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斑蝥素诱导草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9凋亡的临界条件 被引量:9
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作者 张来喜 杨宝东 +3 位作者 张民照 王进忠 张爱环 张志勇 《北京农学院学报》 2011年第2期14-17,共4页
为进一步利用昆虫细胞研究斑蝥素对鳞翅目昆虫的毒杀机理,采用细胞形态学观察法和DNA凝胶电泳法研究斑蝥素诱导草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9细胞凋亡的临界条件。结果表明:供试细胞凋亡率与斑蝥素处理剂量、时间呈... 为进一步利用昆虫细胞研究斑蝥素对鳞翅目昆虫的毒杀机理,采用细胞形态学观察法和DNA凝胶电泳法研究斑蝥素诱导草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9细胞凋亡的临界条件。结果表明:供试细胞凋亡率与斑蝥素处理剂量、时间呈现密切相关性;在较低剂量处理下,可观察到细胞凋亡。当斑蝥素质量浓度达到6.25μg/mL,处理细胞3 h或3.125μg/mL处理细胞12 h时,斑蝥素处理Sf9导致细胞出现明显畸形、形成凋亡小体等凋亡症状。DNA Ladder条件要求严格,在冰浴条件下,当斑蝥素处理质量浓度达到6.25μg/mL处理细胞24 h时,或者12.5μg/mL处理细胞12 h时,可观察到明显的DNA梯度条带。 展开更多
关键词 斑蝥素 草地贪夜蛾 凋亡 临界条件 sf9
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Genome editing of the SfABCC2 gene confers resistance to Cry1F toxin from Bacillus thuringiensis in Spodoptera frugiperda 被引量:10
2
作者 JIN Ming-hui TAO Jia-hui +4 位作者 LI Qp CHENG Ying SUN Xiao-xu WU Kong-ming XIAO Yu-tao 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2021年第3期815-820,共6页
ATP-binding cassette transporter C2(ABCC2)is known to be a receptor for Bacillus thuringiensis(Bt)toxins in several lepidopteran insects.Mutations in the ABCC2 gene have been genetically linked to field-evolved resist... ATP-binding cassette transporter C2(ABCC2)is known to be a receptor for Bacillus thuringiensis(Bt)toxins in several lepidopteran insects.Mutations in the ABCC2 gene have been genetically linked to field-evolved resistance to the Cry1 F toxin from Bt in Spodoptera frugiperda.Here we generated a SfABCC2 knockout strain of S.frugiperda using the CRISPR/Cas9 system to provide further functional evidence of the role of this gene in susceptibility and resistance to Cry1 F.Results from bioassays showed that the SfABCC2 knockout S.frugiperda strain displayed 118-fold resistance to Cry1 F compared with the parental DH19 strain,but no resistance to Vip3 A toxin from Bt.These results provide the first reverse genetic evidence for SfABCC2 as a functional receptor for Cry1 F. 展开更多
关键词 spodoptera frugiperda ABCC2 CRISPR/Cas9 Bt receptor Cry1F
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喜树碱诱导的草地贪夜蛾Sf9细胞凋亡 被引量:7
3
作者 王文祥 钟国华 +2 位作者 胡美英 黄劲飞 葛萃萃 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期894-901,共8页
传统植物源杀虫剂喜树碱具有优异的抑制昆虫生长发育活性,其诱导昆虫细胞凋亡的作用方式和机制尚不明确,极大地限制了喜树碱在植物保护领域的应用开发。本研究以1μmol/L喜树碱诱导草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda Sf9细胞呈现细胞皱缩... 传统植物源杀虫剂喜树碱具有优异的抑制昆虫生长发育活性,其诱导昆虫细胞凋亡的作用方式和机制尚不明确,极大地限制了喜树碱在植物保护领域的应用开发。本研究以1μmol/L喜树碱诱导草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda Sf9细胞呈现细胞皱缩、微绒毛消失和染色质边集等典型细胞凋亡早期超微结构形态特征,中期凋亡小体逐渐出现并急剧增多,DNA电泳分析可见清晰DNA片段化凋亡特征。流式细胞术分析表明1μmol/L喜树碱诱导Sf9细胞12h凋亡率达到最大值39.67%,是对照的13.13倍,随后减小。喜树碱诱导Sf9细胞凋亡在12h和24h时Sf caspase-1分别出现两个活性高峰,表明其作为效应因子在细胞凋亡级联反应过程中具有影响作用。喜树碱显著抑制Sf9细胞拓扑异构酶Ⅰ活性,阻断解旋负超螺旋pBR322DNA,导致DNA损伤进而启动细胞凋亡级联反应使Sfcaspase-1活性增加,提示其信号转导过程是细胞凋亡诱导机制之一。本研究通过分析喜树碱的诱导昆虫Sf9细胞凋亡,对揭示喜树碱诱导昆虫细胞凋亡的作用机制具有重要启示和帮助。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 喜树碱 sf9细胞 细胞凋亡 级联反应 流式细胞术
