抵抗素通过酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3信号通路诱导心肌细胞肥厚的分子机制研究

目的探讨酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在抵抗素诱导H9C2心肌细胞肥厚中的作用及其可能分子机制。方法取生长同步化的H9C2心肌细胞随机分为对照组、抵抗素组、抵抗素+Ag490组和Ag490组。对照组细胞用低血清培养基培养;抵抗素组细胞用含浓度为50μg·L^(-1)抵抗素的低血清培养基培养;抵抗素+Ag490组细胞先用含100μmol Ag490低血清培养基培养,然后用含抵抗素浓度50μg·L^(-1)的低血清培养基继续培养;Ag490组细胞先用含100μmol Ag490低血清培养基培养,然后低血清培养;各组细胞均培养48 h(第1部分实验)或3 h(第2部分实验)。应用Image J软件测心肌细胞面积像素;二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白含量;采用Western blot检测各组心肌细胞磷酸化酪氨酸激酶(P-JAK2)、磷酸化信号转导子和转录激活子3(P-STAT3)、α肌动蛋白(α-SMA)和C-MYC蛋白相对表达量。结果抵抗素组心肌细胞表面积像素和单细胞蛋白含量均大于对照组、抵抗素+Ag490组和Ag490组(P<0.05);抵抗素+Ag490组心肌细胞表面积像素和单细胞蛋白含量大于对照组和Ag490组(P<0.05);对照组和Ag490组心肌细胞表面积像素及单细胞蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素组心肌细胞α-SMA蛋白表达量较对照组、抵抗素+Ag490组、Ag490组均显著增加(P<0.05);其余各组心肌细胞α-SMA蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。抵抗素组心肌细胞C-MYC蛋白表达量较对照组、抵抗素+Ag490组、Ag490组均显著增加(P<0.05);抵抗素+Ag490组心肌细胞C-MYC蛋白表达量较对照组增加(P<0.05);其余各组心肌细胞C-MYC蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素组心肌细胞PJAK2、P-STAT3蛋白表达量较对照组、抵抗素+Ag490组、Ag490组显著增加(P<0.05);其余各组心肌细胞P-JAK2、P-STAT3蛋白表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素可诱导H9C2心肌细胞肥厚;JAK2/STAT3信号通路的激活在抵抗素诱导大鼠心肌肥大过程中发挥作用。

Src激酶／信号转导子与转录活化子信号转导通路对内毒素致大鼠急性肺损伤的影响

目的研究Src激酶信号转导子与转录活化子（srckinase／signaltransducerandactivatoroftranscription，Src／STAT）信号转导通路在内毒素脂多糖（1ipopolysaccharide，LPS）致急性肺损伤（acutelunginjury，Au）中的作用。方法60只雄性SD大鼠使用随机数字表将其分成4组，即空白对照组（NS）组、内毒素脂多糖（IJPs）组、LPS＋SU6656（LPS＋SU）组和NS＋SU6656（NS＋SU）组。双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）检测不同时间点大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF）中巨噬细胞炎症蛋白-2（macrophageinflammatoryprotein2，MIP-2）和白细胞介素（IL）-6的浓度，HE染色检测肺组织病理学变化，蛋白质印记分析法（westernblot法）检测肺组织中磷酸化STAT、核因子一KB（nuclearfactorkappaB，NF—KB）和NF—KB抑制蛋白（IRBoL）的表达。另取40只雄性SD大鼠，使用同上的方法随机分成4组，分组同上，比较其生存率。结果LPS组大鼠肺部炎症和肺损伤明显，与LPS组比较，BALF中MIP-2和IL-6降低[MIP-2，6h达高峰：（1135±209）VS（875±112），（P〈0．05）；IL-6，3h达高峰（2235±267）vs（5125±658），（P〈0．05）]；病理切片示肺组织损伤程度较轻；肺组织湿／干重比降低【（4．3±0．2）VS（5．6±0．4）】（P〈O．05）；48h生存率提高（37．6％VS10．5％，P〈0．05）；肺组织NF-KB活化及胞浆中IKBtx的降解均受抑制。结论以上数据表明，Src／STAT信号通路在LPS诱导的Au中发挥重要作用，Src激酶特异性抑制剂（SU6656）可抑制NF-KB的活化和IKBot的降解，提示Src／STAT通路的活化可能参与NF-KB的活化过程。

