SRC家族激酶抑制剂PP2对大鼠膝骨关节炎的治疗作用

目的观察SRC家族激酶抑制剂PP2对大鼠膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)的治疗作用。方法采用大鼠右膝内侧半月板切除术诱导OA模型,术后1个月关节腔注射5 mg/kg剂量的PP2溶液。每周2次,持续6周。然后取各组右膝关节软骨,进行HE、甲苯胺蓝染色、番红O快绿染色和micro-CT等实验观察其退变程度。qRT-PCR检测ADAMTS5、MMP13、COL2A1和Aggrecan mRNA的表达情况。再通过免疫荧光染色和蛋白免疫印迹实验检测与OA发展相关的指标变化情况。结果HE和番红O快绿染色结果显示PP2能够在一定程度上缓解OA大鼠的软骨退变。qRT-PCR结果显示,PP2能够降低OA造成的ADAMTS5、MMP13 mRNA的异常增高,也在一定程度上改善了COL2A1、Aggrecan mRNA的表达下降。免疫荧光染色和蛋白免疫印迹实验结果显示,关节腔注射PP2溶液能够减少OA造成的MMP13、MMP9、MMP3、COX2和ADAMTS5蛋白的异常增加,同时逆转了Aggrecan和COL2A1蛋白的减少。结论关节腔注射PP2溶液有助于改善大鼠膝OA,使大鼠关节软骨破坏减轻,减少关节软骨的退变。

Src家族激酶在卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用

Src家族激酶是一类非受体酪氨酸激酶。在卵母细胞成熟过程中,Src家族激酶能够促进卵母细胞恢复减数分裂。对海洋无脊椎动物和低等脊椎动物卵子受精过程的研究证明,Src 家族激酶与卵子活化过程中的Ca^(2+)释放有关；而在哺乳动物卵子中,对Src家族激酶的作用尚未形成一致结论。本文结合作者自己的工作,对目前Src家族激酶在减数分裂成熟和受精中的作用进行了总结和展望。

CD45分子对Src家族蛋白酪氨酸激酶活性的调节

CD4 5分子发挥磷酸酶活性使Src家族蛋白酪氨酸激酶的抑制位点磷酸化 ,激酶区内自磷酸化位点去磷酸化 ,而Src家族蛋白酪氨酸激酶的这两个主要的磷酸化位点的磷酸化状态决定了激酶的活性。因此 ,CD4 5分子既可对Src家族蛋白酪氨酸进行正向调节。又可对其进行负向调节 ;在TCR相关信号传递过程中 ,CD4 5分子对Src家族激酶起正向调节作用 ;在整合素介导粘附过程中 ,CD4 5分子对Src家族激酶起负向调节作用。这是因为细胞内的微环境不同 ,CD4 5分子对于Src家族激酶活性的调节功能也就不同 。

Src家族蛋白酪氨酸激酶(SFKs)对血管内皮细胞通透性的调节作用

血管内皮细胞是机体重要的屏障和半透膜.溶质渗出主要经细胞旁途径和穿细胞途径,分别与细胞屏障结构受损和质膜小凹(caveolae)或囊泡的形成与分离有关.Src家族蛋白酪氨酸激酶(SFKs)可使一些屏障结构蛋白(如VE-cadherin、连环蛋白、踝蛋白、纽蛋白)和质膜小凹形成与分离相关的蛋白(如小凹蛋白-1、发动蛋白-2)磷酸化,破坏屏障结构和增加质膜小凹的形成与分离.因此,SFKs对血管内皮细胞通透性具有重要的调节作用.本文就SFKs如何调节血管内皮细胞通透性做一详细介绍.

Src家族激酶及其在心肌肥大信号转导中的作用

Src家族激酶作为一种非受体型蛋白酪氨酸激酶,不仅在细胞分化、运动、增殖和存活过程中发挥关键作用,而且其家族成员之一的Src蛋白还参与多条与心肌肥大有关的信号通路,如整合素介导的信号通路及G蛋白偶联受体介导的信号通路。本文就Src家族激酶及其在心肌肥大信号通路中的作用进行综述。