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不同杀虫成分对Sf9细胞凋亡的影响 被引量:6
4
作者 贾建文 黄劲飞 +2 位作者 王文祥 胡美英 钟国华 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期29-35,共7页
通过倒置显微形态观察凋亡小体、DNA琼脂糖凝胶电泳确证的模型,研究了8种代表性杀虫成分对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda离体培养细胞系Sf9的凋亡诱导效果,以探讨不同杀虫成分对昆虫细胞凋亡的影响.结果表明,印楝素0.15-1.50μg/mL... 通过倒置显微形态观察凋亡小体、DNA琼脂糖凝胶电泳确证的模型,研究了8种代表性杀虫成分对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda离体培养细胞系Sf9的凋亡诱导效果,以探讨不同杀虫成分对昆虫细胞凋亡的影响.结果表明,印楝素0.15-1.50μg/mL处理后72 h内、喜树碱0.35-3.50μg/mL处理后36 h,Sf9细胞产生大量典型凋亡小体,处理时间延长或剂量加大则以造成细胞坏死为主;DNA电泳产生典型的DNA Ladder,表明印楝素和喜树碱对Sf9具有明显的细胞凋亡诱导作用.印楝素1.5μg/mL诱导处理Sf9细胞凋亡高峰期为处理后24-48 h,喜树碱0.35-3.50μg/mL诱导处理Sf9细胞凋亡高峰期为处理后12 h.苦参碱、氟铃脲、毒死蜱、灭多威、氯氰菊酯以0.1-10.0μg/mL及昆虫蜕皮激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone)以0.048-4.800μg/mL处理后72 h内对Sf9均无明显的细胞凋亡诱导作用.杀虫剂对昆虫细胞凋亡诱导效应随供试化合物、细胞种类、处理剂量、处理时间而异. 展开更多
关键词 细胞凋亡 草地贪夜蛾细胞系sf9 印楝素 喜树碱
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草地贪夜蛾Sf9细胞对饥饿诱导自噬的响应 被引量:1
5
作者 谢昆 王丽仙 +4 位作者 王靖 朱灵明 尹建华 叶青霞 孙艳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期91-95,共5页
为研究草地贪夜蛾对饥饿诱导自噬的响应。从草地贪夜蛾EST数据库中筛选到一段核苷酸序列,设计特异性引物,RT-PCR技术从草地贪夜蛾Sf9细胞中扩增该核苷酸序列,经过生物信息学分析该序列与昆虫自噬相关基因ATG8同源性最高,命名为SfATG8基... 为研究草地贪夜蛾对饥饿诱导自噬的响应。从草地贪夜蛾EST数据库中筛选到一段核苷酸序列,设计特异性引物,RT-PCR技术从草地贪夜蛾Sf9细胞中扩增该核苷酸序列,经过生物信息学分析该序列与昆虫自噬相关基因ATG8同源性最高,命名为SfATG8基因,并构建了pIEX-4-mCherry-EGFP-SfATG8载体转染Sf9细胞。Sf9细胞经饥饿(PBS)诱导4 h后,Lyso-Tracker染色、Western Blotting、共聚焦显微镜检测细胞对自噬的响应程度。结果表明,经饥饿(PBS)诱导4 h的Sf9细胞中出现Sf Atg8-PE的表达,共聚焦显微镜检测到Sf9细胞膜上的自噬小体。以上证据证实饥饿(PBS)能诱导Sf9细胞发生自噬,为深入研究Sf9细胞对自噬的响应奠定了基础。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 sf9 饥饿 自噬
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吖啶橙对草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒的损伤效应
6
作者 邓平建 房师松 +3 位作者 李喜梅 倪惠波 王叶元 林健荣 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2007年第2期125-128,共4页
背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,... 背景与目的:探索吖啶橙对昆虫细胞的遗传损伤。材料与方法:用不同浓度的吖啶橙处理草地贪夜蛾Sf9细胞、AcMNPV病毒,观察其对细胞生长发育,微核发生率,AcMNPV感染力的影响。结果:sf9细胞经5μg/ml的吖啶橙处理后,细胞分裂生长速度减慢,细胞表面粗糙,微核发生率为10.4‰,10μg/ml时可引起细胞膜破碎或死亡,微核发生率为22‰,出现三核,多核甚至核裂现象。当AcMNPV经吖啶橙处理后再感染sf9细胞,AcMNPV可在细胞内增殖,形成多角体,并出现一些类似三角形或四角形的异常多角体。结论:用一定剂量的吖啶橙处理草地贪夜蛾sf9细胞和AcMNPV病毒,可对细胞产生损伤和引起AcMNPV发生异常多角体。 展开更多
关键词 吖啶橙 草地贪夜蛾sf9细胞 AcMNPV病毒 损伤
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斑蝥素对草地贪夜蛾Sf9细胞膜完整性和膜电位的影响 被引量:7
7