重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤后p-JAK2及p-STAT3信号通路的影响

目的观察SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型在给予重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)后脑组织磷酸化酪氨酸激酶-2(p-JAK2)、磷酸化信号转导子和转录活化子-3(p-STAT3)蛋白表达及细胞凋亡的情况,探讨rhG-CSF的神经保护作用机制。方法将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、rhG-CSF治疗组(治疗组),每组12只。采用Longa线栓法制作大脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO/R),治疗组大鼠于脑缺血2h后再灌注的即刻及24h分别给予rhG-CSF(按体质量50μg/kg)腹部皮下注射,假手术组和脑缺血再灌注组则予等量生理盐水。采用Longa 5分制标准评分法于术后24h进行神经功能评分,用免疫组化法检测各组大鼠脑组织p-JAK2及pSTAT3蛋白表达水平,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积,用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况。结果假手术组大鼠未见神经功能缺损,脑组织未发现梗死灶;治疗组梗死灶体积〔(16.27±1.44)%〕较缺血再灌注组〔(28.65±1.36)%〕明显减少(P<0.01),治疗组神经功能评分(1.45±0.51)低于缺血再灌注组(2.72±0.45;P<0.01)。缺血再灌注组p-JAK2、p-STAT3表达(灰度值分别为25.62±6.25、24.52±5.08)均低于假手术组(灰度值分别为41.59±6.43、43.36±5.68;均P<0.01)〕,治疗组p-JAK2及p-STAT3表达(灰度值分别为36.47±6.38、35.87±5.52)均较缺血再灌注组(灰度值分别为25.62±6.25、24.52±5.08)增高(均P<0.01);假手术组偶见细胞凋亡,治疗组凋亡细胞比例〔(27.84±2.69)%〕较缺血再灌注组〔(39.51±3.74)%〕明显减少(P<0.01)。结论 rhG-CSF可能对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能为通过抑制炎性细胞因子介导JAK2/STAT3信号转导通路而减轻脑缺血再灌注引起的神经损伤。

益气活血清热解毒方通过JAK/STAT信号通路对动脉粥样硬化的影响及其分子机制

目的探讨益气活血清热解毒方通过酪氨酸蛋白激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路对动脉粥样硬化(AS)的影响及其分子机制。方法选取6~8周龄载脂蛋白(Apo)E基因缺陷小鼠62只,随机分成6组:普通饲料对照组、模型对照组、益气活血组、清热解毒组、辛伐他汀组、益气活血清热解毒组。观察小鼠一般情况;测定血脂、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6水平。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法比较不同处理对AS斑块中IL-6、JAK1、STAT3、细胞因子信号转导抑制蛋白(SOCS)3表达的影响。结果与普通饲料对照组比较,模型对照组体重显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组体重显著升高(P<0.05);益气活血清热解毒组小鼠体重极显著升高(P<0.01)。与普通饲料对照组比较,模型对照组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组HDL-C水平显著升高,LDL-C、TG、TC水平显著降低(P<0.05);益气活血清热解毒组HDL-C水平极显著升高,LDL-C、TG、TC水平极显著降低(P<0.01)。与普通饲料对照组比较,模型对照组小鼠hs-CRP、IL-6水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组hs-CRP、IL-6水平显著降低(P<0.05);益气活血清热解毒组hs-CRP、IL-6水平极显著降低(P<0.01)。与普通饲料对照组比较,模型对照组IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气活血组、辛伐他汀组、清热解毒组IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA表达水平显著降低(P<0.01);益气活血清热解毒组IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA表达水平极显著降低(P<0.01)。结论益气活血清热解毒方通过JAK/STAT信号影响AS的发生发展。

没食子乙醇提取物对结肠癌细胞JAK2/STAT3信号通路的调控作用研究

目的基于蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号传导及转录活化因子3(STAT3)信号通路研究没食子乙醇提取物对结肠癌细胞HCT-116、Caco-2增殖、迁移的调控机制。方法采用CCK-8法检测0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL没食子乙醇提取物作用12、24、48、72 h后对HCT-116、Caco-2细胞增殖的影响。以0.1、0.3、0.5 mg/mL没食子乙醇提取物作用于HCT-116、Caco-2细胞24 h后,采用划痕实验测定细胞的迁移情况,采用荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,采用Western blot法检测细胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果与空白对照比较,0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL没食子乙醇提取物作用12、24、48、72 h后均可显著抑制细胞增殖(P<0.05)。0.1、0.3、0.5 mg/mL没食子乙醇提物作用24 h后,2种细胞的划痕愈合率和细胞上清液中IL-6、TNF-α水平,以及细胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);细胞内ROS水平、Bax蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论没食子乙醇提取物可抑制结肠癌细胞HCT-116、Caco-2的增殖和迁移,其机制可能与增加细胞内ROS的积累,下调肿瘤微环境中炎症因子IL-6、TNF-α的表达和JAK2/STAT3信号通路中JAK2、STAT3的磷酸化水平,进而下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。

