该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。对Folcdc15基因进行DNA测序后,使用Split-Marker技术,构建含有潮霉素抗性基因(hph)缺失盒。通过PEG介导法转入野生型原生质体,在含有潮霉素的选择培养基上进行转化子筛选,通过PCR正负筛选确定敲除突变体。利用pZWH1载体构建含有Folcdc15的互补载体pZLY1,将其转入敲除突变体中进行互补测验。与野生型hm相比,敲除突变体ko1菌落生长速率下降了73%,菌丝形态发生了显著改变,菌丝变短且分叉变多,分生孢子隔膜数量增多长度增加,分生孢子数量显著减少。亚麻侵染试验表明,ko1的致病力显著降低。通过互补测验发现,回复突变株ca1恢复了Folcdc15基因缺失带来的分生孢子产量及形态、菌落生长和形态及致病力的缺陷。Folcdc15参与调控尖孢镰刀菌亚麻专化型的分生孢子发生及菌丝生长。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌亚麻专化型 亚麻枯萎病 split-marker Folcdc15 基因功能 致病性
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小麦赤霉菌FGSG__04871基因敲除及功能研究 被引量:6
4
作者 彭海丽 侯占铭 《内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)》 CAS 北大核心 2017年第3期394-400,共7页
应用Split-Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,由PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上筛选转化子,应用PCR正负筛查确定缺失突变体.根据缺失突变体致病性的检测及表型变化对FGSG_04871基因的生物... 应用Split-Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,由PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上筛选转化子,应用PCR正负筛查确定缺失突变体.根据缺失突变体致病性的检测及表型变化对FGSG_04871基因的生物学功能进行分析.通过PCR正负筛选成功获得了3个敲除突变体,分别命名为△FGSG_04871 1-1、△FGSG_04871 1-3、△FGSG_04871 2-1.以野生型PH-1作为对照,敲除突变体的菌落形态没有明显变化,菌落生长速度略微滞后,致病力没有减弱.但是,突变体的产孢量低于野生型PH-1,因此,FGSG_04871基因可能与小麦赤霉菌分生孢子的生长能力有关. 展开更多
关键词 小麦赤霉菌 FGSG__04871 split-marker 基因敲除 致病力
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大白菜裂球性状的遗传与RAPD标记 被引量:2
5
作者 牛娜 郑晨光 +3 位作者 张鲁刚 胥宇建 张立志 付文婷 《中国蔬菜》 北大核心 2010年第14期44-48,共5页
以有裂球现象的杂交一代大白菜单株自交构建的F2群体为试材,研究了大白菜裂球性状的遗传规律及其分子标记。调查统计分析表明:延长生育期20d为大白菜裂球性状的最佳分析时期,其F2群体中不裂球与裂球植株符合3∶1分离比例,说明裂球性状是... 以有裂球现象的杂交一代大白菜单株自交构建的F2群体为试材,研究了大白菜裂球性状的遗传规律及其分子标记。调查统计分析表明:延长生育期20d为大白菜裂球性状的最佳分析时期,其F2群体中不裂球与裂球植株符合3∶1分离比例,说明裂球性状是受1对隐性主基因控制的,同时发现分离后代单株间裂球的速度和程度存在差异,说明裂球性状还受到微效基因和环境条件的影响。同时以06J31×92S24产生的F2群体为材料,采用BSA法进行裂球性状RAPD标记,从600个随机引物中筛选出1个与裂球基因紧密连锁的RAPD标记S15-222。连锁分析发现,标记S15-222与裂球基因间的遗传距离为8.876cM,可用于大白菜耐裂球材料的分子标记辅助选择。 展开更多
关键词 大白菜 裂球性 遗传规律 RAPD标记
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Construction of PEG-mediated Genetic Transformation and Gene Knockout System in Fusarium oxysporum f. sp.cubense Tropic Race 4 被引量:1
6
作者 Lei ZHANG Yan GUO +2 位作者 Yunyue WANG Weihua TANG Sijun ZHENG 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2020年第1期15-17,21,共4页