作者 汪丽 张来喜 +4 位作者 张志勇 杨宝东 王进忠 张爱环 张民照 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期512-520,共9页
为明确斑蝥素对昆虫细胞膜的作用及其机理,本研究利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵巢细胞系Sf9细胞作为实验材料,采用透射电子显微技术(transmission electron microscope,TEM)、激光共聚焦显微镜(laserscanning confocal micro... 为明确斑蝥素对昆虫细胞膜的作用及其机理,本研究利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵巢细胞系Sf9细胞作为实验材料,采用透射电子显微技术(transmission electron microscope,TEM)、激光共聚焦显微镜(laserscanning confocal microscope,LSCM)结合荧光探针FDA/PI及DiBAC4(3)技术研究斑蝥素(cantharidin,CTD)对Sf9细胞膜完整性及膜电位(membrane potential,MP)的影响。结果表明:32μmol/L CTD处理6h和12h后,电镜观察均未发现细胞膜结构破损;FDA/PI染色后,32μmol/L CTD处理0.5h后细胞FDA荧光强度比对照显著降低(P<0.05),碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色的细胞比例与对照无显著性差异(P≥0.05)。32μmol/L CTD处理140s后即引起MP发生显著性去极化(P<0.05);64μmol/L CTD处理瞬时MP发生显著性去极化(P<0.05);32μmol/L CTD处理3h内及64μmol/L CTD处理2h内MP仍保持显著性去极化(P<0.05),之后去极化程度降低;32μmol/L CTD处理6h及64μmol/L CTD处理3h时MP去极化与对照组相比已无显著性差异(P≥0.05)。结果说明,CTD处理短时间内可引起Sf9细胞膜电位去极化并维持一段时间,同时导致细胞活性发生不可逆下降,但未对细胞膜结构完整性产生破坏。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 斑蝥素 sf9细胞 膜完整性 膜电位 去极化
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草地贪夜蛾细胞系IPLB-Sf-9酵母双杂交cDNA文库的构建 被引量:4
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作者 王春苗 钟雪萍 +1 位作者 刘攀峰 黎路林 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期41-45,共5页
草地贪夜蛾Spdoptera frugiperda是危害玉米、高粱等农作物的重要害虫。草地贪夜蛾卵巢细胞系IPLB-Sf-9(Sf9)广泛应用于病毒学研究和真核生物基因表达。本研究从Sf9细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的Sf9细胞酵... 草地贪夜蛾Spdoptera frugiperda是危害玉米、高粱等农作物的重要害虫。草地贪夜蛾卵巢细胞系IPLB-Sf-9(Sf9)广泛应用于病毒学研究和真核生物基因表达。本研究从Sf9细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的Sf9细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库。Sf9细胞总RNA的电泳谱型与哺乳动物总RNA存在差异,其28S rRNA带弱于18S rRNA带,所合成的原始ds cDNA大小为0.1~4kb。文库展现良好的多态性,载体质粒插入的cDNA片段大小大部分在0.3~2kb之间。Sf9细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库的构建为草地贪夜蛾功能基因的识别和鉴定,为研究杆状病毒与宿主细胞的互作机制提供了重要研究工具。 展开更多
关键词 sf9细胞 CDNA文库 草地贪夜蛾 酵母双杂交 昆虫细胞系
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Mutagenesis of odorant coreceptor Orco reveals the distinct role of olfaction between sexes in Spodoptera frugiperda 被引量:3
9
作者 CAO Song SUN Dong-dong +2 位作者 LIU Yang YANG Qing WANG Gui-rong 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第7期2162-2172,共11页
Odorant receptor(OR)is crucial for insects to detect and recognize external chemical cues closely related to their survival.The insect OR forms a heteromeric complex composed of a ligand-specific receptor and a ubiqui... Odorant receptor(OR)is crucial for insects to detect and recognize external chemical cues closely related to their survival.The insect OR forms a heteromeric complex composed of a ligand-specific receptor and a ubiquitously odorant receptor coreceptor(Orco).This study used the CRISPR/Cas9 