特异性信号转导阻滞剂AG490对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨特异性信号转导阻滞剂AG490对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将培养好的人肝癌细胞株Hep G2用4、6、8 mg/kg的AG490(AG490 4 mg/kg组、AG490 6 mg/kg组、AG490 8 mg/kg组)进行处理,另设对照组(仅加PBS)。AG490干预24 h,MTT法测算细胞增殖抑制率;流式细胞术测算细胞周期及凋亡率;采用Hoechst 33342染色法观察细胞形态学变化;采用Western blotting法检测Hep G2细胞中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax、Survivin、Caspase-3蛋白表达。结果 AG490干预24 h,与对照组比较,AG490 4 mg/kg组、AG490 6 mg/kg组、AG490 8 mg/kg组细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率逐渐升高(P均<0.05),且呈浓度依赖性(P均<0.05);Hep G2细胞核染色质固缩浓集、碎裂,凋亡小体形成,蓝色荧光增强,且AG490浓度越高以上变化越明显;P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Survivin蛋白表达降低,而Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P均<0.05)。结论 AG490可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路表达抑制人肝癌Hep G2细胞增殖并促进其凋亡。

JAK/STAT信号通路在乳腺癌中的研究进展

恶性肿瘤已成为威胁全人类生命健康的重大公共卫生问题,其中乳腺癌是全球女性发病率最高的恶性肿瘤。现阶段针对乳腺癌的常规治疗方法(如手术、放疗、化疗等)的副作用较大,患者预后仍不理想,因此迫切需要更有效的治疗手段。在乳腺癌中,Janus激酶(JAK)/信号转导子及转录激活因子(STAT)信号通路与细胞凋亡、侵袭转移、耐药性、肿瘤免疫等方面相关。JAK/STAT信号通路的异常会促进乳腺癌的发生与发展。本文从细胞凋亡、侵袭转移、耐药性、肿瘤免疫等角度对JAK/STAT信号通路介导乳腺癌发生与发展的作用机制,以及该信号通路在乳腺癌治疗中的应用进行综述,以期为乳腺癌防治的深入研究提供参考。

白芍总苷基于Jak/stat3信号通路对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨白芍总苷(TGP)基于Janus激酶/信号转导子及转录激活子(Jak/stat3)信号通路对高糖诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、凋亡的影响。方法ARPE-19细胞暴露于高糖环境,建立细胞损伤模型。ARPE-19细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、TGP低、中、高浓度组(50 mmol/L葡萄糖+2.5、5.0、10.0μg/ml TGP)和TGP高浓度+IGF-1组(10μg/ml TGP+20μmol/L Jak/stat3通路激活剂IGF-1)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组ARPE-19细胞的生存能力;流式细胞术检测各组ARPE-19细胞的凋亡能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组ARPE-19细胞中促炎因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8]水平;2,7-二氯二醋酸荧光素(DCFH-DA)流式细胞术检测各组ARPE-19细胞内活性氧(ROS)水平;Western印迹检测ARPE-19细胞内增殖蛋白[细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21]、凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Pro-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、活化型(Cleaved)-caspase-3]及Jak/stat3信号通路相关蛋白表达。结果与正常组相比,高糖组细胞活性及CyclinD1表达明显减小,p21表达明显增加,凋亡率及Bax表达、Cleaved/Pro-Caspase-3比值明显增加,Bcl-2表达明显减小,IL-1β、IL-6、IL-8含量及ROS荧光强度明显增加(均P<0.05)。与高糖组比较,TGP低、中、高浓度组细胞活性及CyclinD1表达升高,p21表达降低,凋亡率及Bax表达、Cleaved/Pro-Caspase-3比值下降,Bcl-2表达升高,IL-1β、IL-6、IL-8含量及ROS荧光强度减小,有统计学差异(均P<0.05)。ARPE-19细胞内添加IGF-1上调Jak、stat3磷酸化水平后,细胞活性及CyclinD1表达显著降低,p21表达显著增加,凋亡率及Bax表达、Cleaved/Pro-Caspase-3比值显著增加,Bcl-2表达明显下降,IL-1β、IL-6、IL-8含量及ROS荧光强度显著上升(均P<0.05)。结论TPG通过阻断Jak/stat3信号通路,抑制高糖诱导的RPE细胞凋亡和炎症损伤并促进增殖。