Fusarium wilt of banana, caused by Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropic race 4(Foc TR4), is a typical vascular and soil-borne disease which has significantly threatened the sustainable development of banana indust... Fusarium wilt of banana, caused by Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropic race 4(Foc TR4), is a typical vascular and soil-borne disease which has significantly threatened the sustainable development of banana industry. In order to reveal the infection process and pathogenesis of Foc TR4, the young mycelia(66.7 mg/ml) of wild-type strain of Foc TR4(WT-Foc TR4) cultured for 18-20 h were lysed with enzyme mixture for protoplast formation, which consisted of 25 mg/ml driselase, 0.4 mg/ml chitinase, 15 mg/ml lysing enzyme and 1.2 mol/L potassium chloride. The resulted protoplasts of 2×10~7 cells/ml were used to test the efficiency of transformation mediated by polyethylene glycol, and up to 9 transformants per microgram of DNA were obtained. AmCyan, RFP and YFP genes were stably transferred into the WT-Foc TR4, separately, using the protoplast transformation system. The gene FoOCH1 encoding α-1, 6-mannosyltransferase in the WT-Foc TR4 was knocked out using the split-marker recombination technology. The genetic transformation and gene knockout system in this pathogen lays a foundation for the study of functional genomics and plant-pathogen interactions. 展开更多
关键词 Fusarium wilt of banana Fusarium oxysporum f.sp.cubense PROTOPLASTS Transformation split-marker recombination
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浅析汉语“是强调句”中的“是”
7
作者 胡艳 《顺德职业技术学院学报》 2006年第2期60-63,共4页
在Government and Binding Theory框架下讨论汉语中表示强调的“是”字句的词性及其所处位置.在树形图的描述上,运用LuigiRizzi关于splitComp假说中的理论,印证了“是”是焦点标记词的观点;同时,根据splitComp假说发展“是”是焦点标记... 在Government and Binding Theory框架下讨论汉语中表示强调的“是”字句的词性及其所处位置.在树形图的描述上,运用LuigiRizzi关于splitComp假说中的理论,印证了“是”是焦点标记词的观点;同时,根据splitComp假说发展“是”是焦点标记词的观点,认为“是”是FocusP的中心语,位于“是”之前的成分是从TP生成然后显性移位到TopP位置上,而被强调成分隐性移位到[Spec,FocusP]的位置获得解释. 展开更多
关键词 “是”字句 焦点标记词 SPLIT Comp假说
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植物安全转基因技术研究现状与展望 被引量:21