technique to knock out(KO)Orco and reveal its essential role in acting on OR-meditated olfactory behavior in a critical invasive agricultural pest,the fall armyworm(FAW),Spodoptera frugiperda.Electroantennogram(EAG)results suggested that the Orco mutants of both male and female moths severely reduced their electrophysiological responses to the eight tested plant volatiles and two sex pheromones.However,the Orco gene played distinct roles in mating behavior between sexes:the mating behavior was fully disrupted in mutated males but not in mutated females.The oviposition result indicated that the Orco KO females displayed reduced egg laying by 24.1%compared with the mated wild type(WT)females.Overall,these results strongly suggest that Orco is an excellent target for disrupting FAW’s normal behavior and provides a feasible pest control approach. 展开更多
关键词 spodoptera frugiperda Orco CRISPR/Cas9 EAG olfactory behavior
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30种吗啉化合物对昆虫细胞Spodoptera frugiperda(Sf9)的毒力筛选 被引量:3
10
作者 张新刚 史冠莹 +2 位作者 何利钦 陶科 侯太平 《农药》 CAS 北大核心 2012年第4期301-303,共3页
[目的]利用Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞,测定30种吗啉化合物的毒力,研究化合物对细胞周期的影响。[方法]毒力测定采用MTT法,用流式细胞仪进行细胞周期测定。[结果]30种化合物中有27种化合物对Sf9细胞有抑制效果,其中吗啉丙烯酮类化... [目的]利用Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞,测定30种吗啉化合物的毒力,研究化合物对细胞周期的影响。[方法]毒力测定采用MTT法,用流式细胞仪进行细胞周期测定。[结果]30种化合物中有27种化合物对Sf9细胞有抑制效果,其中吗啉丙烯酮类化合物A3、A4、A6的抑制率超过50%,分别为(69.5±1.54)%、(67.9±1.87)%与(53.6±0.98)%。用50μmol/L的化合物A3处理Sf9细胞后,有凋亡小体出现。同时,化合物A3能干扰细胞正常的增殖周期,使部分细胞被阻滞在DNA合成期(S期)。[结论]化合物A3、A4、A6对Sf9细胞有较强的抑制作用,化合物A3可以干扰正常的细胞周期,并引发细胞凋亡。 展开更多
关键词 sf9 毒力 MTT法 细胞周期
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草地贪夜蛾半胱氨酸蛋白酶Sf-caspase-3基因克隆与表达分析 被引量:1
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作者 舒本水 钟宏新 +2 位作者 冯杰 洪一峰 林进添 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期1352-1360,共9页
半胱氨酸蛋白酶(caspases)是细胞凋亡过程中重要的酶类,参与调控昆虫变态发育及响应外界压力等多种生理过程。本研究通过转录组数据及逆转录PCR鉴定并验证得到草地贪夜蛾Spodoptera frugiperdaSf-caspase-3基因编码区全长。该基因编码区... 半胱氨酸蛋白酶(caspases)是细胞凋亡过程中重要的酶类,参与调控昆虫变态发育及响应外界压力等多种生理过程。本研究通过转录组数据及逆转录PCR鉴定并验证得到草地贪夜蛾Spodoptera frugiperdaSf-caspase-3基因编码区全长。该基因编码区长840 bp,编码279个氨基酸,预测蛋白分子量为31.43 kDa。氨基酸序列分析表明Sf-caspase-3具有保守的QACRG五肽序列,且与Lep-caspase-3高度保守。进化树分析表明Sf-caspase-3与甜菜夜蛾Spodoptera exigua Se-caspase-3亲缘关系最近。RT-qPCR检测结果表明Sf-caspase-3在草地贪夜蛾各个龄期均有表达,其中3~6龄幼虫期表达量最高,蛹期和卵期表达量最低。此外Sf-caspase-3在6龄幼虫中肠组织中表达量最高,而在表皮、脂肪体及马氏管中表达量极低。本研究成功构建Sf-caspase-3原核表达重组质粒,在28℃下0.4 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌株4 h得到约50 kDa大小条带,与预期条带大小相符。蛋白可溶性分析表明Sf-caspase-3主要以不可溶的形式存在包涵体中。本研究为草地贪夜蛾Sf-caspase-3功能及鳞翅目昆虫细胞凋亡机制研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 sf-caspase-3 克隆 时空表达 原核表达
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杆状病毒AcMNPV中Ac109蛋白的抗虫功能分析 被引量:3