Janus蛋白酪氨酸激酶-信号转导子和转录激活子信号通路对神经干细胞发育的调控

神经干细胞（NSCs）是神经系统内处于较早发育阶段的细胞体，可发育成为各种成熟的神经细胞。因此，可以利用NSCs来替代受损的神经细胞，恢复中枢神经系统的功能[1]。Janus蛋白酪氨酸激酶（JAK）-信号转导子和转录激活子（STAT）信号通路是近年来新发现的一条细胞内信号转导途径，许多细胞因子和生长因子都利用该途径传递生物学信号，发挥生物学作用[2]。

小鼠肝脏缺血再灌注损伤后Janus激酶／信号转导子及转录激活子通路基因表达的变化

肝脏缺血再灌注（ischemiareperfusion，I／R）损伤是造成肝脏手术患者术后恢复慢甚至手术失败的重要原因。肝脏I／R损伤的发生涉及众多基因和蛋白表达的变化，Janus激酶／信号转导子及转录激活子（Januskinase／signaltransducerandactivatoroftranscription，JAK／STAT）通路近年来备受关注，是重要的细胞内信号转导途径，在肝脏I／R损伤中的作用尚未明确。

Janus激酶-信号转导子及转录激活子信号通路在非小细胞肺癌中的研究进展

非小细胞肺癌是一种常见的恶性肿瘤，但人们对它的发病机制仍未全了解。近来研究结果显示Janus激酶-信号转导子及转录激活子（JAK—STAT）信号通路的异常活化与非小细胞肺癌的关系密切，涉及非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭、转移和预后等过程。因此，揭示该通路的分子生物学机制与基因表达调节规律有重要意义。本文拟就JAK—STAT信号通路与非小细胞肺癌研究近况予以综述。

Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3通路对糖尿病肾病的研究现状

Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路是一条能够调节细胞增殖、分化、凋亡等多种生物效应的多级联通路,在糖尿病肾病(DN)的发展中至关重要。本文就JAK2/STAT3通路与DN之间的最新研究做一综述。

JAK-STAT信号通路的激活对视网膜缺血-再灌注损伤的促进作用

背景视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI）是眼科临床上常见的多种视网膜血管性疾病共同的病理损伤过程，发病机制复杂。研究表明视网膜细胞凋亡和神经纤维变性是RIRI最终的共同通路。Janus激酶信号转导子与转录激活子（JAK-STAT）信号通路是近年来新发现的一条信号转导途径，参与多种病理生理过程，但该通路与RIRI病理过程的关系尚不明确。目的探讨JAK—STAT信号通路在大鼠RIRI过程中被激活的时程及其意义。方法采用随机数字表法将40只正常清洁级成年SD大鼠随机分为RIRI6h、12h、24h和48h组，大鼠的一侧眼采用前房生理盐水灌注法升高眼压以建立RIRI模型，正常对侧眼作为正常对照组。大鼠眼压升高至110mmHg（1mmHg=0．133kPa）并能持续60min视为造模成功。分别于造模后6、12、24和48h处死大鼠并摘除大鼠眼球，采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中STAT3和JAK2蛋白的表达强度并定位；采用实时荧光定量PCR法检测大鼠视网膜中STAT3mRNA和JAK2mRNA相对表达量的动态变化，并与正常对照组检测结果进行比较。结果免疫组织化学检测显示，JAK2和STAT3蛋白主要表达于视网膜内核层和视网膜神经节细胞（RGCs）层，正常对照组大鼠视网膜中JAK2和STAT3蛋白均呈弱阳性表达，呈黄色染色，RIRI模型大鼠视网膜中JAK2和STAT3蛋白表达均明显增强，呈棕黄色染色。各组间大鼠视网膜中JAK2和STAT3蛋白表达强度的总体比较差异均有统计学意义（F=88．735、96．625，均P〈0．01），RIRI后各时间点组大鼠视网膜中JAK2和STAT3蛋白表达强度均明显高于正常对照组，RIRI12h组大鼠视网膜中JAK2和STAT3蛋白表达强度达峰值，均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（JAK2：t=4．308、5．559、5．315、4．726，均P〈0．01；STAT3：t=5．047、7．843、6．281、4．887，均P〈0．01）。RIRI模型眼视网膜内层增厚、组织疏松，可见细胞空泡样变性及RGCs数量减少。实时荧光定量PCR显示，各组间大鼠视网膜中JAK2mRNA和STAT3mRNA总体比较差异均有统计学意义（F=111．239、129．539，均P〈0．01），RIRI6、12、24和48h组大鼠视网膜中JAK2mRNA和STAT3mRNA相对表达量较正常对照组均明显增加，差异均有统计意义（JAK2mRNA：t=3．504、5．102、4．679、4．213，均P〈0．01；STAT3mRNA：t=6．541、8．787、5．693、5．898，均P〈0．01）。结论RIRI模型鼠视网膜形态发生病理改变，RGCs数量减少，同时大鼠视网膜中JAK2和STAT3表达上调，RIRI大鼠视网膜中JAK2和STAT3的表达变化与视网膜形态损伤趋势一致，提示JAK—STAT通路参与RIRI的病理损伤过程。

