色素上皮源性因子、内质网氨基肽酶1和Sprouty1在银屑病皮损组织中的表达及相关性研究

目的研究银屑病皮损组织中色素上皮源性因子(PEDF)、表皮内质网氨基肽酶1(ERAP1)和Sprouty1的表达情况及相关性。方法收集河北省儿童医院皮肤科病理室2019年1月—2020年12月诊断的120例银屑病患者皮损组织蜡块标本进行研究,并纳入病例组;另外选取该院实验室保存的120例健康体检者的皮肤组织蜡块标本作为对照,纳入健康对照组。对比两组PEDF、ERAP1和Sprouty1的表达差异,单因素分析银屑病患者不同病情严重程度的PEDF、ERAP1和Sprouty1表达差异,分析PEDF、ERAP1和Sprouty1与银屑病患者皮损严重程度的相关性。结果①与健康对照组相比,病例组的PEDF、ERAP1 mRNA和蛋白均呈高表达,Sprouty1 mRNA和蛋白均呈低表达(P<0.05);②重度银屑病患者皮损的PEDF、ERAP1表达明显高于轻中度患者,Sprouty1表达明显低于轻中度患者(P<0.05);③PEDF、ERAP1的表达均与银屑病皮损面积严重度指数(PASI)评分呈正相关,Sprouty1的表达与PASI评分呈负相关。结论银屑病患者皮损组织中PEDF、ERAP1和Sprouty1的表达与正常组织存在明显差异,PEDF、ERAP1和Sprouty1的表达均与银屑病皮损组织严重程度存在密切关系。在银屑病患者治疗以及诊断中可将PEDF、ERAP1和Sprouty1作为新的研究方向进行深入探索。

寻常型银屑病皮损组织中chemerin、Sprouty1的表达与病情严重程度的相关性分析

目的分析寻常型银屑病皮损组织中chemerin和Sprouty1蛋白表达与病情严重程度的相关性。方法选取2018年2月-2020年11月在无锡市第五人民医院和江南大学附属医院皮肤性病科门诊接受治疗的68例寻常型银屑病患者作为实验组,以同期在两家医院皮肤性病科门诊体检的68名健康者作为对照组。采集寻常型银屑病患者躯干或四肢的皮损组织及健康者的正常皮肤组织,采用免疫组化及Western blotting检测皮肤组织中chemerin、Sprouty1蛋白相对表达量,RT-PCR检测皮肤组织中chemerin、Sprouty1 mRNA相对表达量,采用Pearson相关分析法分析chemerin、Sprouty1蛋白相对表达量与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)的相关性。结果免疫组化检测结果显示,两组皮肤组织中均有chemerin、Sprouty1蛋白的表达。Chemerin蛋白在实验组皮损脂肪组织中呈高表达,在对照组皮下脂肪组织中少量表达;Sprouty1蛋白在实验组皮损颗粒层细胞膜中少量表达,在对照组表皮全层细胞的细胞膜和细胞质中呈高表达。实验组chemerin mRNA(1.478±0.14 vs. 0.858±0.08,P<0.001)和蛋白(1.138±0.12 vs. 0.789±0.06,P<0.001)相对表达量明显高于对照组,Sprouty1 mRNA(0.837±0.04 vs. 1.346±0.09,P<0.001)和蛋白(0.646±0.05 vs. 1.212±0.12,P<0.001)相对表达量明显低于对照组。Pearson相关分析显示,chemerin蛋白相对表达量与PASI评分呈正相关(r=0.536,P<0.05),Sprouty1蛋白相对表达量与PASI评分呈负相关(r=-0.619,P<0.05)。结论寻常型银屑病皮损组织中chemerin及Sprouty1蛋白相对表达量与PASI评分存在相关性。

强化阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者PCI围术期CD4＋T淋巴细胞Sprouty1表达的影响