8
作者 王根平 杜文明 夏兰琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期823-843,共21页
转基因技术是进行基因功能研究和作物遗传改良的重要工具。根癌农杆菌介导转化法和基因枪轰击法是两种主要的遗传转化方法。从1996年首例转基因作物商业化种植以来,2012年全球有28个国家和地区种植转基因作物,种植面积已达1.7亿公顷。... 转基因技术是进行基因功能研究和作物遗传改良的重要工具。根癌农杆菌介导转化法和基因枪轰击法是两种主要的遗传转化方法。从1996年首例转基因作物商业化种植以来,2012年全球有28个国家和地区种植转基因作物,种植面积已达1.7亿公顷。随着全球转基因作物的大面积商业化种植,转基因植物的安全性越来越多地受到公众关注。安全转基因技术的研发对于转基因植物的商业化生产具有重要意义。文章详细介绍了目前已报道的安全转基因技术原理及其应用现状。按其作用原理和目的将其分为4类:安全选择标记、标记基因删除及基因叠加、基因漂移防控法和基因定点编辑整合技术。其中,安全选择标记按其筛选原理分为糖代谢相关标记、氨基酸代谢相关标记、激素相关标记和抗逆相关标记。与抗生素和除草剂抗性标记相比,这类标记基因及其表达产物对人和其他生物更安全。标记基因删除及基因叠加技术包括共转化法、位点特异性重组法、转座子法、同源重组法以及基于位点特异性重组的基因叠加技术,其中共转化法又包括农杆菌介导的共转化法和基因枪介导的表达盒共转化法。基因叠加技术为复合性状转基因植物研发奠定了基础,有望成为未来多性状转基因植物研发的重要技术之一。基因漂流防控法包括叶绿体转化法和基因拆分法。基因定点编辑和整合技术包括锌指核酸酶、TALEN和CRISPR/Cas9系统介导的基因定点编辑和整合技术。其中,TALEN和CRISPR/Cas9技术,设计简单,成本低,易操作,靶点分布广泛,有望成为安全转基因研发和应用的重要技术。文章对这些技术原理及其应用现状进行了综述,讨论了其优缺点,并展望了安全转基因技术研发重点和发展趋势。 展开更多
关键词 转基因植物 安全标记基因 标记基因删除法 基因叠加 叶绿体转化法 基因拆分法 基因定点修饰
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“分站式”杂交血运重建技术对多支冠状动脉病变患者cTnT、血流动力学和预后的影响 被引量:4
9
作者 陈道虎 刘辉 +1 位作者 何书武 葛广全 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第7期1127-1131,共5页
目的探讨应用"分站式"杂交血运重建技术(HCR)治疗多支冠状动脉病变(MVD)及对心肌肌钙蛋白T(cTnT)、血流动力学和预后的影响。方法选取冠状动脉多支病变患者110例,按照手术方式的不同分成对照组和观察组,每组55例。对照组患者... 目的探讨应用"分站式"杂交血运重建技术(HCR)治疗多支冠状动脉病变(MVD)及对心肌肌钙蛋白T(cTnT)、血流动力学和预后的影响。方法选取冠状动脉多支病变患者110例,按照手术方式的不同分成对照组和观察组,每组55例。对照组患者行单纯冠状动脉介入治疗(PCI),观察组患者行HCR治疗。术后分别对两组患者的血清心肌损伤标志物水平、血流动力学指标水平进行比较,并对两组患者进行为期两年的院后随访,比较两组患者随访期间的不良心脑血管事件发生率以及血管通畅率。结果①术后两组患者的血清丙二醛(MDA)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白(cTnT)水平均较术前显著升高(P<0.05),且观察组患者的血清MDA、CK-MB和cTnT水平明显高于对照组(P<0.05);②术后两组患者的心输出量(CO)、左室舒张早期血流传播速度(FPV)、每搏输出量(SV)水平均较术前升高(P<0.05);且观察组患者的CO、FPV、SV水平显著高于对照组(P<0.05);③随访期间观察组患者的不良心脑血管事件发生率(3.64%)显著低于对照组(P<0.05);④观察组患者的血管通畅率(94.55%)显著高于对照组(72.22%)(P<0.05)。结论应用HCR对MVD患者进行治疗,能够有效改善患者的心肌损伤情况以及血流动力学情况,减少不良心脑血管事件的发生,具有较好的近中期预后,值得临床上广泛推广。 展开更多
关键词 多支冠状动脉病变 “分站式”杂交血运重建技术 心肌损伤标志物 血流动力学 临床疗效
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小麦赤霉菌FGSG_03700基因敲除及功能研究
10
作者 刘超頔 侯占铭 《安徽农业科学》 CAS 2017年第4期149-155,共7页
