高脂血症大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物表达的变化

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物(SSeCKS)的表达变化,探讨高脂血症对SSeCKS表达的影响。方法高脂饮食组(n=8)和正常饮食组(n=8)SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测血清总胆固醇及甘油三酯;用HE染色观察心脏病理学改变;用免疫组织化学法检测SSeCKS在心脏的表达;用免疫荧光双标法观察SSeCKS在心脏中的细胞定位。结果高脂饮食组总胆固醇和甘油三酯较正常饮食组明显升高(P<0.05);病理学观察发现高脂饮食组形成高脂性心脏病变;免疫组织化学检测发现高脂饮食组中SSeCKS表达主要分布在心内膜、心间质;免疫荧光双标发现SSeCKS与心脏组织内皮细胞和α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞部分共定位。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏SSeCKS表达升高,SSeCKS可能参与了心脏结构重塑及细胞凋亡,从而促进动脉粥样硬化心脏病的发展。

细菌脂多糖对培养星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

目的研究细菌脂多糖(LPS)对培养的大鼠星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)表达的影响。方法培养的星形胶质细胞随机分为空白对照组、LPS单一刺激组、LPS联合PKC抑制剂(RO-31-8220)刺激组。运用荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位。结果Real time RT-PCR显示,LPS可以上调SSeCKS mRNA水平,在作用浓度为100μg/L和1 mg/L时与对照组有显著差异(P<0.01)。Western blotting表明,当LPS作用浓度为100μg/L时,SSeCKS蛋白表达量明显上调;在此浓度作用下,SSeCKS表达于6 h达高峰并广泛磷酸化,至24 h其蛋白表达仍维持于较高水平。免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于胞质,于胞膜略有浓集。在LPS单一刺激组,SSeCKS富集于核周;当LPS联合RO-31-8220共同作用时,SSeCKS的亚细胞定位与正常组无明显差异。结论在体外培养的星形胶质细胞中,LPS可诱导SSeCKS表达,上调其磷酸化水平,影响其细胞内定位。这些改变与PKC的功能相关。提示SSeCKS可能参与星形胶质细胞中炎症信号的转导。

大鼠坐骨神经切断后Src抑制的蛋白激酶C的底物的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在神经中的表达变化及其意义。方法制备成年SD大鼠坐骨神经切断模型。通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经切断后SSeCKS表达的时空变化。结果Western blotting显示,大鼠坐骨神经切断后,近端SSeCKS的表达逐步升高,伤后2d达到高峰,之后逐渐下降。远端SSeCKS表达于12h达到高峰,之后呈下降趋势。免疫组织化学方法结果表明,SSeCKS在神经断端处高表达,成簇状聚集;在远离断端处表达明显降低,分布亦较为均一。免疫荧光双标记结果显示,SSeCKS与S100、NF200及GAP43有部分共定位。结论大鼠坐骨神经切断后,可以引起SSeCKS的表达变化,其可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导,并与损伤后神经的再生及功能修复有关。

大鼠坐骨神经损伤后Src抑制的蛋白激酶C的底物在背根神经节中的表达变化

目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在背根神经节(DRG)中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经夹伤及切断模型。通过Western印迹法、Real-time PCR及免疫组织化学方法检测坐骨神经损伤后SSeCKS在DRG中表达的时空变化。结果:大鼠坐骨神经夹伤后6h,DRG中可检测到SSeCKS的表达并逐步升高,伤后12h达到高峰,2d后逐渐下降;而大鼠坐骨神经切断后DRG中SSeCKS的表达高峰发生在伤后2周,1d时最低;SSeCKS主要分布于DRG大、中、小神经元胞质;SSeCKS与NeuN、NF200以及GAP43存在共定位。结论:大鼠坐骨神经损伤后,引起DRG中SSeCKS的表达变化,其可能参与疼痛信号转导通路并与周围神经损伤后的再生有关。

Src抑制的蛋白激酶C底物在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的表达及其意义

目的研究Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)进程中的表达情况,探讨其在EAE病理过程中可能的功能及意义,为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)和EAE提供新的治疗靶点。方法构建EAE大鼠模型,进行临床打分评估;用HE染色检测EAE大鼠脊髓组织的炎性浸润情况;用western blot检测SSeCKS的表达变化;用免疫组织化学观察SSeCKS在脊髓组织中的分布。结果髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)诱导单相的EAE过程:Lewis大鼠经MBP免疫后7～10d开始有临床症状,13～16d达到发病高峰,之后自发地恢复,至30d左右恢复到病前水平;EAE病程高峰期,大鼠脊髓炎性浸润情况显著;SSeCKS蛋白表达在EAE起始E1期显著增加,E3期达到高峰,之后开始下降,恢复期基本恢复到正常水平。结论本实验成功构建了Lewis大鼠的EAE模型;EAE病理过程中,SSeCKS蛋白表达水平发生变化,提示SSeCKS可能参与了EAE过程。

