Sprague-Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞的动员、分离培养及鉴定

目的：探讨Sprague—Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）的动员、分离培养及鉴定方法，分析其表面标记和多向分化潜能，为运动创伤中的细胞治疗和组织工程产品培育提供新来源的、可以微创获得和自体细胞移植的种子细胞。方法：联合动员大鼠外周血MSC．采集腹主动脉外周血4ml。使用淋巴细胞分离液结合密度梯度离心方法分离外周血单核细胞，体外培养至第3代。于显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代MSC，鉴定其表型并向成骨、成脂和成软骨诱导分化．以证明其干细胞的特性。结果：经淋巴分离液结合密度梯度离心方法分离培养的外周血单核细胞．3～5天可见少量长梭形细胞贴壁，7-9天见细胞成簇生长，并形成克隆集落。第3代细胞形态较均一．生长增殖良好；表达典型的MSC标记CD44和CD90，不表达造血干细胞标记CD34和CD45。成骨诱导21天后，茜素红和ALP染色阳性，有矿化结节形成。成脂诱导21天后，油红0染色阳性．细胞内有脂滴形成。细胞微团无血清成软骨诱导21天后。甲苯胺蓝染色阳性，细胞外有蛋白多糖分泌：免疫组织化学染色示，特异性软骨基质II型胶原表达阳性。结论：采用联合药物动员方法能促进干细胞向外周血释放，分离培养的外周血干细胞经鉴定为MSC，体外具备三系分化潜能，有望成为运动创伤中新的细胞治疗和组织工程产品培育的种子细胞来源。

成年Sprague-Dawley大鼠的睡眠结构和呼吸暂停分析

目的 :了解成年Sprague -Dawley大鼠生理状态下的睡眠结构以及清醒 /睡眠状态下的呼吸暂停情况。方法 :对每只SD大鼠进行 6h的睡眠呼吸监测。大鼠的皮质脑电、颈部肌电以及通过微压传感器记录到的呼吸信号经过多导生理仪放大 ,以波形形式在计算机上同步显示并储存。使用人机交互的方法进行脑电分期和呼吸暂停的判断。SAS软件分析数据。结果 :2 6只成年雄性SD大鼠的非快动眼睡眠期 (NREM)和快动眼睡眠期 (REM)分别占总睡眠时间的 (83 3± 7 1) %和 (16 2± 7 1) %。全部监测大鼠在睡眠中出现呼吸暂停 ,平均睡眠呼吸暂停指数 (AI)为 (11 5± 4 6 )次 /h。其中REM期的呼吸暂停最频繁。且叹息后呼吸暂停主要发生于NREM期 ,而自发呼吸暂停主要发生于REM期。结论 :成年SD大鼠具有与人类相似的睡眠结构 ,睡眠中发生的中枢性呼吸暂停现象及其表现特点也与人类SAS患者相似 ,可以作为研究睡眠呼吸暂停中枢发病机制的天然动物模型。

Sprague-Dawley大鼠胃肠道微生物区系的研究

为了揭示Sprague-Dawley大鼠胃肠道微生物群落组成情况,探究大鼠胃肠道不同区域的菌群差异,该研究采用16S rRNA基因序列技术,对Sprague-Dawley大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠的肠腔内容物进行基因组测序和微生物组成分析。结果表明:Sprague-Dawley大鼠不同胃肠道区域的细菌群落组成不同;大肠样本的物种丰富度和多样性高于小肠样本;厚壁菌门是各肠道段的优势菌门,乳酸杆菌属是各肠道段的优势菌属;与小肠相比,大鼠大肠微生物菌群更稳定、多样。研究结果揭示了Sprague-Dawley大鼠的胃肠道微生物群落组成信息,为其作为动物模型的相关研究提供了理论依据。

