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Isolation and functional analysis of SrMYB1,a direct transcriptional repressor of SrUGT76G1 in Stevia rebaudiana 被引量:1
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作者 ZHANG Ting ZHANG Yong-xia +5 位作者 SUN Yu-ming XU Xiao-yang WANG Yin-jie CHONG Xinran YANG Yong-heng YUAN Hai-yan 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2023年第4期1058-1067,共10页
SrUGT76G1,the most well-studied diterpene glycosyltransferase in Stevia rebaudiana,is key to the biosynthesis of economically important steviol glycosides(SGs).However,the molecular regulatory mechanism of SrUGT76G1 h... SrUGT76G1,the most well-studied diterpene glycosyltransferase in Stevia rebaudiana,is key to the biosynthesis of economically important steviol glycosides(SGs).However,the molecular regulatory mechanism of SrUGT76G1 has rarely been explored.In this study,we identified a MYB transcription factor,SrMYB1,using a yeast one-hybrid screening assay.SrMYB1 belongs to the typical R2R3-type MYB protein and is specifically localized in the nucleus with strong transactivation activity.The transcript of SrMYB1 is predominantly accumulated in flowers,but is also present at a lower level in leaves.Yeast one-hybrid and electrophoretic mobility shift assays verified that SrMYB1 binds directly to the MYB binding sites in the F4-3 fragment(+50–(–141))of the SrUGT76G1 promoter.Furthermore,we found that SrMYB1 could significantly repress the expression of SrUGT76G1 in both epidermal cells of tobacco leaves and stevia callus.Taken together,our results demonstrate that SrMYB1 is an essential upstream regulator of SrUGT76G1 and provide novel insight into the regulatory network for the SGs metabolic pathway in S.rebaudiana. 展开更多
关键词 Stevia rebaudiana srugt76g1 MYB transcription factor transcriptional regulation steviol glycosides
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甜菊葡萄糖苷转移酶基因SrUGT76G1启动子的克隆及其功能的瞬时表达分析 被引量:2
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作者 杨永恒 徐晓洋 +6 位作者 孙玉明 原海燕 刘清泉 张永侠 王银杰 黄苏珍 佟海英 《江苏农业科学》 2018年第6期27-33,共7页
甜菊苷(stevioside,St)和莱鲍迪苷A(rebaudioside A,R-A)是甜菊叶片中两大主要糖苷组分,甜菊糖苷生物合成途径的研究表明SrUGT76G1基因在St向R-A转化中起关键作用。为了进一步研究SrUGT76G1基因的表达调控,本试验采用hiTAIL-PCR的方法,... 甜菊苷(stevioside,St)和莱鲍迪苷A(rebaudioside A,R-A)是甜菊叶片中两大主要糖苷组分,甜菊糖苷生物合成途径的研究表明SrUGT76G1基因在St向R-A转化中起关键作用。为了进一步研究SrUGT76G1基因的表达调控,本试验采用hiTAIL-PCR的方法,经过2次步移从甜菊基因组中克隆到SrUGT76G1基因翻译起始位点上游2 283 bp的启动子序列。采用PlantCARE、PLACE等在线工具对序列进行分析,结果显示在这段序列上共有475个顺式调控元件,除了TATA-box、CAAT-box、MYB结合位点等典型的保守元件外,还包括光照、干旱、厌氧等环境因子响应元件,生长素、赤霉素等植物激素响应元件,芽、胚乳等组织特异性表达元件等。为了初步研究SrUGT76G1基因启动子的功能,本试验通过克隆SrUGT76G1转录起始位点上游1 989 bp带酶切位点的序列,将其替换植物表达载体pCAMBIA1301-220中的CaMV35S启动子,连接下游的GUS报告基因,构建重组植物表达载体pCAMBIA1301-220-SrUGT76G1P,以pCAMBIA1301-220载体作对照,通过农杆菌(EHA105)真空渗透法转入拟南芥和甜菊幼苗。瞬时表达结果表明,该SrUGT76G1启动子序列能驱动GUS基因在拟南芥和甜菊叶片中表达,具有启动子活性。 展开更多
关键词 甜菊 srugt76g1启动子 调控元件 植物表达载体 基因瞬时表达
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甜叶菊RA苷合成关键基因SrUGT76G1对水分胁迫响应分析 被引量:1
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作者 张婷 杨永恒 +4 位作者 孙玉明 王银杰 原海燕 张永侠 徐晓洋 《中国糖料》 2021年第1期1-6,共6页
RA苷是甜叶菊叶片中最主要的组分之一,其合成受到水分胁迫的影响。为了探究其调控的分子机制,本研究首先分析了RA苷合成关键基因SrUGT76G1在水分胁迫下的表达模式,并对SrUGT76G1瞬时转化烟草和转基因拟南芥进行干旱处理及GUS染色,多方... RA苷是甜叶菊叶片中最主要的组分之一,其合成受到水分胁迫的影响。为了探究其调控的分子机制,本研究首先分析了RA苷合成关键基因SrUGT76G1在水分胁迫下的表达模式,并对SrUGT76G1瞬时转化烟草和转基因拟南芥进行干旱处理及GUS染色,多方面阐释其对水分胁迫的响应。研究结果表明,一定程度的水分胁迫可以促进SrUGT76G1的表达。此外,对SrUGT76G1的启动子序列进行分析,发现存在多个茉莉酸响应元件及MYB转录因子结合位点。本研究不但为后续深入开展甜叶菊栽培的高效水分利用与管理措施提供理论支持,也为进一步寻找RA苷上游水分胁迫响应调控因子并通过转基因手段提高RA苷含量奠定基础。 展开更多
关键词 甜叶菊 RA苷 基因 srugt76g1启动子 水分胁迫
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同源建模和分子对接揭示甜菊糖苷糖基化关键酶SrUGT76G1的构效关系
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作者 张绍山 杨云舒 +4 位作者 吕承承 陈靳松 庄艺 刘圆 吴卫 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第24期7606-7615,共10页
目的揭示甜菊糖苷糖基化关键酶SrUGT76G1的构效关系。方法采用RT-PCR法克隆各甜叶菊Stevia rebaudiana材料中的SrUGT76G1变异序列;采用原核表达系统—大肠杆菌和体外催化反应验证各变异序列功能;采用Modeller 9.17软件对SrUGT76G1各变... 目的揭示甜菊糖苷糖基化关键酶SrUGT76G1的构效关系。方法采用RT-PCR法克隆各甜叶菊Stevia rebaudiana材料中的SrUGT76G1变异序列;采用原核表达系统—大肠杆菌和体外催化反应验证各变异序列功能;采用Modeller 9.17软件对SrUGT76G1各变异序列蛋白进行同源建模,利用AutoDock Vina工具进行对接分析。结果除变异序列N02序列和N03序列外,还分别从110和B1188材料中获取了2个变异序列110-3序列和B1188序列。各变异序列蛋白体外催化反应和催化效率比较分析结果表明,N02蛋白相较于UGT76G1(N01-1,AY345974.1)活性显著下降,特别是以甜茶苷、甜菊糖苷(stevioside,ST)和莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)为糖基受体底物时,B1188、N03和110-3蛋白对糖苷的糖基化功能已丧失;同源建模和分子对接分析发现由于各变异序列蛋白中氨基酸残基的改变,导致翻译形成的蛋白三维空间结构改变,导致无法完全包裹催化底物。结论SrUGT76G1形成的活性口袋能否较好地包裹糖基受体底物是其活性强弱和有无的关键。 展开更多
关键词 甜叶菊 甜菊糖苷 srugt76g1 同源建模 分子对接
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