抗Spodoptera f.病毒单克隆抗体的初步研制

本文介绍了 Spodoptera frugiperda 病毒多角体及病毒粒子的提纯方法。粗提材料先通过40%蔗糖,在10000r/min 下离心15分钟,随后悬浮于0.01M Tris 缓冲液,25～65%蔗糖的连续梯度中,于40000 r/min 下离心30分钟。取出多角体的条带,洗除游离残存的蔗糖,透析过夜。将多角体在4℃,0.01MNa_2CO_3,0.01MEDTA,0.17M NaCl,pH=1下,作用1小时,随后调节 pH 到8.5～8.9,2000g,离心10分钟。该制剂在4℃下,25～60%蔗糖梯度中,24000r/min,离心2小时。随后取出病毒粒子,重新悬浮于蒸馏水中,于—70℃下贮藏备用。每个 BALB/C 小白鼠免疫4～5次,最后一次注射是在融合前4～7天。将2×10~8脾细胞与2×10~7P_3×63或 SP-2骨髓瘤细胞混合,并用50%PEG(Sigma)融合,用间接酶联免疫法进行筛选阳性杂交瘤细胞,强阳性者进行克隆化。以多角体及病毒粒子为抗原者,均建立了10株能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该抗体的效价较高,并进行了血清学的分类。

Genome editing of the SfABCC2 gene confers resistance to Cry1F toxin from Bacillus thuringiensis in Spodoptera frugiperda

ATP-binding cassette transporter C2(ABCC2)is known to be a receptor for Bacillus thuringiensis(Bt)toxins in several lepidopteran insects.Mutations in the ABCC2 gene have been genetically linked to field-evolved resistance to the Cry1 F toxin from Bt in Spodoptera frugiperda.Here we generated a SfABCC2 knockout strain of S.frugiperda using the CRISPR/Cas9 system to provide further functional evidence of the role of this gene in susceptibility and resistance to Cry1 F.Results from bioassays showed that the SfABCC2 knockout S.frugiperda strain displayed 118-fold resistance to Cry1 F compared with the parental DH19 strain,but no resistance to Vip3 A toxin from Bt.These results provide the first reverse genetic evidence for SfABCC2 as a functional receptor for Cry1 F.

印楝素与鱼藤酮及其复配混剂对斜纹夜蛾的毒效研究

用印楝素和鱼藤酮及其复配混剂对斜纹夜蛾3龄幼虫进行毒力测定。结果表明,印楝素和鱼藤酮单剂的毒力作用为一种剂量依赖关系;其复配混剂的触杀最佳配比为2∶6,此时印楝素和鱼藤酮浓度分别为200μg/mL和100μg/mL,共毒系数为423.15;其复配混剂的拒食最佳配比为3∶5,此时AFC50为1.2 mg/L,发育抑制率达90%以上只需35 mg/L。

斜纹夜蛾生长发育与温度的关系

以白菜为食物，在全温度范围内测定斜纹夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａ）的生长发育温度参数．分别测定了斜纹夜蛾卵，１～６龄幼虫，蛹发育及成虫产卵的起点温、最适温、最高温及有效积温．结果表明１～６龄幼虫及成虫的死亡速率与温度有正相关关系．卵及蛹的死亡速率与温度有负相关关系．卵，１～６龄幼虫，及蛹的存活有一最适温区，温度愈高，成虫的产卵量愈小．

茉莉酸甲酯诱导烟草抗斜纹夜蛾的作用

研究了不同浓度的茉莉酸甲酯(MeJA)对烟草过氧化物酶、多酚氧化酶、胰蛋白酶抑制剂和胰凝乳蛋白酶抑制剂的诱导作用及其时间效应,并对不同处理烟叶对斜纹夜蛾生长的影响进行了生物学测定。结果表明:烟草喷施不同浓度MeJA后,局部和系统叶片组织内系列氧化酶活性和蛋白酶抑制剂含量显著增加。斜纹夜蛾取食不同处理的烟株叶片后,其相对生长速率明显降低;2.4mmol/LMeJA的处理能诱导烟株产生最强的防卫应答,且能持续较长的时间。

叉角厉蝽对斜纹夜蛾不同龄期幼虫的选择捕食作用

应用二次回归通用旋转组合设计探讨了叉角厉蝽与斜纹夜蛾低龄幼虫、中龄幼虫和高龄幼虫共存系统中 ,天敌对猎物不同年龄等级的选择捕食作用 ,建立了 3个年龄等级的幼虫被捕食量模型。根据被捕食量模型可计算出斜纹夜蛾 3个年龄等级不同密度组合下 ,天敌对猎物的选择捕食比率。结果表明 ,在 3个年龄等级相同密度的组合下 ,叉角厉蝽倾向于捕食个体大的中高龄幼虫。