长期饮酒后肺损伤大鼠Src抑制的蛋白激酶C底物的变化

目的探讨长期饮酒对大鼠内外源性肺损伤时Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)的影响。方法 SD雄性大鼠36只,随机分为单纯饮酒组、饮酒内源性肺损伤组、饮酒外源性肺损伤组、单纯饮水组、饮水内源性肺损伤组和饮水外源性肺损伤组,每组6只。采用实时PCR法测定肺组织SSeCKSmRNA表达变化,比较各组上述指标是否存在差异。结果单纯饮酒组肺组织SSeCKSmRNA表达较饮水组增多(P<0.05),饮酒内、外源性肺损伤各组较饮水内、外源性肺损伤各组增多显著(P<0.05),饮酒内、外源性肺损伤组之间表达无统计学差异(P>0.05)。结论 SSeCKS表达增加是长期饮酒引起急性呼吸窘迫综合征(actue respiratory distress syndrome,ARDS)的易感性增加和病情严重的可能机制之一。

Src抑制的蛋白激酶C的底物在脑组织中的表达

目的:探讨大鼠发育过程中,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及意义。方法:通过Western blot,免疫组织化学法检测SSeCKS在脑组织中表达的时空变化及细胞定位。结果:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在明显的表达变化,在胎鼠和生后早期的SD大鼠中表达水平较高,尤以生后1周明显,成年以后显著降低,4周时最低。脑分区检测显示端脑、海马和间脑符合全脑检测结果。DAB显色示SSeCKS在脑组织中呈点状散在分布,免疫荧光双标记示SSeCKS与星形胶质细胞有部分共定位,与神经元无明显共定位。结论:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在时空变化,并且主要定位于星形胶质细胞。提示SSeCKS可能通过参与细胞骨架的调节和信号通路的活化影响大鼠胚胎发育过程中星形胶质细胞指导的神经元的迁移和轴突的生长。

C激酶底物蛋白、人类表皮生长因子受体2与胃癌患者临床病理特征的相关性

目的探讨豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白(MARCKS)和人类表皮生长因子受体2(HER2)与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法2018年3月到2021年3月,选择我院收治的60例胃癌患者作为观察组,选择同期60例良性胃部肿瘤患者作为对照组,应用免疫组化法检测两组受检者MARCKS和HER2的表达水平,并分析观察组织中MARCKS、HER2蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组患者MARCKS、HER2阳性率均明显高于对照组(P<0.05);观察组中,MARCKS、HER2阳性与阴性患者性别、年龄、肿瘤大小比较无明显差异(P>0.05),而TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度与MARCKS和HER2表达呈正相关(P<0.05)。结论胃癌组织中,MARCKS、HER2蛋白表达升高,且MARCKS和HER2蛋白表达水平与胃癌患者的TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度呈正相关,可为胃癌的临床诊断和预后评估提供参考价值。

Src羧基端激酶抑制剂PP2对大鼠C6胶质瘤细胞生物学行为的影响及机制研究

目的：探讨Src羧基端激酶（C－terminal Src kinase，Src激酶）抑制剂PP2对大鼠C6胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制。方法用浓度为0（溶剂对照组）、2．5、5、7．5 mol／L PP2作用于C6胶质瘤细胞12 h后，分别采用CCK8、划痕实验、transwell基质胶侵袭实验观察PP2对C6胶质瘤细胞形态、增殖、侵袭和迁移的影响。免疫印迹法检测细胞核内β－catenin蛋白表达。结果不同浓度的PP2作用于C6胶质瘤细胞12 h后均能诱导细胞聚集并产生明显的形态改变，且浓度越高，聚集效果越明显。 PP2作用于C6胶质瘤细胞12 h后可明显抑制其增殖、迁移和侵袭，且呈浓度相关性，同时，细胞核内p－β－catenin蛋白表达明显减少。结论 Src激酶抑制剂PP2可能通过减少细胞核内p－β－catenin蛋白表达，从而有效抑制C6胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。

