缺血性心脑血管疾病患者SCAP基因Ile796Val多态性的研究

目的 探讨甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白 (SCAP)基因 Ile796Val多态性与缺血性心脑血管疾病患者的相关性。方法 选取冠心病患者 1 1 2例分为 2组〔血清胆固醇 (TC)与甘油三酯 (TG)正常组 50例 ,血清 TC与 TG增高组 62例〕,缺血性脑卒中患者 53例。采用 PCR-RFLP的分析方法 ,检测老年人群中缺血性心脑血管疾病患者 SCAP基因 Ile796Val的多态性。结果 冠心病血脂正常组与对照组相比 ,基因型和等位基因差异无显著性 (P>0 .0 5)。冠心病血脂增高组和缺血性脑卒中组与对照组相比 ,基因型和等位基因均有显著性差异 (P<0 .0 5) ,且 A等位基因频率显著高于对照组。结论 SCAP基因 Ile796Val多态性对心脑血管的遗传学研究具有重要意义。提示 SCAP基因 A等位基因与动脉粥样硬化有着密切的关系 ,并且增加了罹患缺血性心脑血管疾病的风险性。

SCAP/SREBP2/LDLr通路在LPS诱导人血管平滑肌细胞泡沫化中的作用

目的:研究炎症介质——脂多糖(LPS)是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2(SCAP-SREBP2)复合物介导的低密度脂蛋白受体(LDLr)负反馈调控,增加人血管平滑肌细胞对天然低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成。方法:人血管平滑肌细胞在无血清培养基中培养24 h后,分为对照组(继续无血清培养);高脂组(加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml);高脂加LPS组(加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,同时加入LPS,终浓度400 ng/ml);高脂加LPS加肝素组(加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,加入LPS,终浓度400 ng/ml,加入肝素,终浓度5 mg/ml),以上各组细胞培养24 h后收获。酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,油红O染色法检测细胞内脂质水平,Real time PCR法检测LDLr、SREBP2表达水平,细胞免疫化学法检测SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。结果:细胞内胆固醇测定及油红O染色发现,LPS通过增加人血管平滑肌细胞对非修饰LDL摄取,导致人血管平滑肌细胞转变为泡沫细胞。在LPS不存在时,25μg/ml LDL减少LDLr mRNA水平(P<0.05)。然而,LPS增加LDLr mRNA水平,逆转25μg/ml LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了血管平滑肌细胞对LDL摄取(P<0.05),LPS刺激也导致了SCAP蛋白表达增加和SREBP2的mRNA水平升高(P<0.05),同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体。这些结果提示LPS通过增加SCAP/SREBP2复合物从内质网到高尔基体转位,干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在血管平滑肌细胞内堆积,导致泡沫细胞形成。结论:本研究提示,在LPS刺激条件下,SCAP/SREBP2/LDLr通路可能是血管平滑肌细胞泡沫化的另一条通路。

基于加权基因共表达网络分析筛选SCAP基因预测脓毒症发生

目的拟利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)方法筛选出与脓毒症发生、预后相关的关键基因,为今后的研究提供线索。方法从基因表达(GEO)数据库中通过筛选数据集中样本数大于100,含有脓毒症患者和健康对照组,且有脓毒症患者预后情况数据集,筛选到了两个数据集GSE26378和GSE54514(下载时间:2020年12月28日),采用WGCNA方法对GSE54514数据集中163例脓毒症患者和健康对照组基因表达进行分析;筛选出与脓毒症发生和预后相关的核心靶基因并分析其功能。结果GSE54514中男性64例,女性99例;平均年龄55.56岁(标准差17.21岁);GSE26378中平均年龄53.75岁(标准差3.21岁)。利用GSE54514数据集进行WGCNA算法筛选绿松色(TURQUOISE)模块作为核心模块,通过基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析提示TURQUOISE模块主要涉及RNA调控表达异常和RNA剪切组成等功能。通过对模块中基因深入分析,筛选出了固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)可以作为核心靶基因。在内部数据集GSE54514中验证SCAP表达,SCAP在脓毒症患者存活组中表达高于死亡组(9.036±0.032 vs 8.857±0.067)(P<0.01),曲线下面积(AUC)=0.64,P=0.02;在健康对照组表达高于脓毒症组(9.190±0.073 vs 8.990±0.030)(P<0.01),AUC=0.62,P=0.04。在外部数据集GSE26378中,SCAP在脓毒症患者存活组中表达高于死亡组(0.886±0.030 vs 0.730±0.061)(P=0.045),AUC=0.69,P=0.04;在健康对照组表达高于脓毒症组(1.154±0.088 vs 0.863±0.078)(P<0.01),AUC=0.71,P<0.01。GSEA分析提示SCAP在内部和外部数据集中均涉及了T细胞受体及糖代谢功能。结论基于WGCNA筛出的SCAP与脓毒症发生和预后相关,可为脓毒症发生和治疗的研究提供参考依据。

甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白基因异亮氨酸796缬氨酸多态性与冠心病、高脂血症的相关研究

目的 :研究湖北汉族人群甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白 (SCAP)基因异亮氨酸 (Ile) 796缬氨酸(Val)多态性 ,探讨该多态性与冠心病、高脂血症的关系。方法 :应用PCR RFLP的分析方法 ,检测 1 5 0名湖北汉族体检健康者、1 32例冠心病和 6 6例高脂血症患者SCAP基因Ile796Val的等位基因频率。结果 :①冠心病、高脂血症、对照组等位基因A的频率分别为 0 .4 5 ,0 .4 8,0 .32 ,等位基因G的频率分别为 0 .5 5 ,0 .5 2 ,0 .6 8。②冠心病、高脂血症与对照组之间的基因型和等位基因的频率差异均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。③冠心病、高脂血症组内AA基因型的TC水平明显高于GG基因型的TC水平 (P <0 .0 5 )。结论 :SCAP基因Ile796Val多态性与冠心病、高脂血症密切相关。提示SCAP基因A等位基因与血浆高胆固醇有着密切的关系 ,可能是罹患高脂血症、冠心病的危险因子。

SCAP-SREBP-1c-ACC1在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用

目的探讨SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路在内质网应激状态下肝细胞脂肪变性中的作用。方法以人肝细胞L02及人肝肿瘤细胞HepG2为研究对象,利用1μmol/L毒胡萝卜素(Thapsigargin)诱导肝细胞建立内质网应激模型,设未处理细胞作为对照;采用酶比色法检测细胞内甘油三酯含量,Real-time PCR法检测固醇调节元件结合蛋白-1c裂解激活蛋白[sterol regulatory element binding protein-1c(SREBP-1c)cleavage-activating protein,SCAP]基因mRNA水平,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78)、SCAP、SREBP-1c、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase 1,ACC1)蛋白的表达水平。结果在内质网应激状态下,实验组两种细胞中甘油三酯水平、SCAP基因mRNA水平以及GRP-78、SCAP、SREBP-1c、ACC1蛋白的表达水平较对照组均明显增加(P均<0.01)。结论已成功建立内质网应激脂肪变性细胞模型。SCAP-SREBP-1c-ACC1信号通路可能介导内质网应激状态下肝细胞脂肪变性。

奶牛SCAP基因的克隆,表达定位及对FASN基因启动子的转录调控

固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（srebpcieavage activating protein,SCAP）是细胞脂肪合成酶的表达调控因子。本研究旨在肝脏L02细胞中研究SCAP对FASN基因启动子的转录调控作用,有助于进一步明确SCAP/SREBP1对于靶基因的转录调控机制。本研究以荷斯坦奶牛组织c DNA为模板,克隆SCAP基因的编码序列,构建pc DNA3.1-SCAP表达载体,将SCAP表达载体转染L02肝脏细胞,采用荧光定量PCR检测SCAP基因m RNA在24 h、48 h、72 h的表达情况;采用免疫荧光的方法对SCAP标记,激光共聚焦观察SCAP蛋白的亚细胞定位;构建FASN基因启动子载体,转染至肝脏细胞,并分别转染pc DNA3.1-SREBP1和pc DNA3.1-SCAP作为处理,荧光素酶报告基因系统分析对FASN启动子活性的影响。结果发现克隆得到SCAP的PCR产物为3 836 bp的片段,通过与pc DNA3.1载体重组后获得pc DNA3.1-SCAP表达载体,经酶切和测序鉴定正确;将pc DNA3.1-SCAP载体转染肝脏细胞培养24 h、48 h、72 h后,Real-time PCR检测发现与对照组相比,48 h时细胞中SCAP基因m RNA的表达倍数增加了21倍（p〈0.001）;激光共聚焦观察发现,DAPI染色的细胞核呈蓝色,免疫荧光标记的SCAP呈红色,二者融合后发现SCAP定位于细胞质;启动子活性检测发现,与对照组相比,SREBP1质粒处理的细胞FASN启动子活性增加了4.1倍（p〈0.001）,而SCAP和SREBP1共同处理细胞FASN启动子活性极显著增加了7.4倍（p〈0.000 1）。试验克隆构建奶牛SCAP基因表达载体,亚细胞定位SCAP蛋白主要位于肝脏细胞质中,表明SCAP可以通过结合SREBP1促进FASN基因启动子的转录。