目的探讨强化剂量他托伐他汀对不稳定心绞痛患者PCI围术期CD4＋T淋巴细胞Sprouty1表达的影响。方法入选广西医科大学第一附属医院住院不稳定型心绞痛患者52例，随机（随机数字法）分为强化他汀组（术前80mg/d，术后40mg／d，n=26）和常规他汀组（术前术后均20mg／d，n=26）。分别于PCI术前、术后16-24h抽取新鲜外周血，免疫磁珠法分选出CD4＋T淋巴细胞，荧光定量PCR检测Sprouty1mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测Sprouty1蛋白表达，酶联免疫法检测IL-2炎症因子的表达。结果①与PCI术前强化组相比，PCI术后强化组Sprouty1mRNA、Sprouty1蛋白表达明显升高（P〈0．05）。②与术前常规组相比，术后常规组Sprouty1mRNA稍升高，但差异无统计学意义（P〉0．05）③与PCI术前强化组相比，术后强化组IL-2浓度降低（P〈0．05）；而与术前常规组相比，术后常规组IL-2浓度稍升高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论强化剂量的阿托伐他汀可以通过上调CD4＋T淋巴细胞Sprouty1的表达，从而减少PCI术后心肌的炎症反应。

舒筋接骨汤调控微小RNA-30a-5p/Sprouty1基因对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

目的 探讨舒筋接骨汤对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖和成骨分化能力的影响及其可能作用机制.方法 培养hMSCs,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度舒筋接骨汤生药和下调Sprouty1对细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测hMSCs中微小RNA?30a?5p(miR?30a?5p)表达水平,RT?qPCR和免疫印迹法检测不同分组细胞中Sprouty1及核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR?30a?5p靶向调控Sprouty1的作用.结果 舒筋接骨汤呈浓度依赖性促进hMSCs增殖,1 mg/ml时促进细胞增殖效果最佳;与对照组比较,舒筋接骨汤处理可明显促进hMSCs中miR30a?5p及RUNX2、OSX mRNA和蛋白表达(P<0.05),抑制Sprouty1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果显示miR?30a?5p靶向负调控Sprouty1的表达;下调Sprouty1促进hMSCs增殖及细胞中OSX、RUNX2 mRNA和蛋白表达.结论 舒筋接骨汤可能通过调控miR?30a?5p/Sprouty1基因表达,促进hMSCs增殖和成骨分化.

槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌细胞凋亡的影响研究

目的探讨槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌(HCC)细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法利用梯度浓度槐耳颗粒处理HCC细胞,分析槐耳颗粒对索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭的效果。采用生物信息学手段分析微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与sprouty相关EVH1域蛋白1(SPRED1)的可能互作关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HCC细胞中miR-31-5p、SPRED1的表达;采用CCK-8、克隆形成、划痕愈合、Transwell以及流式细胞术实验分别检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡;采用RNA免疫沉淀(RIP)实验和双荧光素酶实验验证miR-31-5p与SPRED1的结合关系。结果槐耳颗粒可以显著抑制索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。生物信息学分析发现miR-31-5p在HCC中高表达,而槐耳颗粒可以下调miR-31-5p的表达,抑制索拉非尼耐药的HCC细胞的增殖和转移,并诱导细胞凋亡;miR-31-5p可靶向抑制SPRED1的表达。SPRED1在HCC中表达下调,过表达SPRED1可以逆转miR-31-5p过表达对索拉非尼耐药的HCC增殖和转移的促进作用。结论槐耳颗粒通过miR-31-5p/SPRED1轴抑制索拉非尼耐药的HCC转移,表明槐耳颗粒有潜力作为治疗HCC的新型药物。

远隔缺血预适应通过上调miR⁃21⁃5p减轻脑缺血模型大鼠细胞凋亡

目的:研究远隔缺血预适应(RIPC)对脑缺血模型大鼠的保护作用及分子机制。方法:18只成年雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(MCAO/R)组、RIPC+MCAO/R组;术前利用间断夹闭双侧股动脉的方法给予大鼠RIPC处理,利用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大鼠缺血性脑卒中模型,利用转棒实验检测大鼠运动功能,利用TUNEL染色检测缺血区细胞凋亡,利用real time RT⁃PCR检测大脑缺血区皮质中miR⁃21⁃5p及SPRY1和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)mRNA的表达。结果:与MCAO/R组大鼠相比,RIPC处理组大鼠运动功能有所改善,皮质细胞凋亡减少。miR⁃21⁃5p表达增加,而SPRY1和PDCD4 mRNA表达下调(P<0.05)。结论:RIPC处理对减轻缺血性脑卒中大鼠miR⁃21⁃5p表达上调,后者通过抑制靶分子SPRY1和PDCD4的表达抑制细胞凋亡。

