Src羧基末端激酶结合蛋白过表达及棕榈酰化对裸鼠T系白血病Jurkat细胞增殖作用影响的研究

目的:建立Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞裸鼠模型,研究Cbp过表达及棕榈酰化对Jurkat细胞增殖作用的影响。方法:利用neg-EGFP、Cbp-EGFP、Cbp-m-EGFP融合蛋白慢病毒载体转染的Jurkat细胞构建动物模型,24只5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、空病毒对照组、Cbp过表达组和Cbp棕榈酰化位点突变组,每组6只。接种前和接种后0、1、2、3、4、5周裸鼠称重,取外周血计数白细胞总数。利用病毒本身携带的EGFP绿色荧光蛋白在激光共聚焦显微镜下观察Jurkat细胞在外周血中的增殖情况;HE染色观察肝脏的病理变化;流式细胞仪检测Jurkat细胞在小鼠骨髓和外周血中的增殖水平。结果:Cbp过表达组小鼠体重低于空白对照组,高于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组,Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠体重低于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。Cbp过表达组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、低于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组。Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。结论:成功建立了Cbp过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞动物模型,Cbp过表达可抑制Jurkat细胞增殖,Cbp棕榈酰化位点突变可促进Jurkat细胞增殖。

过表达Src羧基末端激酶结合蛋白的Jurkat细胞荷瘤小鼠模型的建立与鉴定

目的建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型。方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只。小鼠腋窝皮下注射Jurkat细胞1×107个/0.1 m L。建模成功后取出完整瘤体组织称质量、HE染色观察小鼠皮下肿块的病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血Jurkat细胞增殖水平;ELISA检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)水平。结果病毒转染过表达CBP模型组小鼠瘤体组织块体积和质量小于对照组,HE染色瘤体内有Jurkat细胞增殖,外周血Jurkat细胞增殖水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组,血清中IL-2水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组。结论成功建立了过表达CBP的Jurkat白血病细胞小鼠荷瘤模型,CBP可抑制Jurkat细胞IL-2分泌和增殖。

Src羧基端激酶结合蛋白在食管癌中的表达及其临床意义

目的探讨Src羧基端激酶结合蛋白(csk-binding protein,CBP)在人类食管癌组织中的表达及其临床意义,揭示CBP基因与食管癌发生、发展的相关性。方法采用RT-PCR法和Western印迹法对50对新鲜食管癌及对应癌旁正常组织标本检测CBP mRNA及CBP蛋白表达,结合临床病理资料,研究其与食管癌的相关性。结果 RT-PCR显示食管癌组织CBPmRNA表达明显低于癌旁正常组织(76%38/50),在正常组织中的表达水平为食管癌组织的1.43倍(P<0.05)。Western印迹显示CBP蛋白在正常组织中的表达水平为食管癌组织的1.28倍(P<0.05)。CBP下调表达与肿瘤的淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Spearman等级相关分析表明CBPmRNA和蛋白在食管癌的下调表达存在正相关(P=0.015)。结论 CBP在食管癌组织表达下调,其表达下降可能与食管癌的发生、发展过程有关。

Src羧基端激酶结合蛋白影响线粒体分裂及NK细胞杀伤肺癌细胞活性的分子机制探讨

目的:探究Src羧基端激酶结合蛋白(csk-binding protein, CBP)在人肺癌组织中的表达水平,及其对线粒体分裂和自然杀伤(natural killer, NK)细胞杀伤肺癌细胞活性的影响。方法:免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺癌组织及癌旁组织中CBP的表达;含CBP慢病毒感染人肺癌细胞株A549,通过荧光倒置显微镜、qRT-PCR和Western blot检测细胞感染效果;CCK-8法检测各组A549细胞活性,Mito-Tracker染色观察各组A549细胞内线粒体形态和长度变化,Western blot检测各组A549细胞线粒体动态相关蛋白Mfn1、Mfn2、Drp1的表达,免疫荧光染色检测各组A549细胞内细胞色素C(Cyt C)的表达,流式细胞术检测各组A549细胞凋亡情况;从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中分离NK细胞并进行鉴定,乳酸脱氢酶释放实验检测NK细胞对各组A549细胞的杀伤率。结果:肺癌组织中CBP的表达水平较癌旁组织中明显下降(P <0.01);感染CBP过表达慢病毒的A549细胞中CBP mRNA和蛋白的相对表达量均升高,培养48 h、72 h、96 h后细胞增殖活性下降,线粒体呈椭圆状或短杆状,长度明显缩短,线粒体分裂相关蛋白Mfn1、Mfn2蛋白表达减少,Drp1蛋白表达增加,有大量Cyt C从线粒体释放,细胞凋亡率升高,同时NK细胞对A549细胞的杀伤率明显提高,差异均具有统计学意义(P <0.01);而在使用线粒体分裂蛋白抑制剂Mdivi-1预先处理A549细胞后再感染CBP过表达慢病毒,线粒体分裂受到抑制,Mfn1、Mfn2蛋白表达增加,Drp1蛋白表达减少,Cyt C释放减少,细胞凋亡率降低,NK细胞对A549细胞的杀伤率也受到抑制,差异均具有统计学意义(P <0.01)。结论:CBP在人肺癌组织中低表达,在A549细胞中过表达CBP能够促进线粒体分裂与细胞凋亡,并提高NK细胞对A549细胞的杀伤率。

