鱿鱼墨和乌贼墨部分成分及微量元素含量比较

目的:比较鱿鱼墨和乌贼墨中微量元素含量。方法:原子吸收法测定金属元素,原子荧光法测定Hg,银盐法测定As。结果:鱿鱼墨和乌贼墨中常量元素以钙含量最高,分别达到0.34％和1.07％。微量元素中以铁、锶和铜含量较为丰富。乌贼墨中有毒微量元素铅、镉和砷的浓度分别比鱿鱼墨高121％、127％和319％,但汞的含量相近。鱿鱼墨的无机物含量仅为乌贼墨的1/3左右,但有机物含量比乌贼墨高。结论:除铁和锌外,其它微量元素在乌贼墨中的浓度均比鱿鱼墨高。两种墨在成分上明显差异除和两种动物生物学差异有关外.可能和生活海域中海水的微量元素组成有关。

乌贼墨及其提取物的免疫刺激作用

本文从免疫学角度对乌贼墨及其提取物的抗肿瘤作用机制做了进一步探讨。结果显示．乌贼墨及其提取物可提高肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和白细胞介素１（ＩＬＬ－１）的分泌水平．可增加ＮＫ细胞的杀伤活性。提示乌贼墨及其提取物可通过刺激机体免疫功能而起到抗肿瘤作用。

鱿鱼墨多糖改善小鼠肠粘膜免疫及作用机制的研究

目的探讨鱿鱼墨多糖对小鼠肠粘膜免疫的影响及其作用机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为5组:正常组、模型组、低、中、高鱿鱼墨多糖剂量组。采用环磷酰胺腹腔注射法制备免疫低下小鼠模型,并通过灌胃给予各剂量组小鼠鱿鱼墨多糖饲养28 d。检测胸腺指数/脾指数,取小鼠空肠段检测肠粘膜SIgA的含量,观察北太平洋鱿鱼墨多糖对肠道粘膜免疫的保护作用。采用酶联免疫反应和RT-PCR方法,检测了pIgR的蛋白质与mRNA表达量。结果与正常组相比,模型组小鼠胸腺指数、脾指数分别下降44.4%、19.4%,肠道SIgA的表达量下降40.9%,免疫组织化学染色也显示肠道IgA明显下降;与模型组相比,鱿鱼墨多糖可以改善免疫低下小鼠的机体免疫功能,并且呈剂量依赖性,胸腺指数在模型组水平上分别升高了53.5%、67.6%、61.8%,脾指数分别升高了12.7%、13.1%、15.6%。鱿鱼墨多糖还可以提高小鼠肠粘膜SIgA的分泌功能,相比于模型组小鼠,鱿鱼墨多糖组小鼠SIgA的分泌量分别升高了43.9%、63.6%、68.7%;免疫组织化学染色发现鱿鱼墨多糖组小鼠肠道固有层中IgA明显增加,且ELISA检测发现鱿鱼墨多糖高剂量组小鼠小肠pIgR的蛋白表达量明显增加。结论北太平洋鱿鱼墨多糖能够促进小鼠肠粘膜SIgA的分泌,并呈剂量依赖关系,作用机制可能与其促进浆细胞分泌IgA以及促进上皮细胞分泌pIgR有关。

乌贼墨多糖对冷藏鱿鱼的防腐保鲜作用研究

使用从乌贼墨中提取的活性多糖对低温储藏的鱿鱼进行处理,通过测定细菌总数、挥发性盐基氮(TVB-N)值、pH值,并作感官评定来探讨其防腐作用。结果表明:乌贼墨多糖对冷冻鱿鱼有较好的防腐抗菌作用,多糖的最佳作用pH值为7.00,最佳使用质量浓度为7mg/mL;完全浸泡保藏的效果较浸泡20min后沥干的要好;在防腐抗菌效果上乌贼墨多糖的作用低于同质量浓度的山梨酸钾和壳聚糖,综合来看,7mg/mL的乌贼墨多糖和1mg/mL的山梨酸钾、3mg/mL的壳聚糖效果相当。