Src家族酪氨酸蛋白激酶对高糖环境中人LECs凋亡及EMT的影响

背景糖尿病性白内障是糖尿病的主要眼部并发症之一，包括皮质性、核性、囊膜下性及混合型白内障，其表型可能与晶状体上皮细胞（LECs）的不同病理改变有关，而糖尿病囊膜下性白内障是常见的表型之一。研究糖尿病囊膜下性白内障LECs的生物学行为对相关药物的研发和相关疾病的治疗有重要临床意义。目的探讨Src一家族酪氨酸蛋白激酶（SFKs）在高糖诱导的人LECs凋亡及上皮一间质转分化（EMT）中的作用。方法将人LECs系HLE-B3细胞分为正常对照组、高糖组和PPl组，分别在含5．5mmol／L葡萄糖的DMEM、含35．5mmol／L葡萄糖的DMEM及含35．5mmol／L葡萄糖＋10μmol／LSFK特异性抑制剂PPl的DMEM中培养24h。分别于细胞培养后3、6、12和24h采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率；用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化；采用免疫荧光染色检测细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的相对表达量；并用Westernblot法检测p-Src^418（活化的c-Src激酶）及凋亡相关蛋白bcl-xl、survivin、caspase-3，EMT相关蛋白E-cadherin、d-SMA的表达变化。结果高糖组人LECs中p-Src^418的表达增高，并在培养6h时达峰值，正常对照组、高糖组和PPl组人LECs中p-Src^418的相对表达量（相对灰度值）分别为0．042±O．011、0．125±0．036和0．035±0．018，正常对照组和PPl组人LECs中p-Src^418的表达量明显低于高糖组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。细胞培养后6、12和24h，高糖组人LECs凋亡率稍高于正常对照组，但差异均无统计学意义（均P〉0．05），PPl组人LECs凋亡率分别为（6．433±2．084）％、（10．333±2．610）％和（8．033±2．967）％，明显高于高糖组的（3．235±1．320）％、（3．533±1．159）％、（5．753±0．250）％及正常对照组的（3．133±1．170）％、（2．833±O．751）％、（3．333±1．201）％，差异均有统计学意义（均P〈0．05），而高糖组与正常对照组间比较差异均无统计学意义（均P〉O．05）。细胞培养后6h和12h，PPl组细胞中凋亡抑制蛋白bcl-xl、survivin的相对表达量（相对灰度值）明显低于高糖组和正常对照组，而凋亡促进蛋白caspase-3的相对表达量明显高于高糖组和正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。高糖组培养后24h，LECs呈梭形，发生纤维细胞样改变，PPl组纤维样细胞减少。Westernblot法检测和免疫荧光染色均显示，培养后6h高糖组细胞中EMT标志物E-cadherin蛋白的相对表达量低于PPl组和正常对照组，而α-SMA的相对表达量高于PPl组和正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论高糖环境可激活LECs中的c-Src激酶，进而诱导LECs发生EMT，同时LECs的凋亡减少；用PPl抑制c-Src激酶的异常激活有助于维持高糖环境中LECs的上皮特性。

SRC家族蛋白通过自身修饰对基因表达的调节

最早认识SRC家族蛋白是将其作为一组与转录调控有关的蛋白辅助因子,它们发挥作用是通过与其它的核受体超家族成员的相互作用实现的。后来发现,SRC与其它转录因子的转录调控有关系,这些转录因子是不同的信号途径的重要组分,并在细胞过程的信号途径中发挥重要的作用。SRC家族成员能够和肌细胞生成素、MEF-2、转录增强子、NF-κB、AP-1、STAT、p53和E2F1等发生相互作用,这表明SRC共激活因子能参与到多个细胞代谢过程中。近来的研究表明,多种SRC蛋白的自身修饰在决定转录产物和招募特定的SRC共激活因子过程中发挥重要的作用。本文就SRC家族蛋白自身修饰的特点予以综述。

