HCK SH3结构域与HIV-1 Nef蛋白体外结合活性的检测

目的构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,检测原核表达的SH3蛋白的生物学活性。方法利用PCR方法扩增HCK SH3基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-4T-1/SH3,转化E.coli DH5α,进行双酶切和测序鉴定。筛选阳性质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹检测,同时纯化SH3蛋白。表达并纯化HIV-1 Nef蛋白,利用GST pull-down方法检测SH3蛋白与Nef蛋白的结合活性。结果成功获得重组质粒pGEX-4T-1/SH3,测序正确,高效表达并纯化了SH3蛋白。GST pull-down实验结果显示SH3与HIV-1 Nef蛋白具有良好的结合活性。结论成功地克隆、表达和纯化了GST-SH3蛋白,SH3与Nef蛋白具有体外特异性结合活性,为进一步研究针对Nef与SH3结合的靶向药物的筛选提供了实验基础。

用RT-PCR方法检测颞叶癫痫脑内SH3GL2基因的表达

目的研究难治性颞叶癫痫患者脑组织中的SH3GL2mRNA的表达,从分子水平探讨难治性颞叶癫痫发病的可能机制。方法运用RT-PCR检测SH3GL2mRNA在10例难治性癫痫患者及10例正常对照组脑部的表达。结果利用RT-PCR检测SH3GL2mRNA在难治性癫痫患者脑部表达增强,其电泳条带目的片断值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论中枢神经系统的SH3GL2在难治性癫痫患者脑部表达增强,可能在人类难治性癫痫的发病机制中起到一定作用。