鱿鱼墨多糖的硫酸酯化及抗凝血活性

采用三氧化硫吡啶-二甲亚砜体系对北太平洋鱿鱼墨多糖(SIP)及其三乙胺盐进行硫酸酯化.对硫酸酯化后多糖的基本成分分析表明,硫酸酯化对鱿鱼墨多糖的单糖组成影响不大,但是分子量降低,硫酸酯化后,糖单元数:硫酸基的摩尔比约为3:2.采用红外光谱和一维核磁技术对硫酸酯化后多糖的结构进行了分析,结果表明,硫酸酯化主要发生在N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)的4,6位上.进一步的凝血活性分析表明,它具有较好的延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)的效果.凝血因子抑制实验则表明,硫酸酯化后的鱿鱼墨多糖(TBA-1)对凝血因子FⅡa和FⅩa均有显著的抑制作用.

超声波对鱿鱼墨黑色素成分和物理结构的影响

为了提高鱿鱼综合利用价值,以加工废弃物中的鱿鱼墨黑色素为原料,研究超声波处理对黑色素成分和物理结构的影响。采用超声功率15 W/mL、超声时间2 s、间歇时间1 s、总工作时间20 min的工作条件对黑色素进行处理。结果表明:鱿鱼墨黑色素在超声波处理后,波长为224 nm和267 nm附近的两个峰吸光值显著增加,黑色素在环己烷中的溶解性显著增加,样品中没有新的具有紫外可见吸收特性物质生成;黑色素中蛋白质在超声波处理后的没有发生显著变化,而脂质含量显著减少;超声波后Ca、Mg、Na、K、Fe、Cu、Cd和Pb等8种金属元素含量均显著降低;电镜图片显示黑色素微球颗粒在超声过程中发生了爆炸,产生更为细小的碎片和碎末。

超声降解法制备可溶性鱿鱼墨黑色素及其抗氧化性

实验研究了一种在碱性条件下利用超声降解制备可溶性鱿鱼墨黑色素的新方法。将鱿鱼墨黑色素溶于NaOH后用超声细胞破碎仪处理1 h,超滤后分别获得不同分子量可溶性黑色素组分。结果显示,超声处理后黑色素平均粒度从17.34μm下降至1.467μm,紫外、红外光谱和核磁共振谱图从结构上说明超声作用主要破坏黑色素的高度聚合状态,而黑色素的主要化学结构并没有被破坏,只有少部分基团,尤其是较低分子量组分中的DHI和DHICA结构被氧化;体外抗氧化实验显示经过0.5 mol/L和1 mol/L的NaOH处理,分子量大于10 ku的组分具有很强的抗氧化性,这些组分清除超氧自由基能力(IC50=19～80μg/mL)远优于作为商品抗氧化剂的肌肽(IC50=355μg/mL);清除羟基自由基活性(IC50=115～180μg/mL)与肌肽(IC50=110μg/mL)相当。可溶性鱿鱼墨黑色素作为一种天然色素和新型自由基清除剂,其良好的可溶性大大提高了机体的吸收利用率。

鱿鱼墨黏多糖对小鼠免疫调节作用的研究

采用免疫学评价方法,研究了鱿鱼墨黏多糖对小鼠免疫功能的调节作用。Balb/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和鱿鱼墨黏多糖低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余皮下注射氢化可的松造成免疫低下模型后灌胃。鱿鱼墨黏多糖组小鼠分别灌胃不同剂量的鱿鱼墨黏多糖溶液(分别为25,50和100 mg/kg),阳性对照组灌胃盐酸左旋咪唑(20 mg/kg),进行免疫指标的测定。实验结果表明,鱿鱼墨黏多糖能显著提高免疫低下小鼠的脾脏/体重比值(P<0.05,P<0.01)、提高血清溶血素含量(P<0.05)、增强迟发型变态反应能力(P<0.05,P<0.01)、提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力(P<0.05,P<0.01)和碳廓清能力(P<0.05,P<0.01)。提示鱿鱼墨黏多糖能提高免疫低下小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。

