家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白提取方法的优化研究

分别用SDS法、煮沸法、碱溶法和Brosson法，提取家蚕微孢子虫孢壁蛋白，并对孢壁蛋白及处理后的孢子形态进行比较研究。结果表明，不同方法处理后的孢子形态均保持完整，SDS处理后孢子为短杆状且明显变得粗壮．煮沸处理后孢子变小呈梭形，其他方法处理的孢子均有膨胀现象。SDS—PAGE检测显示，SDS法提取的孢壁蛋白出现3条明显的主带，煮沸法提取的孢壁蛋白出现5条明显的主带，0．1mol／L KOH提取的孢壁蛋白出现2条主带；而Brosson法提取的孢壁蛋白呈现出20～30条带，体现了家蚕微孢子虫孢壁蛋白组成的复杂性，并适合于孢壁蛋白质组学的研究。

粉纹夜蛾培养细胞对家蚕微孢子虫的吞噬及与孢壁蛋白的关系

解明家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)入侵宿主细胞的相关因素,有助于深入研究Nb对家蚕的侵染机制。利用激光共聚焦显微镜观察Nb孢子接种粉纹夜蛾(Trichoplusiani,Tn)培养细胞48h后孢子的分布状态和培养细胞的生长情况,并对接种Nb孢子后的Tn培养细胞培养物总蛋白进行SDS-PAGE分析,证实经0.2mol/LKOH预处理的Nb孢子可以被Tn培养细胞所吞噬。对Nb孢子孢壁蛋白的SDS-PAGE分析显示,Nb孢子经KOH预处理后,大小为80kD和12kD的孢壁蛋白带缺失或明显减弱,30kD的孢壁蛋白带丰度降低。推测KOH预处理使Nb孢子部分孢壁蛋白被分解(部分或完全)或使蛋白结构发生变化,由此影响了Nb孢子与Tn培养细胞的相互作用关系,有利于Tn培养细胞对Nb孢子的吞噬。