磷酸化蛋白酪氨酸激酶及信号转导子和转录激活子在谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡中的表达研究

目的探讨谷氨酸诱导PC12细胞凋亡后磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(P-JAK2)、磷酸化信号转导子与转录激活子3(P-STAT3)表达的变化及意义。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞发生凋亡,实验分为6组,分别为正常对照组、500μmol/L谷氨酸作用5、10、20、30、60 min组,应用流式细胞仪观察PC12细胞凋亡,Western blot定量观测PC12细胞P-JAK2与P-STAT3蛋白表达的变化。结果对照组PC12细胞的凋亡率为(2.71±0.32)%;经500μmol/L谷氨酸作用PC12细胞20 min,凋亡率增加到(61.20±4.60)%,与对照组相比差异有显著性意义(P=-0.000);Western blot检测结果表明P-JAK2 5 min在胞浆中开始表达,20 min达最高峰,是5 min组(3.52±0.20)倍(P= 0.002);P-STAT3 5 min表达增强,30 min达高峰,为5 min组的(4.76±0.17)倍(P=0.000)。结论细胞损伤激活了JAK/STAT信号转导通路,该通路参与了神经细胞凋亡的过程。

JAK-STAT信号通路研究进展

AK(Janus激酶 ) -STAT(信号转导子和转录激活子 )信号通路是与细胞生长、增殖和分化关系十分密切的一条细胞信号通路 ,近年来发展迅速 .本文对通路中细胞表面受体、JAK、STAT等几个关键环节的分子结构、相互作用及调控因素进行了总结 .

JAK2/STAT3信号通路在肝内胆管细胞癌中的表达及预后

目的 探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子(JAK2/STAT)3信号通路在人胆管细胞癌(ICC)组织中的表达和临床特征意义。方法 采用免疫组织化学技术检测80例ICC组织及其相应的癌旁组织中JAK2和STAT3中的表达情况,并分析两者表达与ICC患者临床病理参数之间的关系。结果 ICC组织中JAK2与STAT3蛋白的阳性表达率均高于相应癌旁组织,两者表达呈明显正相关。JAK2与STAT3与肝硬化、胆管癌栓、血管侵犯、肿瘤分化、临床分期密切相关(均P<0.05);Kaplan-Meier分析表明高表达JAK2与STAT3的患者生存率及生存期更短,预后更差;Cox模型分析表明,JAK2与STAT3是影响ICC患者生存期的独立预后因素(均P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路在ICC组织中高表达,是反映ICC发生发展的重要生物学指标。

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的保护作用。方法50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3.1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.05)。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。结论MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。

长链非编码RNA核富集转录子1对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬的影响及机制研究

目的:分析长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录子1(NEAT1)通过调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法:人胃癌SGC7901细胞传代培养后分为对照组、过表达组和沉默组。对照组为不做任何处理,过表达组给予lncRNA NEAT1过表达质粒转染,沉默组给予lncRNA NEAT1沉默质粒转染。鉴定lncRNA NEAT1转染效率,分析沉默lncRNA NEAT1对人胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬、MAPK信号通路蛋白表达量的影响。结果:与对照组比较,过表达组lncRNA NEAT1表达量、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达量增加,上皮性钙黏附素(E-cadherin)、Beclin-1、Ⅱ型/Ⅰ型微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达量降低;沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。与过表达组比较,沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。结论:抑制lncRNA NEAT1可有效抑制胃癌细胞的迁移、侵袭、自噬,其机制可能与调控MAPK信号通路有关。