温度对斜纹夜蛾侧沟茧蜂功能反应的影响

在 1 8、2 3、2 8、3 2和 3 4℃ 5个恒温处理下 ,测定了斜纹夜蛾侧沟茧蜂在斜纹夜蛾幼虫不同密度下的寄生效应。结果表明 ,在试验温度范围内 ,各温度下的功能反应实验数据均能用 Holling圆盘方程较好地拟合。瞬间攻击率随温度升高而增加 ,但各温度间差异不显著。 3 2℃和 3 4℃高温下的处理时间比 1 8℃、2 3℃和 2 8℃要短 。

2种化学农药对斜纹夜蛾核型多角体病毒的增效作用

在温度(28±1)℃的实验室条件下,用化学农药毒死蜱和除尽与斜纹夜蛾核型多角体病毒(SLNPV)混合感染4龄期的斜纹夜蛾幼虫.结果表明:终浓度为10%常用量的化学农药病毒悬液,7 d的毒力倍数为1 194.09和661.40;LT50缩短2.319～2.916 d;终浓度为5×106PIB/mL的SLNPV农药稀释液,5 d的毒力倍数为2.75和2,其理论值LT50分别缩短10.742 d和6.402 d.

斜纹夜蛾NPV染病幼虫发育与温度的关系

在不同温度下，以不同剂量的ＳｌＮＰＶ饲食斜纹夜蛾ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａＦ．幼虫．结果表明，１～６龄染病幼虫的发育起点温分别是１８．７９，１６．２９，１４．１９，１０．８７，８．３９，７．０３℃；１～４龄染病幼虫的发育最适温分别是３２．８５，３３．４８，３４．２２，３１．７５℃．１～６龄染病幼虫的取食最适温分别是２６．５，２５．５７，２７．９０，２７．８２，２９．０１，２８．８５℃．建立了１～６龄染病幼虫取食白菜量的温度依赖模型，死亡速率模型。

闹羊花素-Ⅲ对斜纹夜蛾幼虫的作用方式及血糖含量的影响

测定了闹羊花素-Ⅲ对斜纹夜蛾4龄幼虫的拒食、触杀和胃毒作用。结果表明:闹羊花素-Ⅲ的杀虫方式主要以拒食和胃毒作用为主,触杀作用较弱;闹羊花素-Ⅲ处理斜纹夜蛾4龄幼虫24 h后,叶碟法测得的AFC50为16.63μg/mL,以叶片夹毒法测得的LC50为66.56μg/mL,以点滴法测得LD50为每头30.72μg,Potter喷雾法测得的LC50为590.35μg/mL。观察结果还表明,闹羊花素-Ⅲ能显著降低斜纹夜蛾幼虫的取食量、幼虫总糖量和血淋巴总糖含量。

几种天敌对斜纹夜蛾幼虫的捕食作用

测定了几种主要捕食性天敌捕食斜纹夜蛾 1～ 2龄幼虫的功能反应。结果表明 ,草间小黑蛛雌成蛛、拟水狼蛛雌成蛛和叉角厉蝽 2龄若虫对斜纹夜蛾 1～ 2龄幼虫均有较强的捕食能力 ,其理论最大捕食量分别为 6 .12头、2 6 .0 0头和 10 .11头。在斜纹夜蛾幼虫的 6个龄期中 ,最适合于叉角厉蝽雌成虫捕食的龄期为 4龄 ,其理论最大捕食量高达 10 .5

斜纹夜蛾杆状病毒流行病模拟模型研究

根据斜纹夜蛾生物生态学及其杆状病毒病流行的一般规律，建立了斜纹夜蛾杆状病毒流行病的微分方程模拟模型，模拟系统由１８个微分方程组成，可以模拟易感的和染病的１～６龄幼虫、蛹、成虫，卵的种群动态．模拟模型包含４个分室，即易感种群过程，染病种群过程，病毒在作物上的积累过程，易感种群和染病种群的相互转化过程．系统中纳入了作物生长对病毒数量的稀释效应，以及病毒数量的自然衰减作用．模型参数须由试验测定得到．

骆驼蓬种子提取物对斜纹夜蛾的生物活性效应

用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、苯、石油醚等7种溶剂对骆驼蓬种子进行冷浸提取,提取率分别为23.91%,18.68%,17.80%,18.49%,14.31%,15.13%,17.96%。7种提取物中,以种子乙醇提取物(ESPH)对斜纹夜蛾3龄幼虫的非选择性拒食活性最高,24h拒食率为70.15%。采用酸水总生物碱提取法对ESPH进行初步分离,得到氯仿、正丁醇、水及总生物碱萃取物。生物测定结果表明,总生物碱萃取物对斜纹夜蛾幼虫的生长发育抑制作用最为强烈,其次为氯仿萃取物。