基质细胞衍生因子-1/CXC族细胞因子受体4轴在缺氧预处理骨髓间充质干细胞移植促进Sprague-Dawley大鼠急性心肌梗死心脏功能恢复中的作用

目的观察缺氧预处理的同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植入受体后,基质细胞衍生因子(SDF)-1/CXC族细胞因子受体(CXCR)4轴在促进Sprague-Dawley(SD)大鼠急性心肌梗死(AMI)心脏功能恢复中的作用。方法对SD大鼠的MSCs进行体外培养、鉴定,并行缺氧预处理。128只SD大鼠被随机分入MSCs移植组(MSCs组)、缺氧预处理MSCs移植组(预处理MSCs组)、AMI组、假手术组,每组32只。MSCs组、预处理MSCs组和AMI组大鼠均予冠状动脉左前降支结扎造成AMI 10min后,预处理MSCs组大鼠在梗死区域、梗死区边缘局部共注射5×105/\mL经缺氧预处理的MSCs,MSCs组大鼠注射5×105/\mL MSCs,AMI组大鼠注射相同容量的0.9%氯化钠溶液。假手术组大鼠仅行开胸处理。造模前和造模后28d采用超声心动图测量左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期内径(LVDs)、左心室射血分数(LVEF)3项反映心脏功能的指标。分别于造模后1、7、14和28d每组各处死8只大鼠取其心脏组织行免疫组织化学、常规病理染色,计算心肌梗死面积百分比、梗死区心室壁厚度和心室肌内微血管密度(MVD)。采用实时定量PCR和免疫激光共聚焦定性、定量测定各组心肌组织内SDF-1和CXCR4的表达。结果造模后28d时超声心动图检测结果显示,预处理MSCs组、MSCs组、AMI组的LVDd和LVDs均显著长于假手术组(P值均<0.05),LVEF均显著低于假手术组(P值均<0.05);预处理MSCs组、MSCs组的LVDd和LVDs均显著短于AMI组(P值均<0.05),LVEF均显著高于AMI组(P值均<0.05);预处理MSCs组的LVDd和LVDs均显著短于MSCs组(P值均<0.05),LVEF均显著高于MSCs组(P<0.05)。造模后28d,预处理MSCs组、MSCs组的心肌梗死面积百分比均显著小于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组显著小于MSCs组(P<0.05);预处理MSCs组、MSCs组左心室前壁厚度均显著厚于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组显著厚于MSCs组(P<0.05)。造模后28d,预处理MSCs组、MSCs组、AMI组心肌梗死区的MVD定量和AMI组梗死边缘区的MVD定量均显著低于假手术组(P值均<0.05),预处理MSCs组、MSCs组梗死边缘区的MVD定量均显著高于假手术组(P值均<0.05),预处理MSCs组、MSCs组心肌梗死区和梗死边缘区的MVD定量均显著高于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组心肌梗死区和梗死边缘区的MVD定量均显著高于MSCs组(P值均<0.05)。造模后1、7、14和28d,预处理MSCs组、MSCs组和AMI组的SDF-1和CXCR4蛋白荧光强度均显著高于假手术组(P值均<0.05),预处理MSCs组、MSCs组均显著高于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组均显著高于MSCs组(P值均<0.05)。结论SD大鼠AMI区局部注射缺氧预处理的MSCs或MSCs后可使SDF-1和CRCR4在受损组织局部表达上调,同时心功能得到改善。SDF-1/CRCR4轴在心肌梗死区局部表达上调可能是缺氧预处理MSCs或MSCs移植后改善心脏功能的重要途径之一。

Sprague－Dawley和Wistar两品系大鼠操作行为的比较研究

目的探讨Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ和Ｗｉｓｔａｒ两品系大鼠的操作行为是否存在差异。方法对ＳＤ和Ｗｉｓｔａｒ两种近交系大鼠进行了操作行为测定。在十只电脑控制的操作行为测定箱中，采用正性强化物，分别进行了高频度差别强化率（ＤＲＨ）和低频度差别强化率（ＤＲＬ）两个不同程序六种组合（ＤＲＨ２／１、ＤＲＨ４／２、ＤＲＨ８／４和ＤＲＬ１／８、ＤＲＬ１／１６、ＤＲＬ１／３２）的测定。并对程序ＤＲＨ８／４和ＤＲＬ１／３２分别进行了连续６个夜晚的获得性学习测定。结果Ｗｉｓｔａｒ鼠在较复杂的低频度差别强化率中的成绩比ＳＤ鼠好，其明暗分辨学习成绩亦高于ＳＤ鼠。在获得性学习中Ｗｉｓｔａｒ鼠在每个程序的第一个夜晚就取得较好成绩，并始终保持在较高水平。本研究还发现ＳＤ鼠的操作行为学习存在较大的个体差异。结论该两品系大鼠对操作行为的学习存在差异，Ｗｉｓｔａｒ大鼠比ＳＤ大鼠的学习能力强。本研究结果还表明操作行为测定能显示个体差异。