12
作者 许书美 付月君 《山西农业科学》 2018年第2期155-158,171,共5页
为研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中病毒增殖因子Ac109对鳞翅目害虫甜菜夜蛾幼虫的抗虫效应,采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP。免疫印迹和荧光显微镜观察结果证实,重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP... 为研究苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中病毒增殖因子Ac109对鳞翅目害虫甜菜夜蛾幼虫的抗虫效应,采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP。免疫印迹和荧光显微镜观察结果证实,重组病毒AcMNPV-Ac109-EGFP侵染昆虫Sf9细胞后Ac109的表达量和细胞的荧光强度随着侵染时间延长而显著增加。抗虫试验表明,与AcMNPV处理组、PBS对照组相比,AcMNPV-Ac109-EGFP病毒处理组的幼虫体质量增长缓慢,有较高的致死率和低的蛹化率及羽化率;AcMNPV与AcMNPV-Ac109-EGFP病毒处理组的最终死亡率分别为58.33%和73.33%;蛹化率分别为41.667%和25.000%;羽化率分别为20.00%和11.67%,说明Ac109可提高病毒对甜菜夜蛾幼虫的抗虫性。以上结果构建了1株高抗虫活性的重组病毒,并为这个重组病毒潜在的应用价值提供了试验依据。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV) Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 病毒增殖因子Ac109 草地贪夜蛾卵巢细胞sf9 甜菜夜蛾
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用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白gp36 被引量:5
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作者 张应玖 金宁一 +2 位作者 金善荣 王宏伟 沈家骢 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期13-16,共4页
目的用细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统在昆虫细胞 Sf9中表达 HIV- 2外膜糖蛋白 gp10 5和跨膜糖蛋白 gp36 ,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法分别将 HIV- 2外膜蛋白 gp10 5和跨膜蛋白 gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载... 目的用细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统在昆虫细胞 Sf9中表达 HIV- 2外膜糖蛋白 gp10 5和跨膜糖蛋白 gp36 ,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法分别将 HIV- 2外膜蛋白 gp10 5和跨膜蛋白 gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载体 p Fast Bac HTa和 p Fast Bac HTb中多角体启动子下游 ,构建成重组转座载体 p Fast Bac HTa- gp10 5和 p FastBac HTb- gp36 ,利用细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒 ,并在昆虫细胞 Sf9中表达 HIV- 2的 gp10 5和gp36。结果 SDS- PAGE分析结果表明 ,gp10 5基因表达产物为一 6 6 0 0 0 u糖蛋白 ,gp36基因则表达一 410 0 0 u糖蛋白 ,与天然产物一致。 Western blot结果显示 :两者均具有抗原特异性。结论 gp10 5和 gp36在昆虫细胞中得到了高效表达 ,并均被糖基化 ;gp10 5接近天然产物 。 展开更多
关键词 HIV-2 gp105 gp36 杆状病毒 昆虫细胞
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球孢白僵菌毒素的分离、毒力检测及结构鉴定 被引量:10
14
作者 武艺 黄秀梨 +1 位作者 洪泂 邓继先 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期468-474,共7页
用吸附法从球孢白僵菌(Beauveriabassiana)1003-V的代谢产物中分离出导致昆虫患病的毒素粗提物,并对其进行了毒力检测。结果表明,该毒素对白纹伊蚊(Aedesalbopictus)幼虫有明显毒性;对棉... 用吸附法从球孢白僵菌(Beauveriabassiana)1003-V的代谢产物中分离出导致昆虫患病的毒素粗提物,并对其进行了毒力检测。结果表明,该毒素对白纹伊蚊(Aedesalbopictus)幼虫有明显毒性;对棉铃虫幼虫口服毒性较弱。 展开更多
关键词 球孢白僵菌 毒素 棉铃虫 白纹伊蚊 毒力检测
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HIV-1-gp120在重组杆状病毒系统中的表达
15
作者 张应玖 金宁一 +4 位作者 王宏伟 张东威 邵一鸣 殷霞 沈家骢 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期7-8,11,共3页