Src家族调控Tau蛋白磷酸化作用及机制研究

目的探讨Tau蛋白酪氨酸磷酸化对其表达的影响及Src家族在其酪氨酸磷酸化中作用及分子机制。方法采用无缝克隆方法构建Src家族(Src、Fyn、Yes、Lck、Blk、Fgr、Lyn和Hck)质粒;Western blot检测HEK-293T和SHSY-5Y细胞共转染hTau(2N4R)-V5和Src家族24h后磷酸化和总Tau蛋白表达;免疫荧光和Western blot检测HEK-293T中hTau(2N4R)酪氨酸磷酸化(Tyrosine,Y)突变质粒hTau蛋白表达;Western blot检测转染hTau的HEK-293T细胞在共转染Fyn或Src质粒后Tau、Fyn和p-Tyr蛋白表达;Western blot检测转染hTau的Fyn KO的SHSY-5Y细胞中Fyn、Tau、Y394、P62和LC3II/I表达;免疫荧光检测PS19和WT小鼠神经元Y383表达;Western blot检测PS19和WT小鼠海马神经元原代细胞中Fyn、Y383、P62和LC3II/I表达。结果Src和Fyn组HEK293T细胞的hTau-V5、Tau5、Tau5A6、Tau46和DakoTau蛋白表达显著高于Con组,差异有统计学意义(t=14.625、15.550、32.269、28.172、38.516,P<0.05);Yes、Lck、Blk、Fgr、Lyn和Hck组无明显变化(P>0.05);与Con组相比,Src家族HEK293T和SHSY-5Y细胞的pT231、pS202、pS396/404、p-S262/356和pT181蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与WT、Y18F、Y29F、Y197F和Y310F组相比,Y394F组V5和DakoTau蛋白显著降低(t=12.762、18.964,P<0.05);共转染Fyn的Y394F组HEK293T细胞的hTau-V5、DakoTau和p-Tyr蛋白表达显著低于共转染Fyn的WT组(t=11.471、10.285、9.344,P<0.05),Fyn-GFP和Fyn蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与共转染Src的WT相比,Y394F和5YF组的hTau-V5、DakoTau、Fyn-GFP和Fyn蛋白表达无统计学意义(P>0.05),p-Tyr蛋白表达明显降低(t=36.261、15.514,P<0.05);转染Fyn-KO的SHSY-5Y细胞中Y394、P62和hTau蛋白表达明显低于Fyn-WT组(t=15.562、39.298、22.374,P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达比例明显高于Fyn-WT组(t=56.261,P<0.05);PS19小鼠海马Y383(人Y394)、Fyn、P62蛋白表达明显升高(t=9.120、18.626、22.194,P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达显著降低(t=45.689,P<0.05)。结论Fyn蛋白调控Tau蛋白Y394位点酪氨酸磷酸化影响Tau蛋白表达,通过下调Fyn可激活自噬抑制Tau蛋白的表达。

BCR-ABL与Src家族激酶相互作用介导CML对抗癌药物伊马替尼耐受的研究进展

BCR/ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(CML)的分子标志,具有高激酶活性,其在疾病发生、发展中扮演了极其重要的角色。伊马替尼(Imatinib)靶向抑制BCR-ABL,为CML慢性期的一线治疗药。BCR/ABL与Src家族激酶(Src-family kinases,SFK)之间也存在相互活化作用,通过激活众多信号通路,导致CML向急变期发展,并导致伊马替尼耐药。对有关BCR/ABL与SFK两者的相互作用机制及其生物学效应的研究进行总结。

Src家族相关激酶（Fgr、Hck、Lyn）/SSeCKS在非酒精性脂肪性肝炎中的作用机制

目的 探讨Src家族相关激酶（Fgr、Hck、Lyn） /SSeCKS在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）中的作用及其可能的机制.方法 体外实验中对枯否细胞用含0.5％ CCl4完全培养液刺激,正常组常规培养,培养2h后用PT-PCR检测SSeCKS和Hck、Fgr、Lyn的mRNA表达水平.体内实验中选用SD雄性大鼠,采用高脂饮食饲养法制备NASH大鼠模型,设模型组、正常组.实验结束后处死各组大鼠,检测肝脏脂肪变及炎症程度,用免疫组织化学法检测SSeCKS和Hck、Fgr、Lyn的蛋白表达水平.计量资料两组均数比较用t检验,多组均数比较用方差分析;变量间相互关系采用Pearson直线相关分析.结果 体外实验结果显示SSeCKS、Lyn、Hck、Fgr的mRNA在枯否细胞中均有表达;体内实验结果提示Lyn、Hck在正常肝组织枯否细胞低表达,炎症刺激时高表达,与炎症程度呈正相关（P＜ 0.01）;SSeCKS则在正常肝组织枯否细胞低表达,炎症刺激时表达减少,与炎症程度呈负相关（P＜ 0.01）;Fgr在正常肝脏组织Kupffer细胞极低表达,炎症刺激后几乎不表达;且Lyn、Hck与SSeCKS的表达呈负相关（P＜ 0.01）,其中与Hck呈中度负相关（r=-0.508,P＜0.01）,与Lyn呈低度负相关（r=-0.398,P＜0.01）,Hck与Lyn的表达呈极高正相关（r=0.942,P＜ 0.01）. 结论 Src家族相关激酶（Lyn、Hck、Fgr）/SSeCKS参与了NASH的发生和发展,且相互间有一定联系,可作为NASH炎症反应的一个潜在调控靶点.