一种改良的Sprague Dawley新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法

目的改良SpragueDawley(SD)新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法。方法取新生1~2d的SD,分2d完成视网膜Müller细胞的提取,第1天将眼球浸泡于含体积分数1%双抗的无血清高糖达尔伯克改良伊戈尔培养基(DMEM)中,置于37℃、含体积分数5%CO2的培养箱内过夜;第2天,去培养基,以2.5g·L^-1胰蛋白酶消化眼球1h,分离视网膜组织,加入含体积分数1%双抗和体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,制备细胞悬液接种培养;24h后换液,6~8d后传代,传至第4代,细胞免疫荧光染色法鉴定Müller细胞纯度。结果Müller细胞贴壁生长良好,细胞体宽大,细胞质丰富,细胞核呈圆形或椭圆形,无神经元共生长,Müller细胞纯度>95%。结论改良的SD新生大鼠视网膜Müller细胞培养方法操作简单,细胞纯度高。

Sprague-Dawley大鼠自发性乳腺癌分子分型的动物实验研究

目的探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠患有自发性乳腺癌的分子分型情况。方法选取20只无特定病原体级雌性4周SD大鼠。通过分析全部大鼠乳腺癌分子分型,找到自发性乳腺肿瘤相关分子分型特点。结果 Luminal A型(55.00%)乳腺癌大鼠显著高于Basal-like型、Luminal B型和Her-2过表达型(P均<0.05),其余三组差异无统计学意义(P均>0.05)。结论临床上除常规生化指标及影像学诊断以外,配合ER、Cerb B-2及PR检测对早期鉴别大鼠乳腺癌有积极意义。

CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型肝小叶内卵圆细胞总体积与轮廓数密度变化的体视学分析

目的 定量研究CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝小叶内卵圆细胞(HOC)总体积和轮廓数密度的变化。方法 将11只雄性健康SD大鼠随机分为对照组(n=5)、肝纤维化组(n=6),每周2次皮下注射CCl4与橄榄油混悬液,每次3 mL/kg。在肝纤维化造模5周后取材,从每只大鼠肝脏随机抽选5个大小约1 mm3的肝组织块分别制作1张Epon812环氧树脂包埋超薄切片,运用体视学方法结合透射电子显微镜技术,对大鼠肝小叶内的HOC总体积和轮廓数密度进行定量研究,另从每只大鼠剩余肝脏等距随机抽选4个2 mm厚的肝组织块并分别制作2张石蜡包埋的Masson染色切片,按照肝纤维化Metavir分期标准定性评估每只大鼠的肝纤维化程度。计量资料两组间比较采用成组t检验。结果 体视学定量研究显示,对照组肝小叶内HOC总体积为(15.40±7.63) mm3,肝纤维化组肝小叶内HOC总体积为(146.80±114.00) mm3,与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝小叶内HOC总体积显著增加了8.53倍(t=-2.551,P=0.031);对照组肝小叶内HOC轮廓数密度为(56.20±40.40),肝纤维化组肝小叶内HOC轮廓数密度为(566.50±317.00),与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝小叶内轮廓数密度显著增加了9.08倍(t=-3.539,P=0.006);定性观察研究结果显示,肝纤维化大鼠肝纤维化分期按照Metavir评分标准达到Ⅱ~Ⅲ期,大鼠窦周隙内肝星状细胞增生部位周围伴随着HOC的大量增生。结论 CCl4诱导肝纤维化大鼠肝小叶内HOC显著增生。