蛋白激酶C及其抑制物在肺癌中的活性表达及临床意义

目的 对肺癌及相应的肺癌旁组织标本中蛋白激酶C(PKC)及其抑制物 (PKCI)的活性表达规律进行对照研究。方法 收集 2 6例肺癌及癌旁组织标本 ,通过检测同位素放射来测定标本胞浆和胞膜中PKC的比活性和PKCI对PKC活性抑制百分数。结果 2 6例肺癌组织细胞胞浆中PKC比活性显著高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ;而非小细胞癌胸膜中PCK比活性明显低于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,小细胞癌胞膜中PKC比活性与癌旁组织无明显差异 (P <0 ,0 5 )。另外 ,2 6例肺癌组织胞浆中PKCI的抑制活性明显低于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,而胞膜中PKCI的抑制活性则与癌旁组织无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 肺癌组织中PKC被激活而活性增高 ,同时PKCI表达降低说明其对PKC的调控能力下降 ,以上表明PKC和PKCI可能在肺癌的发生及发展中起重要作用。

口腔鳞癌组织中蛋白激酶C及其抑制物活性的研究

目的：探讨口腔鳞癌发生的分子生物学机理。方法：采用Ｔａｋａｉ法研究２０例口腔鳞癌及其临近正常组织的蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）及其抑制物（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＰＫＣＩ）活性。结果：与临近正常组织相比口腔鳞癌胞浆ＰＫＣ活性明显升高（Ｐ＜０．０１），而胞膜无明显变化（Ｐ＞０．０５）；与临近正常组织相比口腔鳞癌胞浆ＰＫＣＩ活性明显降低（Ｐ＜０．０１），而胞膜无明显变化（Ｐ＞０．０５）。结论：口腔鳞癌的发生与ＰＫＣ及ＰＫＣＩ在亚细胞水平活性变化密切相关。

喉癌与蛋白激酶C及其抑制物的关系

为了探讨喉癌与蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）及其抑制物（ＰＫＣＩ）的关系。应用Ｔａｋａｉ蛋白浓度梯度，通过同位素放射性活性测定ＰＫＣ活性及测定ＰＫＣＩ对ＰＫＣ活性抑制的百分数。结果为癌组织胞浆中ＰＫＣ比活性（６６３±０６４ｐｍｏｌ·ｍｇ－１·ｍｉｎ－１）显著高于正常组织胞浆中ＰＫＣ比活性（４．７３±０．５４ｐｍｏｌ·ｍｇ－１·ｍｉｎ－１），癌组织胞浆中ＰＫＣ抑制活性（３３．６％±７．６４％）显著低于正常组织胞浆中ＰＫＣＩ抑制活性（６１．３％±７．９１％）。结果提示癌组织中ＰＫＣ活性升高很可能是被癌基因激活。

小鼠受精卵中蛋白激酶C底物的鉴定

为研究蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)在小鼠早期发育中的调节作用,运用超排卵和体外受精技术,采用体外磷酸化和放射自显影的方法,鉴定小鼠1-细胞期受精卵中PKC的底物。经特殊的反复冻融处理,消除卵中内源性蛋白激酶活性。55个受精卵的样品中加入部分纯化的PKC,结合应用较强的PKC抑制剂H-7和星形孢菌素以及促分裂原活化蛋白激酶抑制剂PD098059作为对照,观察到12条PKC底物蛋白的放射自显影带,根据标准蛋白质Rf值绘制的标准曲线计算,这些磷酸化蛋白的相对分子量分别约为120kDa、100kDa、79kDa、63kDa、59kDa、47kDa、40kDa、34kDa、32kDa、26kDa、24kDa和22kDa。实验结果表明,PKC可通过底物蛋白活性的调节,在小鼠早期发育中发挥重要作用。

Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱移行细胞癌T24细胞生长、增殖的影响

目的探讨Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对Src蛋白及其下游信号作用。方法采用半定量RT-PCR法检测Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后的人膀胱癌细胞T24各浓度组(0、0.2、1.0、5.0μmol/mL组)的c-Src、p38MAPK基因表达的变化情况,使用Western blot检测Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后T24细胞内的c-Src蛋白磷酸化类型与非磷酸化类型的表达情况。结果 Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理有下调后的人膀胱癌细胞T24各浓度组的c-Src mRNA的表达下调;p38基因的表达呈逐渐下调趋势。处理后T24细胞内c-Src基因在蛋白表达水平上其磷酸化类型随Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ浓度的增高表达逐渐下降,并且呈剂量效应关系。结论 Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ可能通过竞争Src蛋白磷酸化位点,使其不能激活,导致下游的细胞传导途径失活使得T24细胞增殖得到抑制,认为Src蛋白具有作为膀胱移行细胞癌分子靶向治疗的潜在靶点的可能性。Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ可能可以通过阻止Src蛋白激活影响其下游的Ras/Raf/MEK/MAPK(ERK1/2或p38)通路和ERK1/2和p38细胞信号传导通路,下调p38表达不仅直接和间接地诱导T24细胞凋亡,而且可以阻止或减少T24细胞的迁移、扩散和穿膜侵袭的发生。