[目的]敲除小麦赤霉菌(Fusarium graminearum)FGSG_03700基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。[方法]应用Split Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,通过PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮... [目的]敲除小麦赤霉菌(Fusarium graminearum)FGSG_03700基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。[方法]应用Split Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,通过PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上筛选转化子。[结果]通过PCR正负筛查,得到3个确定的突变体,分别命名为ΔFGSG_03700 1-2、ΔFGSG_03700 2-2、ΔFGSG_03700 2-3。通过表型验证及孢子对番茄侵染试验发现,敲除突变体的菌落形态及生长速度没有明显变化,致病力没有减弱,但突变体的产孢量低于野生型PH-1。[结论]FGSG_03700基因可能与小麦赤霉菌分生孢子的生长能力有关。 展开更多
关键词 小麦赤霉菌 SPLIT MARKER 基因敲除 FGSG03700
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服装结构设计中的“统一与变化” 被引量:2
11
作者 王冬雪 《纺织导报》 CAS 北大核心 2014年第12期81-82,共2页
服装结构设计是服装设计的重要组成部分。文章以统一的基本型和款式变化为例,通过从裤子、上衣等的基本型到收省、分割等的变化,得出服装结构设计中的辩证规律。
关键词 结构制图 排料 基本型 收省 分割
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测井曲线在准东煤田大井矿区一井田煤层对比中的应用 被引量:20
12
作者 常东 高占华 +2 位作者 彭鸿鹄 张景考 靳彦彬 《中国煤炭地质》 2008年第12期26-27,31,共3页
大井矿区一井田的测井任务是确定B1煤层厚度及分叉合并规律,正确划分煤层层位。依据该井田三个明显的标志层位,确认了该区的含煤层段,并将其西山窑中段B1煤层划分为B1、B11、B12、B11-1、B11-2、B12-1、B12-2等七个煤层编号。为提高层... 大井矿区一井田的测井任务是确定B1煤层厚度及分叉合并规律,正确划分煤层层位。依据该井田三个明显的标志层位,确认了该区的含煤层段,并将其西山窑中段B1煤层划分为B1、B11、B12、B11-1、B11-2、B12-1、B12-2等七个煤层编号。为提高层位对比的可靠性,将15条勘探线与十二条联络线进行测井曲线对比,确保两个方向对比结果一致。此次煤层对比可靠程度分为可靠(A)、基本可靠(B)、可靠性差(C)三级。从测井曲线对比结果看,井田的西北部和南部,煤层厚度大,分层小;井田的东北部和东部,煤层分叉多,煤层薄。 展开更多
关键词 标志层 煤层分叉 层位对比 测井曲线 准东煤田
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汉语分裂句的句法结构分析
13
作者 王旭 《岳阳职业技术学院学报》 2014年第6期92-94,共3页
汉语是注重话题的语言,依据CP分裂假说,汉语分裂句"是……的"结构的句法生成经历了话题化与焦点化两种语法过程,是体词性成分话题化与"是"字聚焦功能先后作用的结果。
关键词 焦点标记词“是” “是……的”分裂句 CP分裂假说 焦点化 话题化
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汉语体标记的制图分析
14
作者 侯雨婷 《伊犁师范大学学报》 2022年第2期66-71,共6页
一般认为,现代汉语中的体标记分为两大类,一类是出现在动词之前的“有”和“在”,一类是出现在动词之后的“过、着、了”。从它们在表达上的共现情况来看,认为体标记至少应该分为三层,并且它们都占据体短语(Aspectphrase)的核心位置,引... 一般认为,现代汉语中的体标记分为两大类,一类是出现在动词之前的“有”和“在”,一类是出现在动词之后的“过、着、了”。从它们在表达上的共现情况来看,认为体标记至少应该分为三层,并且它们都占据体短语(Aspectphrase)的核心位置,引导自己的最大投射。动词前的体标记由于独立性比较强,它不需要依附在动词之上,所以表现出很强的句法独立性。动词后的体标记独立性较弱,黏附性较强,它会吸引下层的动词上移,以满足自己的依附要求。从制图理论出发,对体标记内部的层级结构进行分析,试图对复杂的结构作出更全面、清晰的认识。 展开更多
关键词 体标记 句法制图 IP分裂 体标记共现
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禾谷镰刀菌中FgPDE1基因的敲除及其功能的研究 被引量:5