蒲公英提取物对脑出血大鼠的治疗作用及机制研究

目的研究蒲公英提取物对自发性脑出血(ICH)大鼠的治疗作用及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。方法通过脑定位注射Ⅳ型胶原酶诱导建立48只ICH大鼠模型,随机分为模型组、蒲公英提取物组、Nrf2抑制剂(ML385)组和蒲公英提取物+ML385组,每组12只,另选12只大鼠作为假手术组。以药物分组处理后,进行大鼠神经功能损伤评分;检测大鼠血脑屏障功能、海马神经元细胞凋亡率、血清环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及脑组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧、丙二醛水平和Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、伊文思蓝渗出量、海马神经元细胞凋亡率、血清COX-2、IL-6、iNOS水平、脑组织活性氧、丙二醛水平显著升高(P<0.05),CAT、GSH-Px、Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与蒲公英提取物组比较,蒲公英提取物+ML385组大鼠神经功能评分[(2.54±0.23)分vs(1.43±0.19)分]、伊文思蓝渗出量[(22.15±3.61)ng/mg vs(6.54±1.24)ng/mg]、海马神经元细胞凋亡率[(31.97±5.26)%vs(3.51±0.94)%]、血清COX-2[(5.82±1.16)ng/ml vs(1.34±0.42)ng/ml]、IL-6[(1.47±0.31)ng/ml vs(0.43±0.14)ng/ml]、iNOS[(59.91±10.36)U/ml vs(13.94±3.78)U/ml]、脑组织活性氧[(4.70±0.45)U/kg vs(1.70±0.51)U/kg]、丙二醛水平[(3.72±0.52)nmol/mg vs(1.17±0.34)nmol/mg]显著升高(P<0.05),CAT[(2.54±0.59)U/mg vs(5.68±1.04)U/mg]、GSH-Px[(8.01±0.86)U/mg vs(16.97±3.03)U/mg]、Nrf2(0.67±0.13 vs 1.07±0.19)、HO-1(0.55±0.07 vs 0.86±0.10)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论蒲公英提取物可通过激活Nrf2/HO-1信号通路增强ICH大鼠抗氧化活性,阻止炎症和氧化应激反应进展,抑制海马神经元细胞凋亡,修复血脑屏障功能,改善大鼠神经功能。

苦参碱对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探究苦参碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠神经炎症的影响。方法将75只SD大鼠随机分为模型组、苦参碱低剂量组(10 mg/kg)、苦参碱高剂量组(20 mg/kg)、苦参碱高剂量+晚期糖基化终末产物(AGE)血清蛋白组(20 mg/kg苦参碱+100 mg/kg AGE血清蛋白)和假手术组,每组15只。采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞模型。用Longa评分评估大鼠神经功能缺损;氯化三苯四氮唑染色检测脑梗死情况;苏木精-伊红染色观察海马组织病理变化;酶联免疫吸附测定海马组织白细胞介素(IL)1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。Western blot检测海马组织HMGB1、RAGE蛋白表达。结果苦参碱高剂量组Longa评分、脑梗死面积、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1和RAGE蛋白表达明显低于模型组和苦参碱低剂量组(P<0.05)。苦参碱高剂量+AGE血清蛋白组Longa评分、脑梗死面积、IL-1β、IL-6、TNF-α、RAGE蛋白表达明显高于苦参碱高剂量组[(2.93±0.30)分vs(1.10±0.12)分,(38.18±4.04)%vs(15.52±1.74)%,(78.57±8.33)pg/ml vs(39.27±4.76)pg/ml,(203.14±24.39)pg/ml vs(92.45±11.23)pg/ml,(243.53±26.81)pg/ml vs(150.49±18.79)pg/ml,0.73±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.05]。结论苦参碱可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路减轻IS大鼠的神经炎症。