白血病细胞中蛋白激酶C底物的研究

白血病细胞ｉｎｖｉｖｏ蛋白质磷酸化实验结果表明，当ｆＭｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ三肽或促癌剂ＴＰＡ作用到白血病细胞使ＰＫＣ活化时，活化的ＰＫＣ可特异地促进白血病细胞中包括分子量为４０ＫＤ蛋白质在内的三种蛋白质磷酸化。这三种蛋白质的磷酸化反应，可被抗癌药物硫杂脯氨酸衍生物所抑制。

钙-钙调蛋白与蛋白激酶C在底物共享结构域中的聚集及其意义

本文从以下几个方面较为系统地阐述了钙 -钙调蛋白 (Ca2 +- Ca M)和蛋白激酶 C(PKCs)在底物的共享结构域中聚集现象的研究现状 :1 Ca M贮存蛋白 (如神经颗粒素 NG、神经调节素 NM)的分布 ;2 Ca M和 PKCs到达共享结构域的相对时间 ;3突触后 Ca M和

转染人源Omentin-1、Vaspin妊娠期糖尿病脂肪细胞胰岛素受体底物和磷脂酰肌醇3激酶表达变化

目的观察转染人源网膜素1(Omentin-1)、内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)的妊娠期糖尿病(GDM)脂肪细胞胰岛素受体底物1/2(IRS-1/2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)表达变化。方法复苏、传代及诱导分化GDM前脂肪细胞。构建Omentin-1、Vaspin过表达载体,以3个不同过表达梯度(1.0、2.5、5.0μg)转染传代脂肪细胞,以无转染组为对照。采用实时荧光定量PCR法检测各组脂肪细胞Omentin-1、Vaspin、IRS-1/2、PI3K mRNA;采用Western blotting法检测各组脂肪细胞Omentin-1、Vaspin、IRS-1/2、PI3K蛋白及酪氨酸磷酸化IRS-1/2;采用[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取测定法测算各组脂肪细胞葡萄糖的摄取率。结果随Omentin-1表达增加,转染人源Omentin-1脂肪细胞中IRS-1、PI3K(P85a)mRNA及蛋白表达增加,IRS-2 mRNA及蛋白表达未发生明显变化,IRS-1酪氨酸磷酸化程度明显升高,IRS-2酪氨酸磷酸化程度未发生明显变化,葡萄糖摄取率上升。随Vaspin表达增加,转染人源Vaspin脂肪细胞IRS-1、IRS-2、PI3K(P85a)mRNA及蛋白表达均未出现明显变化,IRS-1、IRS-2酪氨酸磷酸化程度均未出现明显变化,葡萄糖摄取率变化不明显。结论转染人源Omentin-1的GDM脂肪细胞IRS-1和PI3K(P85a)表达升高,葡萄糖摄取率升高;转染人源Vaspin的GDM脂肪细胞无此变化。

灯盏花提取物对心脏移植异基因大鼠蛋白激酶C的作用

目的:利用异基因大鼠心脏移植模型研究中药灯盏花提取物对蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的抑制作用。方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,分为灯盏花提取物低剂量组(5mg·kg-·1d-1)、中剂量组(10mg·kg-·1d-1)、高剂量组(15mg·kg-·1d-1)和对照组。移植术后各实验组受体腹腔注射药物至移植心停跳。用底物磷酸化激酶测定法检测受体外周血淋巴细胞PKC的活性并用Westernblot印迹法鉴定;用酶联免疫吸附法检测受体外周血液中白细胞介素-2(IL-2)的水平。结果:各实验组受体外周血淋巴细胞PKC活性及表达和IL-2的水平明显较对照组低。结论:在异基因大鼠心脏移植中灯盏花提取物可对PKC的活性产生抑制作用。

兔心肌细胞蛋白质中可能的PKCε直接底物的鉴定

目的 :利用PKCε酶促放射性磷酸化标记兔心肌细胞蛋白质 ,鉴定出其可能的直接底物 ,为进一步研究奠定基础 .结果 :通过PKCε特异底物竞争抑制、PKCε特异抑制剂Ro 31- 82 2 0、兔心肌细胞蛋白质热变性等分析措施 ,初步用PKCε酶促放射性磷酸化标记 ,从兔心肌细胞蛋白质中鉴定出表观分子量为 5 7kd ,35kd ,2 3kd和 2 0kd的蛋白质的磷酸化与PKCε酶活性相关 ,其中 5 7kd ,2 3kd和 2 0kd 3种蛋白质可被PKCε在体外直接磷酸化 ,并且其磷酸化不受蛋白激酶抑制剂PD980 5 9和SB2 0 35 8的影响 .结论 :5 7kd ,2 3kd和2 0kd 3种蛋白质有可能是PKCε直接底物 .