将中国株HIV 1B亚型 gp1 2 0全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游 ,构建成重组转座载体 pFastBacI gp1 2 0 ,利用细菌 /杆状病毒 (BactoBac)表达系统筛选重组杆状病毒 ,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV 1的外膜... 将中国株HIV 1B亚型 gp1 2 0全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游 ,构建成重组转座载体 pFastBacI gp1 2 0 ,利用细菌 /杆状病毒 (BactoBac)表达系统筛选重组杆状病毒 ,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV 1的外膜糖蛋白 gp1 2 0 ,SDS -PAGE和Westernblot分析结果一致 ,证明表达了 2种糖基化程度不同的 gp1 2 0。 展开更多
关键词 HIV-1 GP120 杆状病毒 昆虫细胞 重组表达
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GFP与水稻条纹病毒病害特异蛋白的融合基因在sf9昆虫细胞中的表达
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作者 林董 郑璐平 +3 位作者 谢荔岩 吴祖建 林奇英 谢联辉 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期271-276,共6页
用重叠延伸PCR(overlap Polymerase Chain Reaction,overlap-PCR)方法获得了含有绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)病害特异性蛋白SP(Disease-specific protein)两者的融... 用重叠延伸PCR(overlap Polymerase Chain Reaction,overlap-PCR)方法获得了含有绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)病害特异性蛋白SP(Disease-specific protein)两者的融合基因(GFP-SP),并将其克隆至载体pMD18-T,得到的重组质粒pMD18-T-GFP-SP经Xba Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切后与经相同方法处理过的杆状病毒转移载体pFastBacHTb相连接构建成重组转移质粒pFastBacHTb-GFP-SP。酶切和测序鉴定证明了其序列的正确性并且无移码现象发生。将此质粒转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,得到含有目的基因片段的重组杆状病毒穿梭质粒rb-GFP-SP。以之转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,sf9)细胞,24~48h后在显微镜200倍可见光视野下观察到被感染细胞发生了细胞和细胞核变大、细胞内颗粒物增多、细胞脱落甚至裂解等一系列与正常的st9昆虫细胞形态有明显区别的变化。荧光显微镜下可见部分细胞发出清晰的绿色荧光,且大部分荧光集中在细胞质部分。这些结果表明,GFP-SP融合蛋白在st9昆虫细胞内成功表达。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 病害特异性蛋白 绿色荧光蛋白 昆虫细胞st9
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骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾离体细胞系和幼虫血细胞的毒性作用 被引量:5
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作者 李金梅 木魁 +4 位作者 姜双林 李登坤 李文雍 马同富 李永民 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第4期127-133,共7页
【目的】研究骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾幼虫的杀虫作用机理,为此类生物碱作为新型植物杀虫剂的开发应用提供理论依据。【方法】从骆驼蓬成熟种子中提取骆驼蓬总碱,采用MTT法测定0,1,5,10和20μg/mL骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾(Spodoptera frug... 【目的】研究骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾幼虫的杀虫作用机理,为此类生物碱作为新型植物杀虫剂的开发应用提供理论依据。【方法】从骆驼蓬成熟种子中提取骆驼蓬总碱,采用MTT法测定0,1,5,10和20μg/mL骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系(Sf9)的毒性;测定5μg/mL骆驼蓬总碱在处理10,30,50,70和90min时对Sf9细胞Na^+和K^+吸收的影响,并测定5μg/mL骆驼蓬总碱在处理1,2,3,4,5d后对葡萄糖吸收的影响;最后采用叶碟法(叶碟在20μg/mL骆驼蓬总碱中浸3s)和注射法(2μg/头)分别测定处理1,8,16,24和48h时骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾4龄幼虫血细胞数量的影响。【结果】10和20μg/mL骆驼蓬总碱处理草地贪夜蛾Sf9细胞24h后,对细胞的抑制率分别为62.04%和83.25%;骆驼蓬总碱处理后8,16,24和48h,其对草地贪夜蛾Sf9细胞的LC50分别为35.32,23.21,14.87和8.98μg/mL,骆驼蓬总碱对Sf9细胞的毒性有时间滞后效应。5μg/mL骆驼蓬总碱处理Sf9细胞后10min,Sf9细胞对Na^+、K^+的吸收速率明显增加,处理后30min Sf9细胞对Na^+、K^+的吸收逐渐减弱;处理后3dSf9细胞对葡萄糖的吸收迅速增加,处理后4dSf9细胞对葡萄糖的吸收趋于停止。以叶碟法和注射法处理草地贪夜蛾4龄幼虫,8h后幼虫血细胞数量显著降低,但随时间延长幼虫血细胞数量又逐渐增加。【结论】骆驼蓬总碱对草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf9有明显的毒杀活性,且对Sf9细胞中Na^+、K^+和葡萄糖的吸收具有抑制作用;对草地贪夜蛾4龄幼虫血细胞数量也有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 骆驼蓬 生物总碱 草地贪夜蛾 卵巢细胞系 细胞毒性