高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响(英文)

背景:衔接蛋白分子的联动和协同有效调控T细胞的信号转导,形成级联放大或限制,最终实现T细胞复杂的免疫功能。蛋白分子Src羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。目的:探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。方法:构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。结果与结论:细胞转染效率大于95%,Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的Jurkat细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中Src羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示Jurkat细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。

羧基末端结合蛋白1对肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的研究羧基末端结合蛋白1(C-terminal binding protein1,CtBP1)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及机制。方法采用CtBP1 siRNA转染HepG2细胞,实验分为4个组:空白对照组、转染试剂对照组、阴性序列对照组与干扰组。于转染后不同的时间收集细胞,用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果 CtBP1 siRNA转染有效抑制了HepG2细胞中CtBP1蛋白表达,与空白对照组比较,转染后72 h后,CtBP1蛋白下调了57.80%。CtBP1沉默后细胞生长受到抑制(P<0.05),转染后24、48、72、96 h生长抑制率分别为22.34%、52.15%、53.97%和54.77%;而对细胞周期分布无明显影响(P>0.05);但CtBP1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 CtBP1沉默能抑制HepG2细胞增殖,其机制是通过促凋亡来实现的。CtBP1能促进肿瘤生长和抑制凋亡,是潜在的肿瘤治疗靶点。

2型糖尿病大鼠肝脏损伤与固醇调节元件结合蛋白-1c、c-Jun氨基末端激酶表达的关系

目的探讨固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)在2型糖尿病大鼠肝损伤中的表达和意义。方法高脂饲料喂养结合小剂量链脲菌素建立2型糖尿病伴肝损伤大鼠模型组,同时以普食喂养的大鼠作为对照组,检测两组大鼠血糖、血脂水平,同时检测SREBP-1c及JNK的蛋白表达水平,观察大鼠肝损伤与SREBP-1c及JNK蛋白表达水平之间的关系。结果模型组血糖及血脂水平明显高于对照组,模型组肝功能生化指标检测显示损伤明显,模型组与对照组差异有统计学意义(P<0.05);模型组SREBP-1c蛋白表达阳性着色区域积分吸光度值为(51 767.21±3 246.37),JNK阳性表达率为90.9%;对照组阳性着色区域积分吸光度值为(35 814.37±2 971.52),JNK阳性表达率为31.6%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论模型组大鼠SREBP-1c与JNK蛋白表达水平明显高于对照组,2型糖尿病伴肝损伤大鼠的SREBP-1c和JNK蛋白表达明显增加。

羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用

目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况。结果酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2Ⅰ的不同片段。从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2Ⅰ能够特异性结合。亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集。两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核。结论人CtBP2能够在细胞核内与UBE2Ⅰ特异性相互作用,是UBE2Ⅰ的靶蛋白。

大鼠坐骨神经夹伤后羧基末端结合蛋白2的表达及意义

目的探讨大鼠坐骨神经夹伤后羧基末端结合蛋白2(CtBP2)的表达及意义。方法制备成年SD大鼠坐骨神经夹伤模型,用western blot和免疫荧光染色检测坐骨神经CtBP2的表达。结果 western blot显示大鼠坐骨神经夹伤后,CtBP2表达逐渐下降,第7天达最低后逐渐上升,第28天达正常水平。免疫荧光染色结果表明,CtBP2在大鼠正常坐骨神经与许旺细胞(Schwann's cell)标志物100(S100)有共定位,和神经纤维200(NF200)几乎无共定位;坐骨神经夹伤后第5天,CtBP2表达量较正常坐骨神经降低。结论大鼠坐骨神经夹伤可引起CtBP2表达变化,可能与损伤后神经的再生及功能修复有关。

羧基末端结合蛋白:一种实体肿瘤的致癌因子

肿瘤的发生、发展涉及多因素、多阶段的相互协调、相互作用,预测肿瘤相关标志物是目前医学研究的热点。羧基末端结合蛋白(CtBP)是一种转录辅抑制因子,在许多实体肿瘤细胞中过表达,可与其相关的转录因子相结合,参与肿瘤细胞“Warburg效应”、上皮-间充质转化、肿瘤干细胞自我更新等多个过程,促进肿瘤的发生、发展。本文就CtBP在肝癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌中的研究进展作一综述。

