瘦素对鸡原代前体脂肪细胞增殖分化的影响

【目的】探究不同浓度瘦素对鸡原代前体脂肪细胞增殖分化的影响。【方法】以12日龄科宝肉鸡腹部脂肪为材料进行原代前体脂肪细胞培养,细胞铺板24 h后,试验组细胞以添加了0、50、200、800 ng/m L瘦素的培养基进行培养,每隔24 h换一次液,至72 h。采用CCK8法绘制对照组和瘦素处理组细胞的生长曲线,油红O提取比色法测定脂肪含量变化,Real-time PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPA R酌和SREBP1c的表达。【结果】CCK8法与油红O提取比色法表明,0～800 ng/m L瘦素对鸡前体脂肪细胞的增殖分化无显著影响（P跃0.05）,Real-timePCR结果表明不同浓度的瘦素处理对前体脂肪细胞内脂肪分化关键基因PPA R酌和SREBP1c的表达无显著影响（P跃0.05）。【结论】本试验证明0～800 ng/m L瘦素对鸡前脂肪细胞的增殖和分化无影响。

天麻素通过调节SREBP1c信号通路抑制非酒精性脂肪肝

目的:观察天麻素对高脂高胆固醇饲料(HFHC)诱导的小鼠在类固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)信号通路中的影响,研究天麻素治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法:体内采用8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、天麻素组(50 mg·kg^(-1))、模型组、模型加天麻素组(50 mg·kg^(-1))。小鼠给予HFHC喂养4周建立NAFLD模型,4周后处死并取出小鼠肝脏组织。体外实验选用Huh7细胞,分为5组,游离脂肪酸(200μmol·L^(-1),油酸-棕榈酸2∶1)诱导NAFLD细胞模型;24 h后每组加入不同浓度的天麻素(0、5、10、20、40μmol·L^(-1))继续培养24 h。油红O染色检测小鼠肝脏和Huh7细胞内脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态变化,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三脂(TG)的水平。相关试剂盒检测肝脏TC、TG和游离脂肪酸(FFA)的含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测脂质合成关键蛋白脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC、LDL-C和TG含量显著升高(P<0.01),出现脂肪肝病变且肝内TC、TG和FFA含量显著升高(P<0.01),Huh7细胞脂质蓄积水平显著升高(P<0.01),小鼠和Huh7细胞脂质合成相关基因SREBP1c、FASN、ACC1和SCD1的表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,天麻素治疗后小鼠血清TC、LDL-C和TG水平明显降低(P<0.05,P<0.01),脂肪肝病变明显改善,肝脏TC、TG和FFA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),Huh7细胞脂质蓄积水平明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠和Huh7细胞脂质合成相关基因SREBP1c、FASN、ACC1和SCD1的表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:天麻素能够降低肝内脂质积累与血脂水平,改善HFHC诱导的NAFLD,其作用机制可能与调节SREBP1c脂质合成相关信号通路有关。

NAFLD患者外周血Srebp1c基因启动子甲基化表达水平

目的探讨非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者血浆固醇调节元件结合蛋白1c(Srebp1c)基因启动子甲基化状态。方法选择56名在西南医科大学附属医院消化内科确诊为NAFLD的患者,另选50名健康人群作为对照组。收集一般资料(年龄、性别、身高、体重)。收集两组人群静脉血,血脂和肝功能采用全自动血生化分析仪检测,qPCR检测基因水平表达,Srebp1c启动子甲基化水平采用甲基化特异性PCR检测。结果两组人群的年龄和性别差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组体重、体重指数、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和谷丙转氨酶均高于对照组(t=9.103、3.749、4.550、5.363、2.889、9.783,P均<0.05);相对于对照组,观察组的Srebp1c表达上调(t=46.09,P<0.000 1);对照组和观察组的Srebp1c甲基化率分别为76.00%和19.64%,差异有统计学意义(χ~2=33.751,P<0.000 1)。结论 Srebp1c低甲基化可能在NAFLD患者的发病过程中扮演了重要角色。

血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响。结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6 d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P<0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48%、50%、43%。结论前脂肪细胞分化过程中AngII能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程。

软脂酸对肝癌HepG2细胞脂质沉积的影响和Srebp1c甲基化调控机制

目的观察饱和游离脂肪酸(软脂酸,PA)对HepG2细胞脂质沉积的影响和固醇调节元件结合蛋白1c(Srebp1c)甲基化调控机制。方法体外培养人肝癌细胞系HepG2细胞,对照组不作处理,软酯酸(PA)组用0.2mmol/L的PA刺激细胞。采用油红O染色检测HepG2细胞内脂质沉积情况;qPCR和Western blot分别测定细胞内基因和蛋白表达;甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测HepG2细胞Srebp1c甲基化状态。结果 0.2 mmol/L的PA刺激能使HepG2细胞发生脂质沉积。与对照组比较,PA组HepG2细胞Srebp1c(P=0.004 6)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)(P=0.023 0)和脂肪酸合酶(FAS)(P=0.012 5)的mRNA表达均异常升高,Srebp1c蛋白表达升高(P<0.05),Srebp1c启动子甲基化水平降低(P=0.0253)。结论游离脂肪酸可以导致HepG2细胞脂质沉积性损伤,Srebp1c甲基化程度降低可能是重要原因。