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26种呋喃酮类似物对Sf9细胞毒力测定与活体生物活性比较研究 被引量:3
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作者 何利钦 任远航 +3 位作者 邓园杰 金洪 陶科 侯太平 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期403-408,共6页
利用MTT法测定26种呋喃酮类似物对Sf9细胞的毒力,采用浸渍法测定这些化合物对菜青虫3龄幼虫、菜蚜的触杀作用,并对其关联性进行比较.结果表明:26种呋喃酮类似物中,对Sf9细胞有增殖抑制作用的化合物为25种,对菜青虫和蚜虫均有触杀作用.... 利用MTT法测定26种呋喃酮类似物对Sf9细胞的毒力,采用浸渍法测定这些化合物对菜青虫3龄幼虫、菜蚜的触杀作用,并对其关联性进行比较.结果表明:26种呋喃酮类似物中,对Sf9细胞有增殖抑制作用的化合物为25种,对菜青虫和蚜虫均有触杀作用.细胞增殖抑制率与活体生物活性测定结果比较,Sf9细胞与菜青虫的关联性大于与蚜虫的关联性.在四大类化合物中,1-呋喃基-3-取代苯基-2,3-二溴丙酮类化合物(Ⅱ类)细胞毒力测定与活体生物活性关联性大于其他三类,其中的Ⅱ1、Ⅱ3两种化合物的抑制率与校正死亡率均高于60%,抑制率分别为(62.9±3.21)%和(72.5±3.16)%,校正死亡率分别为68.42%、63.95%和73.68%、75.58%,细胞毒力与活体检测关联性很大. 展开更多
关键词 呋喃酮类似物 sf9 MTT法 毒力 触杀作用
原文传递
小菜蛾中肠氨肽酶N2在昆虫细胞中的表达 被引量:2
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作者 王俊华 周小毛 +5 位作者 吴青君 王少丽 谢文 陈得峰 徐宝云 张友军 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-157,共7页
利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac baculovirus expression system)表达获得小菜蛾Plutella xylostella(L.)中肠氨肽酶N2(aminopeptidase N,APN2)蛋白,成功建立了该蛋白在昆虫细胞中的表达体系。将对Cry1Ac毒素敏感和已产生抗... 利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac baculovirus expression system)表达获得小菜蛾Plutella xylostella(L.)中肠氨肽酶N2(aminopeptidase N,APN2)蛋白,成功建立了该蛋白在昆虫细胞中的表达体系。将对Cry1Ac毒素敏感和已产生抗性的小菜蛾中肠APN2基因插入表达载体pFAST Bac HTB中,并在草地夜蛾Spodoptera frugiperda细胞系(Sf9)中进行了重组表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹技术(Western-blotting)结果显示,在107 kDa处有1条特异性蛋白条带。研究表明,小菜蛾中肠APN2基因可在Sf9细胞中成功表达,这为继续研究其功能及抗性的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 氨肽酶N 绿色荧光蛋白 sf9细胞系 杆状病毒表达系统
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血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究 被引量:1
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作者 徐晓琳 刘戈飞 黄东阳 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1096-1101,共6页
背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过... 背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性。方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Westernblot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析;用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTT法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用。结果:成功构建了滴度为2×108pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长。结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用。 展开更多
关键词 血管 内皮细胞 血管抑制素/拮抗和抑制剂 杆状病毒 基因转染 草地贪夜蛾(sf9) 昆虫细胞
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