C-末端Src蛋白/黏着斑激酶/上皮钙黏素通路在宫颈癌侵袭转移中的作用及机制研究

目的研究C-末端Src蛋白(c-Src)/黏着斑激酶(FAK)/上皮钙黏素(E-cad)通路在宫颈癌侵袭转移中的作用。方法选取来自湖南医药学院第一附属医院2019年1月至2020年12月收集的宫颈鳞癌(CSCC)组织标本30例及正常宫颈(NC)组织标本30例,采用免疫组织化学染色检测CSCC、NC组织中E-cad阳性率,分析E-cad与CSCC患者临床病理特征的关系。采用Western blot检测CSCC、NC组织中c-Src、FAK、E-cad蛋白表达水平。另选取宫颈癌Caski细胞系,将其分为Caski组、Caski+c-Src抑制剂组,Caski组不进行处理,Caski+c-Src抑制剂组加入c-Src抑制剂(2.7 nmol/L),观察两组迁移、侵袭能力的变化及凋亡情况,采用Western blot检测两组c-Src、FAK、E-cad蛋白表达水平。结果CSCC组织标本的E-cad阳性率低于NC组织标本,差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad表达与CSCC患者的国际妇产科联盟分期、分化程度、复发情况相关联(P<0.05)。CSCC组织c-Src、FAK蛋白表达水平高于NC组织,E-cad蛋白表达水平低于NC组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Caski+c-Src抑制剂组侵袭、迁移细胞计数及c-Src、FAK蛋白表达水平均低于Caski组,细胞凋亡率、E-cad蛋白表达水平高于Caski组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论c-Src可能通过上调FAK和下调E-cad,导致宫颈癌细胞侵袭和迁移能力下降,其机制可能与凋亡增多有关。

羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活作用的研究

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生、发展过程密切相关[1-5].

羧基末端调节蛋白与肿瘤、缺血性损伤及代谢综合征

羧基末端调节蛋白(carboxyl-terminal modulator protein,CTMP)是一核编码的线粒体蛋白,表达于神经、胰腺、肾脏等多种组织。病理条件下羧基末端调节蛋白转位于胞浆,结合并抑制蛋白激酶B活性、与热休克蛋白-70相结合并解除该分子对凋亡因子的限制作用,进而参与细胞凋亡、代谢的调控。研究还发现,羧基末端调节蛋白参与线粒体动力学调节;其羧基端具有硫酯酶活性,又被称为硫酯酶超家族成员4。本文旨在阐述羧基末端调节蛋白的分子结构及其在肿瘤、缺血性损伤和代谢综合征中作用之研究进展。

DNA结合分化抑制蛋白-1促进乳腺癌细胞干细胞特性与血管形成的机制初探

目的探究DNA结合分化抑制蛋白-1(ID-1)对乳腺癌细胞干细胞特性与血管形成的影响及其分子机制。方法免疫组织化学染色检测乳腺癌组织和癌旁组织中ID-1表达;将SUM159细胞以脂质体介导转染法过表达或抑制ID-1水平,分为Control组、shRNA-NC组、shRNA-ID-1组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ID-1组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测转染效果;平板集落形成实验检测细胞集落形成能力,肿瘤球形成实验检测细胞自我更新能力,小管形成实验检测HUVECs成管能力,免疫荧光染色法和Western blot检测Src激酶活化情况。结果乳腺癌组织中ID-1阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);转染shRNA-ID-1可抑制SUM159细胞中ID-1 mRNA与蛋白表达(P<0.05),在SUM159细胞中抑制ID-1表达后,细胞集落形成数目减少(P<0.05),肿瘤球体体积变小,球体数目减少(P<0.05),HUVECs形成的分支点数减少(P<0.05),p-Src荧光表达减弱,p-Src蛋白表达水平下调(P<0.05);转染pcDNA3.1-ID-1可提高SUM159细胞中ID-1 mRNA与蛋白表达(P<0.05),而过表达ID-1能够增加细胞集落形成数目(P<0.05),使肿瘤球体体积增大,球体数目增多(P<0.05),HUVECs形成的分支点数增加(P<0.05),同时,细胞内p-Src荧光表达明显增强,p-Src蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论ID-1能够增加乳腺癌细胞干细胞特性,促进乳腺癌血管形成,这一作用机制可能与激活Src激酶途径相关。

