艰难拟梭菌SpoOA蛋白结构及分子特性的生物信息学分析

为了分析艰难拟梭菌SpoOA蛋白的结构及分子特性,本研究从NCBI蛋白质数据库中下载艰难拟梭菌SpoOA蛋白的氨基酸序列,分别采用ProtParam、Motif Scan、PSIPRED、SMART等在线分析程序预测其理化性质、翻译后修饰位点、二级结构和保守结构域,并利用MEGA 6.06软件为不同物种来源的SpoOA蛋白构建进化树。结果表明,艰难拟梭菌SpoOA蛋白序列长度为274 aa,分子量为30.85 kDa,等电点理论值为6.33,不存在信号肽及跨膜结构域,并定位于胞质中。SpoOA蛋白含有REC和SpoOA C两大结构域,二级结构由10个α螺旋和10个β折叠组成,含有6个酪蛋白激酶II磷酸化位点、1个N-肉豆蔻酰化位点和1个蛋白激酶C磷酸化位点。不同物种来源的SpoOA蛋白分为两大支,其中7种芽孢杆菌聚为一支,4种梭菌聚为另外一支。本研究运用生物信息学方法分析了艰难拟梭菌SpoOA蛋白的保守结构域及翻译后修饰位点,为进一步研究其调控毒素表达的机制提供参考。

同源重组法构建枯草杆菌spo0 A基因缺失突变株

从枯草杆菌(Bacillussubtilis)168的衍生菌株1094的基因组DNA中分别扩增了孢子形成的早期因子基因spo0A的上、下游片段spo0A front和spo0A back,并以大肠杆菌(E.coli)质粒pBluescriptⅡks(+)为骨架,以来自pBEST501质粒上的新霉素抗性基因(neor)为枯草杆菌中的筛选标记,构建了基于枯草杆菌spo0A基因位点的整合载体pYZQ 1.线性化后转化枯草杆菌,从新霉素和壮观霉素双抗性平板上挑取两株转化子,通过基因组的PCR鉴定,孢子形成率测定,孢子染色镜检,确定转化子为枯草杆菌的孢子形成spo0A基因缺失突变株(spo0A∶∶neor).

spo0A基因在艰难梭菌生长及芽孢形成中的作用

目的了解spo0A基因对艰难梭菌临床分离株生长和芽孢产生的影响。方法采用ClosTron敲除技术构建艰难梭菌临床分离株C25的spo0A基因突变株,分光光度计检测菌液浓度并绘制生长曲线,孔雀绿染色法计数芽孢和营养细胞。结果艰难梭菌临床分离株C25的spo0A基因敲除突变株和敲除前亲代株的48 h生长曲线无明显差异,但突变株不再产生芽孢。结论 spo0A基因是艰难梭菌芽孢形成过程中的关键基因,但并非其生长过程中的主要基因。

环介导等温扩增技术快速检测食品中的耐热芽孢菌

针对食品中的好热黄无氧芽孢菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌等耐热芽孢菌,以spo0A基因部分序列为靶基因,设计了一套引物,能够同时对这3种菌进行环介导等温扩增(LAMP)检测,扩增只需要60min。该法快速并具有良好的特异性,灵敏度可达到8cfu/mL,是普通PCR的10倍。DNaseI的使用与LAMP结合,可有效降解死菌游离DNA,消除其影响。结果表明,该方法用于奶粉及罐头制品中耐热芽孢菌的检测,具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点,在食品微生物检测中拥有广阔的前景。

梭菌芽孢形成的调控机制及应用研究进展

梭菌独特的芽孢形成的特性吸引了越来越多研究者的关注。然而,由于梭菌物种与生理特性的不同,人们会根据不同的需求合理的调控(促进或抑制)芽孢的产生。该文通过对转录调节因子Spo0A,孤儿组氨酸激酶和Sigma因子相关研究进展的介绍,系统阐述了梭菌芽孢形成的分子调控机制,并对梭菌芽孢形成的影响因素进行了概括,同时对近年来通过调控芽孢形成在工业和医疗卫生领域中的应用研究进展进行了介绍,以期为精准调控梭菌芽孢的形成提供可靠的理论参考。