探究电针廉泉穴对脑卒中后吞咽困难大鼠神经功能缺损的影响

目的探讨电针廉泉穴对脑卒中后吞咽困难(PSD)大鼠神经功能缺损的影响及潜在对瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)信号通路的调节机制作用。方法选用SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为正常组12只(仅浅插栓线,未导致脑内动脉闭塞),余48只制作PSD模型,将造模成功的36只大鼠随机分为模型组、治疗组和治疗+咖啡酸组,每组12只。记录大鼠吞咽潜伏期和吞咽次数,生物信号采集器检测舌下神经放电、舌肌阈强度和收缩幅度,酶联免疫吸附测定血清P物质含量,甲苯胺蓝染色检测舌下神经核尼氏体数目,免疫组织化学检测舌下神经核TRPV1、五羟色胺(5-HT)、磷酸化p38、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠吞咽潜伏期、吞咽次数、舌下神经放电积分面积、舌肌收缩幅度、血清P物质含量、舌下神经核尼氏体数目、TRPV1及5-HT蛋白表达水平下降,舌肌阈强度和舌下神经核磷酸化p38、nNOS蛋白表达水平增加(P<0.05);与模型组比较,治疗组大鼠舌肌单收缩幅度、舌肌强直收缩幅度、血清P物质含量、舌下神经核尼氏体数目、TRPV1及5-HT蛋白表达水平增加[2.36±0.26 vs 1.77±0.22、3.46±0.36 vs 2.15±0.18、(3.92±0.38)ng/ml vs(1.69±0.17)ng/ml、(33.60±3.65)个vs(24.60±2.34)个、(19.85±2.11)%vs(9.79±1.07)%、(22.43±2.34)%vs(10.85±1.13)%,P<0.05]。结论电针廉泉穴可能通过激活TRPV1信号通路改善PSD大鼠神经功能缺损。

萝卜硫素调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节器1/过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α信号通路对妊娠高血压大鼠妊娠结局的影响

目的 探究萝卜硫素(SFN)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节器1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)信号通路对妊娠期高血压疾病(HDP)大鼠妊娠结局的影响。方法 2021年3月至2022年6月,70只雌性大鼠受孕后分为对照组、HDP组、SFN-L组(SFN 5 mg/kg)、SFN-M(SFN 15 mg/kg)、SFN-H(SFN 30 mg/kg)、硫酸镁组(硫酸镁注射液100 mg/kg)、Compound C组(SFN 30 mg/kg+AMPK抑制剂Compound C 0.25 mg/kg),各组10只。在妊娠第13天起除对照组,其余各组妊娠大鼠尾静脉注射7 mg/kg L-NAME,连续注射4 d,建立HDP大鼠模型,对照组大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。从造模成功后第1天(妊娠第17天)起,各给药组注射相应剂量的药物,对照组、HDP组注射0.9%氯化钠溶液,连续给药至妊娠第20天。检测妊娠第17天和第20天各组大鼠尾动脉压和24 h尿蛋白定量水平;试剂盒法检测大鼠血肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;观察检测大鼠妊娠结局指标;HE染色观察胎盘组织和肾脏组织病理情况;蛋白质印迹法检测胎盘组织可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFLT-1)、胎盘生长因子(PLGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOs)、磷酸化eNOs(peNOs)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK、SIRT1、PGC-1ɑ蛋白水平。结果 HDP组大鼠血压[(152.52±4.79)mmHg比(101.63±4.15)mmHg]、24 h尿蛋白定量水平[(679.38±64.32)mg/L比(123.17±20.19)mg/L]、胎鼠病死率[(28.57±2.08)%比(0.96±0.11)%]、血清SCr和BUN水平、胎盘组织sFLT-1表达水平高于对照组(P<0.05),而胎鼠质量[(2.32±0.19)g比(4.75±0.43)g]、产仔数[(11.70±0.69)个比(7.10±0.57)个]、胎盘质量[(0.32±0.06)g比(0.58±0.12)g]、胎盘组织PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1ɑ蛋白表达低于对照组(P<0.05),另外,HDP大鼠胎盘组织绒毛数量减少,胎盘结构缩小,部分绒毛显示纤维蛋白样坏死,肾脏组织内肾小球数目减少,结构异常;SFN-L组、SFN-M组、SFN-H组和硫酸镁组大鼠血压[(136.91±5.16)mmHg、(129.25±4.54)mmHg、(117.33±4.19)mmHg、(121.72±4.61)mmHg比(152.52±4.79)mmHg]、24 h尿蛋白定量水平[(595.91±53.05)mg/L、(532.23±49.76)mg/L、(461.16±35.15)mg/L、(482.74±39.58)mg/L比(679.38±64.32)mg/L]、胎鼠病死率、血清SCr和BUN水平、胎盘组织sFLT-1表达水平低于HDP组(P<0.05),胎鼠质量、产仔数、胎盘质量、胎盘组织PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1ɑ蛋白表达高于HDP组(P<0.05),胎盘组织和肾脏组织结构异常程度减轻;AMPK抑制剂Compound C减弱了SFN对HDP大鼠血压、肾损伤和妊娠结局的保护作用。结论 SFN通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路改善HDP大鼠妊娠结局。