Src羧基端激酶结合蛋白在非小细胞肺癌中的表达

我们对48例非小细胞肺癌（NSCLC）标本进行Src羧基端激酶结合蛋白（CBP）mRNA和蛋白表达的检测，探讨CBP与肺癌发生、发展的相关性。

胆管细胞癌中CtBP1、Zeb1、Zeb2与E-cadherin蛋白的表达及临床意义

目的探讨转录抑制因子Zeb1、Zeb2、转录辅抑制因子CtBP1及其靶基因E-cadherin在胆管细胞癌中的表达及CtBP1、Ecadherin的临床意义。方法采用免疫组化法检测胆管细胞癌及癌旁组织芯片中CtBP1、Zeb1、Zeb2和E-cadherin的表达。结果CtBP1在胆管细胞癌及癌旁组织中的阳性率分别为44.44%和17.86%,Zeb2分别为34.92%和10.71%,E-cadherin分别为50.79%和100%,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。Zeb1在胆管细胞癌仅1例表达,而在癌旁组织中不表达。CtBP1与胆管细胞癌的分化程度相关(P<0.05),E-cadherin与胆管细胞癌的分化程度及远处转移有关(P均<0.05)。E-cadherin和CtBP1及Zeb2表达呈负相关(r=-0.034、-0.029,P均<0.001),CtBP1和Zeb2表达呈正相关(r=0.228,P=0.005)。结论胆管细胞癌中CtBP1、Zeb2与E-cadherin均表达异常,CtBP1、Zeb2可能共同参与E-cadherin表达调控。联合检测CtBP1和E-cadherin有望成为评估胆管细胞癌恶性生物学行为的参考指标。

食管癌组织中CtBP1、p16蛋白的表达变化

目的观察食管癌组织中C端结合蛋白(CtBP)1和p16蛋白的表达变化。方法采用免疫组化法检测57例食管癌组织(观察组)及30例癌旁组织(对照组)中的CtBP1和p16蛋白,并分析其与食管癌临床病理参数的关系。结果观察组51例、对照组29例CtBP1蛋白表达阳性,两组CtBP1蛋白阳性表达率相比P>0.05。观察组30例、对照组24例p16蛋白表达阳性,两组p16蛋白阳性表达率相比P<0.05。食管癌组织中p16表达与临床分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与病理分型无关(P>0.05);CtBP1表达与临床分期、淋巴结转移、病理分型均无关(P均>0.05)。结论食管癌组织中p16蛋白表达下调,CtBP1蛋白表达无明显变化。

皮动蛋白及微丝相关蛋白2/3复合物介导的细胞运动的分子机制

皮动蛋白(cortactin)是一种含有特殊重复序列结构域的微丝肌动蛋白结合蛋白,它直接参与了细胞皮层(cortex)微丝细胞骨架的组建。它又是细胞内Src类酪氨酸蛋白激酶的主要底物之一,代表了一类高度保守的胞内皮层信号蛋白质家族。近几年来,对于细胞运动分子机制的研究取得很大进展,利用组织培养细胞进行的体外实验证明,皮动蛋白能够活化微丝相关蛋白2/3复合物(actinrelatedprotein2/3complex,Arp2/3complex),调控皮层微丝细胞骨架的组装,在细胞运动过程中具有重要作用。

肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白的表达与临床意义

目的:探究羧基末端结合蛋白1(CtBP1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)在肝癌组织中的表达情况及临床意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测200例肝癌及癌旁组织标本CtBP1和E-钙黏蛋白的表达情况,并分析CtBP1、E-钙黏蛋白表达与肝癌临床病理特征的关系,以及肝癌组织二者表达的相关性。结果:肝癌组织CtBP1的阳性表达率明显高于癌旁组织、E-钙黏蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达与年龄、性别无关(P>0.05),与TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。肝癌组织CtBP1、E-钙黏蛋白表达呈负相关关系(r=-0.102,P<0.05)。结论:肝癌组织CtBP1和E-cadherin均呈异常表达,且二者可能存在调控关系,联合检测CtBP1、E-钙黏蛋白有望成为评估肝癌恶性生物学行为的指标。

乳铁蛋白提取工艺研究及应用

乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,它的分子主体是一个大约有700个氨基酸残基构成的多肽链,该多肽链可以折叠成两个球状叶,一端是氨基末端叶,一端是羧基末端叶,每一叶状结构都含有一个Fe3+和一个碳酸氢阴离子结构部位,每一叶都能高亲和性可逆的与铁结合。其中,Fe3+结构位于一个很深的裂缝中,当铁离子缺乏时,每一片叶片可以曲折,使裂缝打开或关闭,但当多肽链已同铁离子结合时,则裂缝处于闭锁状态。现有的提取纯化方法包括:吸附色谱法、离子交换色谱法。