15
作者 常玉梅 侯占铭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期59-67,共9页
目的:旨在敲除禾谷镰刀菌Fusarium graminearum Fg PDE1基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。方法:应用Split-marker技术构建含有潮霉素基因敲除盒,通过PEG介导原生质体转化,PCR筛查抗潮霉素转化子以获得缺失突变体... 目的:旨在敲除禾谷镰刀菌Fusarium graminearum Fg PDE1基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。方法:应用Split-marker技术构建含有潮霉素基因敲除盒,通过PEG介导原生质体转化,PCR筛查抗潮霉素转化子以获得缺失突变体ΔFg PDE1,根据突变体表型变化及致病性的检测对Fg PDE1基因的功能进行分析。结果:采用Split-marker技术,成功构建了Fg PDE1基因敲除盒;PEG介导转化禾谷镰刀菌原生质体后成功获得转化子。经PCR筛查,得到3个PCR确认的敲除突变体;表型观察发现,ΔFg PDE1菌落的外型及菌落生长速度与野生型没有明显差异。孢子侵染西红柿果实实验证明:以西红柿为侵染宿主,相对于野生型,突变体致病性没有明显减弱;但突变体分生孢子产量显著下降。结论:Fg PDE1基因可能与禾谷镰刀菌分生孢子的形成有关。 展开更多
关键词 禾谷镰刀菌 FgPDE1 基因敲除 split-marker
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尖孢镰刀菌亚麻专化型Folprp4基因参与调控菌丝生长和分生孢子发生 被引量:6
16
作者 董慧霞 侯占铭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期13-26,共14页
目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介... 目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介导转化到野生型原生质体中,在含有潮霉素B的TCC培养基上筛选转化子,通过PCR正负筛查获得Folprp4基因缺失突变株(ΔFolprp4)。构建含有Folprp4基因的载体pZDH1,并将其转化到敲除突变体中进行互补测验。结果:与野生型(hm)和异位插入突变体(ecFolprp4)相比,敲除突变体菌丝生长受到严重阻碍,当野生型和异位插入突变体长满整个平板时,敲除突变体菌落呈小点状。敲除突变体的另一个显著变化是ΔFolprp4的分生孢子产量显著下降。侵染实验表明,ΔFolprp4对亚麻幼苗的毒力显著降低。互补实验表明,该互补载体的回复子(Folprp4-C)在菌落形态、生长速率、分生孢子产量和毒力方面均恢复到了野生型菌株。结论:Folprp4基因与尖孢镰刀菌的菌丝生长、分生孢子发生和致病性有关。 展开更多
关键词 Folprp4基因 尖孢镰刀菌亚麻专化型 split-marker 基因敲除 致病性
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Folpcs1基因对尖孢镰刀菌亚麻专化型的无性繁殖和营养生长的调控 被引量:3
17
作者 郭晶 侯占铭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期48-64,共17页
背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(interc... 背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(intercalary phialides)产生分生孢子。目的:鉴定pcs1同源基因Folpcs1在镰刀菌中的作用。方法:对Folpcs1的基因组DNA及cDNA测序后,利用Split-Marker基因敲除技术破坏该基因。构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)转化野生型原生质体法,获得了Folpcs1基因缺失突变株(ΔFolpcs1),并利用PCR法进行正负筛选。为了对缺失突变体互补,将pcs1及其上下游侧翼序列构建到pZWH1中后,回复到ΔFolpcs1中。结果:测序结果表明,有一个654bp的内含子,cDNA序列长度为2 846bp。通过观察发现,敲除突变体的生长速率明显降低,培养基中几乎观察不到分生孢子。回复突变体回复了野生型菌株的生长速率及分生孢子产生过程。结论:说明Folpcs1负责菌丝的营养生长和分生孢子的产生。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌亚麻专化型 Folpcs1 split-marker 基因敲除