Anle138b对oAβ_(1-42)诱导大鼠海马神经元线粒体功能损伤的影响

目的探究Anle138b对慢性β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元线粒体功能损伤的影响。方法取出生24 h以内的SD乳鼠,原代培养海马神经元,待细胞成熟将其分为对照组(不进行任何处理)、oAβ_(1-42)组(100 nmol/L oAβ_(1-42)处理7 d)、oAβ_(1-42)+Anle138b组(100 nmol/L oAβ_(1-42)+100 nmol/L Anle138b共处理7 d)、Anle138b组(100 nmol/L Anle138b处理7 d)。各组处理结束后,应用流式细胞术检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)阳性细胞的变化。结果析因设计的方差分析显示,oAβ_(1-42)和Anle138b的主效应明显(F_(oAβ1-42)=14.149、38.209,F_(Anle138b)=1.942、24.871,P<0.01),oAβ_(1-42)和Anle138b之间有交互性作用(F_(交互)=18.425、21.904,P<0.01)。单独效应分析显示,用oAβ_(1-42)处理时,Anle138b的处理效应明显(F=16.483、19.148,P<0.01);不用Anle138b处理时,oAβ_(1-42)的处理效应明显(F=14.149、38.209,P<0.01)。结论Anle138b可以减轻oAβ_(1-42)引起的海马神经元氧化应激和线粒体损伤,抑制oAβ_(1-42)对海马神经元的损伤。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨大黄煎剂对轻微型肝性脑病大鼠脑组织炎症损伤的保护机制

目的 探讨大黄煎剂保留灌肠对轻微型肝性脑病(MHE)大鼠模型脑组织炎症损伤的改善作用及可能机制。方法 60只SD雄性大鼠按完全随机方法分为空白组(CON组,n=6)和慢性肝硬化造模组(n=54)。12周后慢性肝硬化造模成功并经Morris水迷宫测试确认符合MHE模型大鼠40只,采用完全随机方法分为模型组(MOD组,n=8)、乳果糖组(LT组,n=8)、大黄煎剂低剂量组(RD1组,n=8)、大黄煎剂中剂量组(RD2组,n=8)和大黄煎剂高剂量组(RD3组,n=8)。其中CON组和MOD组大鼠用生理盐水保留灌肠,2 mL/只,1次/d;LT组大鼠用乳果糖按22.5%剂量保留灌肠,2 mL/只,1次/d;RD1组、RD2组、RD3组大鼠分别用大黄煎剂按2.5、5.0、7.5 g/kg三种剂量保留灌肠,2 mL/只,1次/d。所有大鼠治疗10 d后,进行Morris水迷宫测试,分析大鼠的空间学习记忆能力。分析大鼠行为学状态;检测大鼠血清ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α和血氨水平;观察大鼠肝组织和脑组织病理学变化;检测大鼠脑组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA和蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与MOD组比较,RD1组、RD2组和RD3组大鼠逃避潜伏期时间显著缩短(P值均<0.01),ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α和血氨水平明显降低(P值均<0.05),肝细胞、脑细胞变性、坏死和炎症程度减轻,脑组织PI3K、AKT、mTOR的mRNA和蛋白表达水平均降低(P值均<0.05),且RD3组治疗效果优于RD1组和RD2组。结论 大黄煎剂保留灌肠能够改善MHE大鼠认知功能及脑组织炎症损伤,其作用机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