3-溴丙酮酸调控JAK/STAT信号通路抗人卵巢癌细胞株A2780增殖的实验研究

目的探讨3-溴丙酮酸对人卵巢癌细胞株A2780增殖的抑制作用,并观察其对Janus激酶/信号转导子及转录激活子(JAK/STAT)信号通路的调控作用。方法取人卵巢癌细胞株A2780,培养至对数期,常规分装(1.5×106个/孔)至6孔板中,设置低、中、高剂量组和对照组,每组各包含5个复孔。继续培养待细胞贴壁生长后,3剂量组分别加入25、50、100μmol/L浓度的3-溴丙酮酸,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS),培养72h。对比各组培养期间细胞形态学变化,培养24h、48h和72h增殖抑制率变化,培养72h后各组细胞周期分布结果,培养72h后各组JAK2mRNA、STAT3mRNA表达,培养72h后各组JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果在透射电镜下检查发现对照组各时刻均表现出细胞形态结构规则、染色质均匀分布、细胞膜完整的形态,低中高剂量组细胞形态学均出现明显的异常,其中高剂量组形态学异常最为显著,中剂量组形态学明显异常,低剂量组稍有异常,且均呈时间依赖性;各组培养24h、48h、72h增殖抑制率对比差异均有统计学意义(P<0.05),且均呈时间依赖性和剂量依赖性,本组内每2个时刻、各时刻每2组间增殖抑制率对比差异均有统计学意义(P<0.05);各组培养72h后G0/G1期、G2/M期结果对比差异均有统计学意义(P<0.05),其中对照组G0/G1期最高,低剂量组次之,中剂量组更低,高剂量组最低,高剂量组G2/M期最高,中剂量组次之,低剂量组更低,对照组更低;各组培养72h后JAK2mRNA、STAT3mRNA表达对比差异均无统计学意义(P>0.05),且每2组间对比差异均无统计学意义(P>0.05);各组培养72h后p-JAK2、p-STAT3蛋白表达、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3对比差异均有统计学意义(P<0.05),其中对照组均最高,低剂量组均次之,中剂量组均更低,高剂量组均最低。结论3-溴丙酮酸能够抑制人卵巢癌细胞株A2780增殖,阻滞于G2/M期,推测与调控JAK/STAT信号通路,下调p-JAK2、p-STAT3蛋白表达有关。

止痛顺气胶囊对慢性萎缩性胃炎模型大鼠JAK/STAT 信号通路的影响

目的:研究止痛顺气胶囊对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路的影响,为阐明其改善CAG的作用机制提供参考。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组[维酶素,0.09 g/(kg·d)]和止痛顺气胶囊低、中、高剂量组[0.75、1.5、3 g/(kg·d)],每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍自由饮用联合饥饱失常的方法复制CAG模型。造模结束后,各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积水,连续给药28 d。给药结束后,采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6水平,采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠的胃黏膜组织病理学变化,分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测大鼠胃黏膜组织中JAK1、STAT3、细胞因子信号传导抑制因子(SOCS-3)、c-Myc的mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜可见排列稀疏不整齐的腺体,以及着色深染的细胞核;血清中IL-1β、IL-6水平以及胃黏膜组织中JAK1、STAT3、c-Myc mRNA及其蛋白表达水平显著升高(P<0.05),胃黏膜组织中SOCS-3 mRNA及其蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠胃黏膜腺体排列较整齐,染色较深的核细胞数较少;止痛顺气胶囊低剂量组大鼠血清中IL-6水平和胃黏膜组织中c-Myc mRNA表达水平显著降低(P<0.05),SOCS-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);止痛顺气胶囊中剂量组大鼠血清中IL-1β、IL-6水平和胃黏膜组织中JAK1、STAT3、c-Myc mRNA表达水平以及胃黏膜组织中JAK1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),胃黏膜组织中SOCS-3 mRNA及其蛋白表达水平显著升高(P<0.05);阳性对照组和止痛顺气胶囊高剂量组大鼠上述指标水平均显著改善(P<0.05)。与阳性对照组比较,止痛顺气胶囊高剂量组胃黏膜组织中STAT3 mRNA及其蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:止痛顺气胶囊对CAG模型大鼠具有一定的改善作用;其机制可能与下调JAK1、STAT3、c-Myc mRNA及其蛋白表达,上调SOCS-3 mRNA及其蛋白表达有关。