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尖孢镰刀菌亚麻专化型FolCPKR基因敲除及功能研究 被引量:1
18
作者 刘家敏 侯占铭 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期7067-7073,共7页
为研究尖孢镰刀菌亚麻专化型FolCPKR基因的功能,利用Split Marker技术构建含有潮霉素(hph)抗性基因的基因敲除盒,PEG(polyethylene glycol)介导法转化到野生型原生质体中,挑取对潮霉素B有抗性的转化子于TCC固体培养基,通过PCR正负筛选... 为研究尖孢镰刀菌亚麻专化型FolCPKR基因的功能,利用Split Marker技术构建含有潮霉素(hph)抗性基因的基因敲除盒,PEG(polyethylene glycol)介导法转化到野生型原生质体中,挑取对潮霉素B有抗性的转化子于TCC固体培养基,通过PCR正负筛选得到敲除突变体。形态学观察表明,与野生型hm相比,敲除突变体的生长速率和分生孢子数显著减小。突变体分生孢子侵染亚麻幼苗试验显示,敲除突变体与野生型hm之间存在显著差异,敲除突变体分生孢子对亚麻幼苗的致病力明显下降,植株枯萎现象显著减弱。结果表明,FolCPKR基因与病原菌菌丝生长,分生孢子发生和致病力有关。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌 FolCPKR基因 split-marker 基因敲除 致病力
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小麦赤霉菌FGSG_05656基因敲除及功能分析 被引量:1
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作者 张艳君 侯占铭 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3125-3132,共8页
小麦赤霉菌FGSG05656基因在MGV1敲除突变体中显著下调,为了进一步研究其生物学功能,本研究采用Split-Marker基因敲除技术,构建了含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)法转化野生型原生质体。潮霉素(Hygromycin)选择... 小麦赤霉菌FGSG05656基因在MGV1敲除突变体中显著下调,为了进一步研究其生物学功能,本研究采用Split-Marker基因敲除技术,构建了含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)法转化野生型原生质体。潮霉素(Hygromycin)选择培养基筛选转化子后,PCR正负筛选鉴定敲除突变体。基于缺失突变体的表型和感染能力的变化来分析FGSG05656基因的生物学功能。与野生型PH-1相比,敲除突变体的生长速率和分生孢子数显著减少,表明FGSG05656基因可能参与菌丝体的生长和分生孢子的发生。植物感染试验显示缺失突变体与野生型之间没有显著差异。分生孢子是病原菌感染寄主的主要器官,它的减少可以显著减弱病原菌的扩散,FGSG05656基因敲除突变体分生孢子显著减少,这一结果对于进一步研究分生孢子发生的分子机理具有重要意义,同时为小麦抗病分子育种提供依据。 展开更多
关键词 小麦赤霉菌 FGSG_05656 split-marker 基因敲除
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香蕉枯萎病菌TR4原生质体转化和基因敲除体系构建 被引量:6
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作者 张磊 郭燕 +2 位作者 王云月 唐威华 郑泗军 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期137-140,共4页
香蕉枯萎病是一种典型的维管束和土传真菌病害,也是最具毁灭性的植物病害之一。香蕉一旦感病,很难结果,而且目前尚无有效的防治措施。因此,研究植物病原菌侵染进程和致病机制,可以拓宽思路以寻求植物病害防治新途径。香蕉枯萎病是由尖... 香蕉枯萎病是一种典型的维管束和土传真菌病害,也是最具毁灭性的植物病害之一。香蕉一旦感病,很难结果,而且目前尚无有效的防治措施。因此,研究植物病原菌侵染进程和致病机制,可以拓宽思路以寻求植物病害防治新途径。香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc)侵染所致。 展开更多
关键词 香蕉枯萎病菌 原生质体转化 基因敲除 尖孢镰刀菌古巴专化型 植物病害防治 土传真菌病害 植物病原菌 致病机制
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