肾虚血瘀型SD大鼠膝骨关节炎模型的建立与验证

背景:肾虚血瘀证候作为膝骨关节炎常见中医证候,又是膝骨关节炎的基本病机,二者之间有着重要联系。但肾虚血瘀证候如何促进膝关节软骨损伤及其潜在机制并不明确,还需进一步研究。目的:探讨肾虚血瘀证候对SD大鼠膝骨关节炎进程的影响。方法:将16只SD大鼠随机分为模型观察组和对照组,每组8只。模型观察组采用卵巢摘除方法建立肾虚模型,2个月后采用改良HULTH手术进行膝骨关节炎造模,HULTH手术后1周皮下注射盐酸肾上腺素进行血瘀造模;对照组给予卵巢摘除假手术,改良HULTH手术,皮下注射生理盐水。HULTH手术后第5周,检测血液流变学、凝血四项、三碘甲状腺原氨酸、四碘甲状腺原氨酸及雌二醇水平;同时,拍摄膝关节X射线片,进行膝关节苏木精-伊红染色、番红-固绿染色和免疫组化染色。结果与结论:①与对照组相比,模型观察组全血黏度低切、中切、高切和血浆黏度显著升高,凝血四项中纤维蛋白原水平显著升高,凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间显著下降;三碘甲状腺原氨酸、四碘甲状腺原氨酸及雌二醇水平均显著下降;②影像学结果显示模型观察组大鼠膝关节间隙狭窄程度更严重且表面欠光滑,出现高密度影;③苏木精-伊红染色和番红-固绿染色表明,模型观察组大鼠软骨损伤更严重,并且OARSI评分和Mankin评分明显高于对照组;④免疫组化染色结果显示,相较于对照组,模型观察组大鼠软骨外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖蛋白表达显著下降,炎症因子基质金属蛋白酶13、解聚蛋白样金属蛋白酶5蛋白表达显著升高。结果表明,该研究成功建立了SD大鼠肾虚血瘀型膝骨关节炎模型;肾虚血瘀证候通过促进炎症因子表达进一步加重软骨外基质裂解和软骨退变,促进大鼠膝骨关节炎进程。

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。结果与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。结论松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

微RNA-181a-5p介导Sirt1/PPARγ信号通路促进肾病综合征大鼠细胞凋亡的机制研究

目的旨在探究微RNA(miR)-181a-5p对肾病综合征大鼠细胞凋亡的调控机制。方法该研究起止年限为2021年1月至2022年12月。使用阿霉素(ADR)构建肾病综合征大鼠模型及体外肾病综合征损伤模型,转染miR-181a-5p inhibitor/NC至体外细胞模型。使用生化分析仪分析血清肌酐、血尿素氮、血清白蛋白和尿蛋白,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRTPCR)检测肾组织及大鼠肾足细胞miR-181a-5p表达水平,通过TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_72/)预测miR-181a-5p的下游靶基因,双萤光素酶报告实验来验证miR-181a-5p与沉默信息调节因子1(Sirt1)靶向结合关系。使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,通过蛋白质印迹法检测Sirt1及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白水平。结果肾病综合征大鼠miR-181a-5p相对表达水平为3.50±0.30,敲低miR-181a-5p,使得Sirt1蛋白表达水平从0.36±0.02上调至0.87±0.06,PPARγ蛋白表达水平从0.26±0.02上调至0.78±0.05。结论miR-181a-5p通过抑制Sirt1/PPARγ信号通路活性促进肾足细胞凋亡。

Anti-hypercholesterolemic effect of kenaf(Hibiscus cannabinus L.)seed on high-fat diet Sprague dawley rats

Objective:To determine? the anlihypercholesterolemic effects of kenaf seed samples and compare with the commercial hypocholesterolemic drug on serum lipids profiles and malondialdehyde(MDA) level in the rat.Methods:Kenaf seed oil(KSO),microencapsulated kenaf seed oil(MKSO),kenaf seed extract(KSE) and defatted kenaf seed meal(DKSM) were prepared and phytocHemicals screening on these samples were done prior in viro study.Phenolic compounds in KSF.were quantified using high performance liquid chromatography.There were 40(divided in eight diet groups of 5) male Sprague dawley rats adapted lo normal standard diet or hypercholesterolemic diet(HD) with or without the treatment of these kenaf samples for 32 days.Results:All the kenaf samples exhibited to contain most of the major phytocliemicals.KSE possessed gallic acid,tannic acid,catechin.benzaldehyde.benzoic acid,syringic acid,sinapic acid,ferulic acid,naringin acid,and protocatechuic acid.The significant higher(P<0.05) serum total cholesterol,low density lipoprotein cholesterol and MDA levels in HD group without treatment than the normal control group suggested the hypercholesterolemia was induced by the Incorporation of cholesterol into diet.KSE exhibited higher cholesterol-lowering properties due to the significant lower(P<0.05)in serum triglycerides,total cholesterol and MDA levels.KSF showed the highest efficiency of cholesterol-lowering activity,followed by KSO.MKSO and DKSM.Conclusions:DKSM.MKSO.KSO and KSE appeared lo have comparable anti-hypercholesterolemic effect with the commercial hypocholesterolemic drug.Hence,kenaf seed could be used as an alternative natural source lo replace the synthetic hypocholosterolemic drugs.