宫颈鳞癌组织中P21活化的激酶1和Sprouty相关EVH1域蛋白1表达观察

目的观察宫颈鳞癌组织中P21活化的激酶1(PAK1)、Sprouty相关EVH1域蛋白1(Spred1)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测40例健康者、24例宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)患者、31例宫颈上皮内瘤变Ⅱ～Ⅲ级(CINⅡ～Ⅲ)患者、59例宫鳞癌患者的宫颈组织PAK1、Spred1,分析PAK1、Spred1表达与宫颈鳞癌患者临床病理参数的关系。结果 CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈鳞癌、正常宫颈组织PAK1的阳性表达率分别为29. 17%(7/24)、58. 06%(18/31)、81. 36%(48/59)、17. 50%(7/40),与正常宫颈、CINⅠ组织比较,CINⅡ～Ⅲ、宫颈鳞癌组织PAK1的阳性表达率升高(P均<0. 05),与CINⅡ～Ⅲ组织比较,宫颈鳞癌组织PAK1的阳性表达率升高(P <0. 05)。CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈鳞癌、正常宫颈组织Spred1的阳性表达率分别为70. 08%(17/24)、32. 26%(10/31)、13. 55%(8/59)、90. 00%(36/40),随宫颈病变程度加重,宫颈组织Spred1的阳性表达率降低(P均<0. 05)。PAK1蛋白表达与宫颈鳞癌患者病理分级、有无淋巴转移有关(P均<0. 05)。Spred1蛋白表达与宫颈鳞癌患者病理分级有关(P <0. 05)。不同病变程度宫颈组织PAK1与Spred1表达呈负相关(r=-0. 440,P=0. 000)。结论与正常宫颈组织相比,宫颈上皮内瘤变宫、颈鳞癌组织中PAK1表达升高、Spred1表达降低;随宫颈病变程度加重,宫颈组织PAK1表达升高、Spred1表达降低。PAK1与Spred1呈负调控作用,在宫颈鳞癌的发生、发展中发挥重要作用。

芪黄健脾滋肾颗粒对肾小球系膜细胞过度增殖的改善作用

目的:探讨芪黄健脾滋肾颗粒改善肾小球系膜细胞增殖的作用及其可能机制。方法:以体外培养的HBZY-1肾小球系膜细胞为模型,模型组采用TGF-β1刺激模拟肾小球系膜细胞过度增殖,血清组在模型组基础上加入芪黄健脾滋肾颗粒含药血清;采用CCK-8法检测肾小球系膜细胞的增殖活力;运用RT-PCR技术检测LncRNA GAS5、miR-21-5p、Sprouty1 mRNA、ERK1/2 mRNA的表达;采用Western blot法检测Sprouty1、p-ERK1/2、ERK1/2蛋白表达;结果:含药血清在10%浓度下对模型组的异常细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01);与正常组比较,模型组的ERK1、ERK2 mRNA和磷酸化蛋白及miR-21-5p表达水平均显著升高(P<0.01),GAS5和Sprouty1mRNA的表达则显著降低(P<0.01);与模型组比较,血清组可显著降低ERK1、ERK2 mRNA和磷酸化蛋白及miR-21-5p的表达(P<0.01),以及显著增加GAS5和Sprouty1 mRNA的表达(P<0.01)。结论:芪黄健脾滋肾颗粒可通过上调GAS5的表达,结合mi R-21、增加Sprouty1的表达,降低下游ERK1/2的表达,从而改善肾小球系膜细胞增殖。