SINPV对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值

斜纹夜蛾核型多角体病毒（ＳＩＮＰＶ）对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值因温度和虫龄而异，虫龄愈大，温度愈高，则侵染阈值也愈大．在２０～４０℃内，３龄幼虫的侵染阈值为９０９０．９～６６６６６６．７ＰＩＢｓ／头，５龄幼虫为１３１５７８．９～７１４２８５．７ＰＩＢｓ／头．随温度升高，各龄幼虫的侵染阈值差异逐渐减少，接种量为２×１０６ＰＩＢｓ／头左右及高于２×１０７ＰＩＢｓ／头时，ＳＩＮＰＶ自身似有一定的协生作用和拮抗作用．作为病原体侵染阈值、致病性及寄主抗病性的指标，侵染阈值优于ＬＤ５０和ＬＣ５０，为解决病原体密度阈值的获取提供了一定的基础．

斜纹夜蛾幼虫存活过程的神经网络模型的建立

利用BP神经网络对斜纹夜蛾幼虫的存活过程进行建模分析,给出了BP神经网络建模的Matlab算法程序。结果表明,BP神经网络能充分逼近斜纹夜蛾幼虫的存活过程曲线,使用BP神经网络可对斜纹夜蛾幼虫的存活过程进行有效的建模。利用所建立的模型,得到了关于斜纹夜蛾幼虫存活过程的模拟预测结果。不同温度下斜纹夜蛾幼虫种群的死亡过程有所不同。在20,24,36和40℃温度下,斜纹夜蛾幼虫种群的死亡高峰分别出现在卵孵化后20d左右,5～20d,5～10d及3～6d。最后,对神经网络建模的特点,以及影响BP神经网络建模效果的主要因素进行了分析讨论。

骆驼蓬总生物碱对斜纹夜蛾的拒食活性及生理效应

采用酸水总生物碱提取法对骆驼蓬种子乙醇提取物进行初步分离,得到粗品总生物碱。将总生物碱进行柱层析,分离获得16种馏分,4号和8号可析出结晶。生物测定结果表明,以4、12和14号3个馏分的杀虫活性最高,3个馏分1000μg/mL对斜纹夜蛾4龄幼虫24h的拒食率分别为96.04%、92.07%、100.00%;48h的拒食率分别为98.82%、96.05%、98.08%。3种高活性馏分500μg/mL对斜纹夜蛾4龄幼虫的作用机理研究表明,12号和14号馏分能显著减少血淋巴蛋白质含量,药物处理的试虫体内总糖含量明显下降。

氟雷拉纳与4种杀虫剂对斜纹夜蛾的室内毒力及其联合作用

为明确氟雷拉纳对斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius的毒力及其与毒死蜱、茚虫威、溴氰菊酯、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(简称:甲维盐)复配后的联合作用,筛选出最佳配比,从而为其混剂研发提供科学依据。笔者采用室内人工饲料混毒法,测定了氟雷拉纳与毒死蜱、茚虫威、溴氰菊酯、甲维盐单剂及其混剂对斜纹夜蛾三龄幼虫的毒力,并通过共毒系数法评价复配药剂的联合作用。单剂结果表明:氟雷拉纳、溴氰菊酯和甲维盐对斜纹夜蛾具有高毒力,药后48 h的LC50值分别为0.48、0.65、0.38 mg/kg;毒死蜱和茚虫威对斜纹夜蛾的毒力中等,药后的LC50值分别为8.71、3.08 mg/kg。混配结果表明:氟雷拉纳与毒死蜱混配具有良好的增效作用,且配比为3:2时,共毒系数最高为164.2;与茚虫威混配时,具有相加作用;而与溴氰菊酯或甲维盐混配时,却均表现为拮抗作用。总之,本研究为氟雷拉纳的增效混剂研发提供了科学依据;而因其与溴氰菊酯或甲维盐混配存在拮抗作用,应避免用于混剂研发。

斜纹夜蛾人工半合成饲料营养成份初步分析

使用人工半合成饲料饲养斜纹夜蛾(Spodoptera Litura),经过不断改良(蒲蛰龙等,1982;庞义等,1986),目前所采用的配方(庞义等,1986)饲养幼虫,其存活率、化蛹率及成虫羽化率等指标与天然饲料蓖麻叶饲养的幼虫相近,其饲养效果和成本,明显优于同类人工半合成饲料(蒲天胜、黄连江,1980;卢文华等,1986;Moore,I.and Navon,A.,1964;Okada,M.,1977)。试验表明,其适用于饲养斜纹夜蛾核型多角体病毒杀虫剂使用(庞义等,1986)。

斜纹夜蛾性信息素的合成及其田间诱捕效果

以1,9-壬二醇为起始原料,经溴代、Wittig及Diels-Alder等反应合成了斜纹夜蛾性信息素主要组分——(Z,E)-9,11-十四碳二烯-1-醇乙酸酯(6),纯度99.2%,其结构经1H NMR,13C NMR和MS确证。田间试验结果表明,该方法合成的6,与市场上同类产品相比,对斜纹夜蛾雄虫具有明显诱捕效果。