Mer受体酪氨酸激酶与SD大鼠糖尿病周围神经病变的相关性

背景:糖尿病周围神经病变的发病机制目前尚未明确,TAM(Tyro3、Axl和MerTK)受体酪氨酸激酶具有控制中枢神经系统凋亡细胞和抑制炎症反应的作用。目的:探讨2型糖尿病及其周围神经病变SD大鼠血浆及坐骨神经组织Mer受体酪氨酸激酶水平的差异,研究Mer受体酪氨酸激酶与糖尿病周围神经病变的关联性。方法:40只雄性SD大鼠随机分为对照组15只、2型糖尿病组10只及2型糖尿病周围神经病变组15只。对照组大鼠喂普通饲料,实验组大鼠行高脂高糖饮食6周,并腹腔内注射单剂量小剂量链脲佐菌素35 mg/kg,14 d尾静脉取血检测血糖≥16.7 mmol/L为2型糖尿病造模成功。周围神经病变组大鼠动物继续高糖、高脂喂养8周。麻醉后活体分离检测大鼠坐骨神经传导速度,腹主动脉取血,取坐骨神经组织。光镜下观察各组神经纤维组织学改变,确认糖尿病周围神经病变造模成功。ELISA检测大鼠外周血血糖、血脂及血清MerTK水平,苏木精-伊红染色观察坐骨神经组织学改变;免疫荧光、免疫组化及免疫蛋白印迹检测坐骨神经组织中MerTK的表达。结果与结论:①实验成功构建SD大鼠2型糖尿病及2型糖尿病周围神经病变大鼠模型,糖尿病周围神经病变成模率80%;与对照组比较,2型糖尿病及糖尿病周围神经病变组大鼠血糖水平显著升高(P<0.0001),糖尿病周围神经病变组高于2型糖尿病组;坐骨神经传导速度明显下降(P<0.05),糖尿病周围神经病变组低于2型糖尿病组。②组织学检查:与对照组相比,2型糖尿病组大鼠坐骨神经核减少,有部分空泡变性,出现吞噬细胞;糖尿病周围神经病变组胞体肿胀,核间距增大,出现空泡变性,髓鞘周围出现隔断、不平滑,轴索变为网格状。③血清中MerTK水平:糖尿病周围神经病变组显著高于对照组(P<0.05)。④坐骨神经组织中MerTK的表达:与对照组比较,糖尿病周围神经病变组中明显上调(P<0.05)。⑤结论:糖尿病周围神经病变大鼠血浆及坐骨神经组织中Mer受体酪氨酸激酶水平升高,推测与其抗炎及免疫调节作用有关。

载ADSCs的GelMA水凝胶对糖尿病大鼠伤口愈合的作用

目的探究载脂肪间充质干细胞(ADSCs)的甲基丙烯酸酰化明胶(GelMA)水凝胶支架对糖尿病大鼠皮肤创伤愈合的影响。方法将ADSCs接种在GelMA支架表面。用链脲佐菌素构建糖尿病大鼠模型,在大鼠背部建立直径为2 cm的圆形全层皮肤缺损,将大鼠分为对照组(未行治疗)、支架组(单独应用支架治疗)及支架细胞组(应用载ADSCs支架治疗)。观察各组大鼠背部伤口愈合情况,采用苏木精-伊红染色对伤口皮肤组织进行组织学观察,采用免疫组织化学染色检测转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果与对照组及支架组相比,支架细胞组在术后第14、21天创面愈合率更高,在术后第14天TGF-β1表达更强,在术后第21天毛细血管破裂出血减少。结论载ADSCs的GelMA水凝胶支架具有促进糖尿病大鼠伤口愈合的作用,TGF-β1可能在其中起重要作用。