乌贼墨汁多糖的提取及抗氧化作用研究

研究乌贼墨汁多糖的提取工艺和抗氧化能力。采用单因素试验和正交试验对乌贼墨汁多糖提取条件进行优化,同时通过乌贼墨汁多糖对清除DPPH自由基、.OH和Fe3+还原能力的测定考察多糖的抗氧化能力。结果表明,最佳提取条件为加酶量4.5%、料水比1:15(g/mL)、温度50℃、时间4h、pH8,此条件下乌贼墨汁多糖的得率为3.63%。乌贼墨汁多糖具有一定的抗氧化能力,且在一定范围内,墨汁多糖的抗氧化能力与质量浓度呈线性正相关关系,其中对DPPH自由基和.OH的半数清除质量浓度分别为3.61mg/mL和8.06mg/mL。

鱿鱼墨黑色素酶解法提取工艺优化及其紫外、红外光谱特征分析

以鱿鱼墨水解度为指标,分别测定木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶对鱿鱼墨水解效果,选用水解能力最强的胃蛋白酶为试验用酶,测定酶解反应pH值、反应时间、反应温度和加酶量对鱿鱼墨水解度的影响。在单因素试验基础上进行L9(34)正交试验优化得到胃蛋白酶水解鱿鱼墨的最佳酶解条件为酶解反应pH1.5、酶解温度37℃、酶解反应时间5h、加酶量1.5%。在最优酶解反应条件下,胃蛋白酶水解鱿鱼墨的水解度大于13.50%。紫外-可见光谱分析显示酶解法制备的鱿鱼墨黑色素在220nm处有特征吸收波长,红外光谱中的3384.54cm-1和1617.35cm-1处出现吲哚环结构归属的强吸收峰。

乌贼墨多糖对环磷酰胺致小鼠卵巢损伤的保护作用

研究乌贼墨多糖对注射环磷酰胺所致小鼠卵巢功能损伤的保护作用。本研究用雌性昆明小鼠作为模型动物,以乌贼墨多糖作为卵巢保护剂进行灌胃,腹腔注射环磷酰胺造模,检测实验小鼠的体重、卵巢指数、血清中性激素水平以及卵巢的抗氧化指标,对卵巢进行组织病理学检测并统计各级生长卵泡数量。结果显示,乌贼墨多糖能够明显缓解环磷酰胺对卵巢的毒性损伤,降低血清中FSH水平(p<0.05)和LH水平(p<0.01),升高血清中E2水平(p<0.01),提高卵巢组织中SOD活力(p<0.05)、GSH-Px活力(p<0.01)以及GSH含量(p<0.01),降低卵巢中MDA含量(p<0.01),显著增加原始卵泡数、初级卵泡数、成熟卵泡数以及卵泡总数(p<0.01)。由此表明,乌贼墨多糖可明显抑制环磷酰胺造成的卵巢损伤,保护并修复卵巢的组织结构,为其开发成临床化疗的辅助药物提供理论依据。

乌贼墨多糖的制备及对睾丸化疗性损伤的保护作用

乌贼墨多糖(Squid ink polysaccharides,SIP)是近年来发现的一种新型海洋生物活性多糖,在动物模型实验中发现具有抗氧化及化疗保护作用。本文主要通过乌贼墨作为原料,经酶法提取及Sephdex G-100色谱分离纯化得到一种含3%硫酸根的多糖,经高效液相及光谱分析显示,多糖纯度均一,分子量约为37ku。以SIP为细胞保护剂,环磷酰胺(Cyclophosphamide,CP)为化疗药物,昆明小白鼠为模型动物来分析SIP对动物化疗损伤的保护效果。结果表明:SIP能缓解CP导致小鼠体重(p<0.01)、睾丸重量(p<0.01)、睾丸指数(p<0.05)的降低,显著提高LDH活力(p<0.05)及降低γ-GT活力(p<0.01)。结论:SIP对CP导致睾丸的损伤保护效果显著。