Src家族调节Nav1.1在耳蜗螺旋神经节神经元的表达

目的:研究蛋白酪氨酸激酶Src家族对耳蜗螺旋神经节神经元的电压门控钠离子通道基因和蛋白表达的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot技术分别观察在Src家族抑制剂的作用下,Nav1.1mRNA和蛋白的表达变化情况。结果:Src家族抑制剂PP2(10μmol/L)和SU6656(2μmol/L)作用后,螺旋神经节神经元Nav1.1mRNA的表达量分别减少至26%±0.8%和36%±1.5%(P<0.05),蛋白的表达量分别减少至39%±12.5%和53%±1.7%(P<0.05)。结论:抑制蛋白酪氨酸激酶Src家族可下调Nav1.1mRNA和蛋白在螺旋神经节神经元的表达水平。

辅激活因子SRC/p160家族与炎症相关转录因子的关系

SRC/p160(steroid receptor coactivator/p160)家族作为一类辅激活因子,可以辅助多种转录因子,包括炎症相关转录因子,如核转录因子κB,激活蛋白-1,过氧化物酶体增殖物激活受体-γ,糖皮质类固醇激素受体,进而在转录水平上调节多种基因的表达。SRC/p160家族的作用决定于上游的配体、信号通路和转录因子类型,并在不同的组织细胞中表现出一定的特异性及复杂性。而对SRC/p160家族与炎症相关转录因子关系的研究有利于更深入地了解机体对炎症相关基因转录的精细调节和炎症相关性疾病的可能机制,并为抗炎治疗提供新靶点。

Src激酶家族与紫杉醇耐药相关性的研究进展

Src激酶家族(SFK)在许多恶性肿瘤中均有高表达,对于肿瘤细胞的恶性行为具有广泛的调节作用。紫杉醇是临床上广泛应用的化疗药物,但由于耐药性的出现使其疗效逐渐下降。本文就SFK的结构与调节方式、紫杉醇耐药产生的分子机制以及SFK调节紫杉醇耐药的研究进展进行综述,以期为基于紫杉醇的肿瘤治疗方案提供新的治疗参考依据。

脑缺血时NMDA受体通过Src激酶和Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ调控ERKs激活

目的ERKs是钙依赖性激活蛋白，本研究旨在探讨钙依赖性蛋白激酶是否参与了脑缺血后ERK级联的调控。方法采用四动脉结扎诱导大鼠前脑缺血，用免疫印迹的方法观察几个钙依赖性蛋白激酶含量及活性的变化。结果致死性脑缺血以NMDA受体依赖的方式激活ERKs，并差异性上调Src和Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的活性。Src激酶和CaMKⅡ的抑制剂PP2和KN62能显著的阻止缺血诱导的ERKs激活。然而，缺血诱导的Src过度激活也伴随着ERKs的活性抑制。结论致死性脑缺血刺激NMDA受体通过Src激酶和CaMKⅡ介导ERKs活性上调，但是脑缺血诱导的Src过度激活可能也参与了ERKs信号通路的负性调控。

结直肠癌组织中CD24和Src的表达及其意义

背景与目的本课题组前期研究提示CD24可促进大肠癌细胞的增殖,同时可以激活Raf-ERK通路和p38MAPK激酶。但CD24分子因缺乏跨膜结构而不足以传递细胞信号,而Src家族激酶和MAPK通路关系密切且和肠癌密切相关。因此,本研究拟探讨结直肠癌组织中CD24及SFKs成员之一的Src的表达和相互关系,及其在结直肠癌演进过程中的作用,为进一步的功能鉴定奠定基础。方法对204例结直肠癌组织进行连续切片,应用免疫组化方法检测CD24、Src的表达情况,分析两者表达的相关性及与结直肠癌患者临床病理特征和预后的关系。结果免疫组化染色提示,正常结直肠黏膜组织中CD24、Src均无表达,而在结直肠癌组织中则有不同程度的CD24、Src染色。二者的表达强弱情况均与肿瘤细胞的分化程度、Duke分期、肿瘤浸润程度、淋巴结转移以及远处转移有关(P<0.01),而与患者年龄、性别、肿瘤部位以及肿瘤大小无关(P>0.05)。相关分析统计提示CD24表达与Src表达呈正相关关系(r=0.544,P<0.01)。生存分析提示CD24及Src低表达患者的生存率均要高于高表达患者;COX模型多因素分析显示,CD24和Src表达不是独立的预后因素。结论 CD24和Src的表达与结直肠癌的演进密切相关,二者组织学表达具有相关性,CD24和Src的表达不是结直肠癌的独立预后因素。