鱿鱼墨黑色素提取物对肿瘤细胞的抑制作用

为探索鱿鱼墨黑色素提取物(SIME)对体外培养的肿瘤细胞的抑制效应,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法和划痕试验比较SIME对人结肠癌细胞HCT-116、宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞Hep G2、乳腺癌细胞MCF-7和前列腺癌细胞PC-3增殖及细胞迁移能力的影响。结果表明,SIME对肿瘤细胞形态有不同程度的影响,对肿瘤细胞增殖有浓度依赖性抑制作用,并具有抑制肿瘤细胞非定向迁移的作用。SIME对HCT-116和PC-3细胞增殖的抑制作用较好,72 h时两者半数抑制浓度IC50分别为0.144mg·m L^(-1)和0.485 mg·m L^(-1)。由此可见,SIME具有较强的抗肿瘤活性,该研究结果为鱿鱼墨高值化利用提供了一定的理论依据。

从鱿鱼墨中精制黑色素

介绍了以鱿鱼墨为原料从中提取、精制黑色素的工艺。具体路线为：原料鱿鱼墨经水洗、酸洗、浓酸水解去除绝大多数杂质后，添加二甲亚砜（ＤＭＳＯ）使黑色素完全溶解，然后，加入丙酮改变溶液极性，减小黑色素的溶解度，从而使黑色素再次析出，经三次重结晶，以达到精制目的。在此基础上，测定了鱿鱼墨黑色素的一些物理和化学性质，精制所得黑色素呈黑褐色，不溶于水及通常的有机溶剂，但可溶于碱、浓硫酸、二甲亚砜等。紫外－可见光谱和红外光谱初步表明鱿鱼墨黑色素是以吸哚结构为主体的异聚物。

乌贼墨对小鼠脾细胞和巨噬细胞NO生成及IFN-γ分泌水平的影响

目的:探讨乌贼墨对脾细胞和巨噬细胞NO生成及IFN-γ分泌的影响。方法:用Griess法和ELISA法分别检测了经乌贼墨灌胃处理后小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞培养上清中NO和IFN-γ的水平的变化。结果:乌贼墨灌胃处理小鼠后的第4、6天脾细胞及腹腔巨噬细胞(M(?))可产生较高水平的NO;脾细胞可产生较高水平的IFN-γ,并且小鼠脾细胞NO的产生水平与IFN-γ产生水平呈正相关(r=0.98);用LPS和L-NMMA(NO抑制剂)分别同乌贼墨灌胃第6d小鼠的脾细胞一起培养,结果显示LPS可协同IFN-γ促NO水平升高。L-NMMA可抑制小鼠脾细胞的NO生成。结论:乌贼墨可促进巨噬细胞NO生成;脾细胞NO的产生与IFN-γ分泌水平呈正相关。

鱿鱼墨黑色素铁对大鼠缺铁性贫血的治疗作用

目的:探讨鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血(IDA)模型大鼠的治疗作用。方法:采用低铁饲料并辅以尾静脉定期放血法建立IDA模型,灌胃给予不同剂量的鱿鱼墨黑色素铁,分别检测IDA大鼠外周血血红蛋白(Hb)含量、红细胞(RBC)数、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)和血清铁(SI)含量及红细胞内游离原卟啉(FEP)浓度。结果:鱿鱼墨黑色素铁能够显著提高IDA大鼠Hb、RBC、HCT、MCV和SI数量,有效降低FEP浓度,显著促进IDA大鼠贫血症状的恢复。与无机铁剂相比,生物利用度高且不影响大鼠正常生长。结论:鱿鱼墨黑色素对IDA大鼠贫血症状具有显著的治疗作用。

鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血大鼠的影响

为了研究鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血大鼠的影响。采用56只断乳SD大鼠,随即选取8只饲喂正常饲料,另外48只饲喂低铁饲料28 d,造成缺铁性贫血模型后随即分为6组。其中3组分别灌胃不同剂量的鱿鱼墨黑色素铁(分别为6,12,18 mg/kg)21 d,阳性组分别灌胃硫酸亚铁和氯化铁(6 mg/kg),缺铁模型组和对照组分别每天灌胃等体积的去离子水共21 d。测定各组大鼠血液指标、脏器指数、血清铁、肝脏和脾脏的铁含量、抗氧化性能指标、血红细胞生成素、转铁蛋白受体和铁蛋白含量。结果表明,鱿鱼墨黑色素铁各剂量组和阳性组均可提高大鼠血红蛋白含量,提高血清、肝脏和脾脏铁含量、提高血清铁蛋白和促红细胞生成素含量,提高血清和肝脏抗氧化能力,降低血清总铁结合力和转铁蛋白受体含量,改善缺铁性贫血,比FeSO4和FeCl3的效果更佳。因此,鱿鱼墨黑色素铁可作为潜在的有效的补铁剂。

鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血大鼠造血调控因子的影响

目的:探究鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血(IDA)模型大鼠造血调控因子的影响。方法:采用低铁饲料喂养辅以尾静脉定期放血建立IDA模型,用鱿鱼墨黑色素铁灌胃30d,观察其对IDA大鼠外周血红细胞(RBC)数、血红蛋白(Hb)含量、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)和血清促红细胞生成素(EPO)含量的影响;分别制备大鼠肺条件培养液(LCM)、脾条件培养液(SCM)和腹腔巨噬细胞条件培养液(PMΦCM),采用MTT法检测其对正常大鼠骨髓造血细胞增殖的影响;采用单层半固体培养法检测其对粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)和巨核系祖细胞(CFU-Meg)集落形成的影响;采用RT-PCR技术检测IDA大鼠骨髓细胞粒/单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素受体(EPOR)和血小板生成素(TPO)mRNA的表达。结果:鱿鱼墨黑色素铁能提高IDA大鼠RBC、Hb、HCT、MCV值,增加血清EPO含量;经鱿鱼墨黑色素铁体内诱导所制备的LCM、SCM条件培养液可促进正常大鼠骨髓细胞增殖,增加CFU-GM、CFU-E的集落形成;鱿鱼墨黑色素铁上调骨髓细胞GM-CSF和EPOR mRNA的表达。结论:鱿鱼墨黑色素铁可能诱导机体产生GM-CSF、EPO等造血细胞因子,促进粒单系、红系造血细胞的增殖分化。

鱿鱼墨黑色素的提取及其对A549细胞的影响

为了探索鱿鱼墨黑色素提取物(SIME)对体外培养的A549细胞的抑制作用,研究了鱿鱼墨黑色素的提取、分离方法,并研究SIME对A549细胞活力及细胞迁移能力的影响。结果表明,SIME的最优提取条件为:提取温度100℃,料液比1∶30,提取时间1.5 h,碱液浓度1.0 mol/L。在此条件下SIME得率为20.13%。SIME提取物对A549细胞形态有一定影响,对细胞活性及细胞迁移能力均有一定抑制作用,且呈一定的量效关系。研究结果提示:SIME具有较强的抗A549肿瘤细胞的作用。本结果为鱿鱼墨高值化利用提供了理论依据。

酶解法制备的鱿鱼墨黑色素鉴定及理化性质

测定酶解法制备的鱿鱼墨黑色素紫外、红外吸收光谱特征,并研究其溶解性、酸碱稳定性、光稳定性、热稳定性理化性质。结果表明:酶解法制备的鱿鱼墨黑色素在紫外区220 nm有特征吸收,红外光谱最强峰在1 617.36 cm-1处,有典型的黑色素红外吸收特点。鱿鱼黑色素具有碱溶酸沉溶解特性,在pH大于9.0条件下色残率高。在自然光下稳定性高,自然光照120 min的色残率为对照的96%以上(P>0.05),而紫外光照30 min后色残率降至52.1%。低温下加热稳定性高,65℃加热30 min时色残率为对照的95.4%。