酪氨酸家族激酶在大鼠脊髓背角LTP中的作用及其机制

目的:探讨酪氨酸家族激酶(SFKs)在大鼠脊髓背角C纤维诱发电位的长时程增强(LTP)中的作用及其机制。方法:用在体电生理方法检测SFKs抑制剂对高频刺激坐骨神经诱导的脊髓背角LTP的影响;用Western blotting方法检测高频刺激诱导脊髓LTP的不同时点大鼠脊髓背角磷酸化SFKs的表达情况;用免疫荧光双染方法检测高频刺激诱导脊髓LTP后大鼠脊髓背角磷酸化SFKs表达的细胞学定位。结果:SFKs的抑制剂(PP2或SU6656)可以完全阻断LTP的诱导,甚至将LTP逆转为长时程抑制(LTD);高频电刺激大鼠坐骨神经诱导脊髓LTP后15min开始,刺激同侧的脊髓背角中磷酸化SFKs表达明显增加,并且这些高表达的磷酸化SFKs仅仅存在于脊髓小胶质细胞中。结论:在脊髓背角,小胶质细胞中的SFKs是诱导LTP的必要条件,抑制SFKs及其下游分子可能有助于治疗病理性疼痛。

Src信号通路及在心力衰竭病理生理中的作用

心力衰竭是各种心脏结构或功能性疾病导致心室充盈及(或)射血能力受损而引起的一组综合征,为多因素相互作用的共同结果。非受体酪氨酸激酶家族Src蛋白可以通过自身酪氨酸残基磷酸化及构型改变激活,通过磷酸化底物,与其他信号通路如受体酪氨酸通路、PI3K/Akt、ERK/MAPK、FAK、Pyk2、eNOS、NADPH氧化酶、NKA、JAK/STAT3等相互作用,传导调节信号通路,参与调节与心力衰竭有关的包括肾素-血管紧张素-醛固酮系统、心肌细胞凋亡、心肌肥大及氧化应激等多种病理生理机制。

莱菔硫烷对ox-LDL诱导血小板活化的抑制作用

目的:探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导血小板活化的影响及其可能的分子机制。方法:在体外实验中,将健康人纯化血小板与不同浓度的SFN(1.0、2.5、5.0μmol/L)共同孵育40 min,然后用ox-LDL激活血小板20 min,并检测血小板活化的指标,包括CD62P的表达、胞内血小板因子4(platelet factor4,PF4)和趋化因子配体5(chemokine ligand 5,CCL5)的释放水平。机制上,用Western blot蛋白免疫印迹法检测血小板肉瘤酪氨酸激酶(sarcoma tyrosine kinase,Src)及其下游的脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)磷酸化水平;用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒测定胞内总ROS水平。结果:ox-LDL诱导的血小板CD62P的表达以及PF4和CCL5的释放水平均可被SFN显著抑制(P<0.05);SFN显著下调ox-LDL诱导的血小板Src和Syk的磷酸化水平以及胞内总ROS水平(P<0.05)。此外,ox-LDL诱导的血小板CD62P的表达、PF4和CCL5的释放可被Src家族激酶抑制剂PP2所抑制(P<0.05),但PP2与SFN联合使用时,无协同抑制效果(P>0.05);Src家族激酶激活剂MLR-1023可逆转SFN对ox-LDL诱导的血小板活化的抑制作用(P<0.05)。结论:SFN可显著抑制ox-LDL诱导的血小板活化,其机制可能是下调Src/Syk/ROS介导的信号通路。

小胶质细胞SFKs在ATP诱导的脊髓背角LTP中的作用(英文)

目的:研究Src家族激酶(SFKs)在5'-三磷酸腺苷(ATP)诱导的脊髓背角长时程增强(LTP)中的作用。方法:雄性SD大鼠(250-280 g)。在体电生理记录脊髓腰膨大部背角浅层神经元C-纤维诱发电位,West-ern blotting和免疫组织化学观察脊髓背角SFKs的磷酸化水平和表达部位。结果:ATP应用后30 min和60 min,磷酸化的Src-家族激酶(p-SFKs)的水平明显升高;p-SFKs只表达于小胶质细胞中,星型胶质细胞和神经元中没有表达。脊髓表面应用SFKs抑制剂阻断ATP诱导的LTP。结论:小胶质细胞SFKs可能在ATP诱导的脊髓背角C-纤维诱发电位LTP中发挥重要作用。

酪氨酸蛋白激酶与突触可塑性及学习记忆的关系

近年来酪氨酸磷酸化在成年哺乳动物神经系统中的重要作用逐渐受到重视,酪氨酸蛋白激酶在调控与细胞增殖、分化、迁移及代谢相关的信号转导通路中起关键作用。本文主要对三种不同的酪氨酸蛋白激酶信号级联过程,即Trk受体酪氨酸激酶级联,Src家族非受体酪氨酸激酶级联及Eph受体酪氨酸激酶级联,以及它们在成年动物神经元突触可塑性及学习记忆形成过程中的重要作用及可能机制作一综述。