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硅烷法固定ssDNA制作的压电式DNA传感器 被引量:10
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作者 高志贤 房彦军 +3 位作者 王红勇 周焕英 宁保安 晁福寰 《传感器技术》 CSCD 北大核心 2002年第12期60-64,共5页
利用硅烷法将ssDNA固化T方向切割、3.58MHz和10MHz石英晶体金电极上,构建了压电DNA传感器,建立了快速检测葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的方法。优化了固定SEB基因的条件,并用动态法、静态法和斑点杂交法进行了固化效果观察。结果表明:该传... 利用硅烷法将ssDNA固化T方向切割、3.58MHz和10MHz石英晶体金电极上,构建了压电DNA传感器,建立了快速检测葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因的方法。优化了固定SEB基因的条件,并用动态法、静态法和斑点杂交法进行了固化效果观察。结果表明:该传感器2h后,有较好响应;对不同长度DNA探针固化效果进行比较,169bp(即169个碱基)SEB探针固定和杂交效果较好;利用0.5mol/LNaOH进行电极洗脱,时间为45min,电极可以再生,且传感器可以重复使用3次;利用1.2mol/LNaOH和1.2mol/LHCl洗涤电极,该电极可多次再利用;固化好的电极于4℃条件下可以保存三周之久。 展开更多
关键词 硅烷法 ssdna 压电式DNA传感器 葡萄球菌肠毒素B 3-氯基丙基三乙氧基甲硅烷
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谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统优化 被引量:1
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作者 王婷 马洪坤 +3 位作者 赵桂红 蔡柠匀 张德志 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期1-7,共7页
谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌... 谷氨酸棒状杆菌作为重要的微生物细胞工厂,基因组修饰已经成为调节目标代谢物的首要途径。为了提高基因定点突变的编辑效率,建立了高效省时的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统。利用卡那霉素抗性作为筛选标记,构建了1株严谨的单链模式菌M-1,用于验证与统计编辑效率。首先,采用强启动子Ptuf,优化了切割效率;其次,利用重组酶RecT和合理长度与添加量的ssDNA,优化了重组效率。实验结果显示:在启动子Ptuf和RecT的双重作用下,采用滞后链(70bp、12.5μg)优化组合方式,使基因编辑效率提升至(80±5.7)%。由RecT介导的CRISPR-Cpf1/ssDNA基因组编辑系统可在很大程度上加快谷氨酸棒状杆菌代谢工程改造。 展开更多
关键词 CRISPR-Cpf1 ssdna 谷氨酸棒状杆菌 优化 基因组编辑
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癌胚抗原ssDNA核酸适配子的体外筛选及鉴定 被引量:1
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作者 邢福军 查成喜 +1 位作者 王小萍 韩跃武 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第14期1694-1697,共4页
目的通过SELEX技术筛选获得癌胚抗原(CEA)特异性核酸适配子,为建立CEA适配子检测方法和肿瘤靶向治疗奠定实验基础。方法构建长度为88bp的随机ssDNA文库,体外筛选人血清CEA特异性适配子,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测... 目的通过SELEX技术筛选获得癌胚抗原(CEA)特异性核酸适配子,为建立CEA适配子检测方法和肿瘤靶向治疗奠定实验基础。方法构建长度为88bp的随机ssDNA文库,体外筛选人血清CEA特异性适配子,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测特异性适配子结合蛋白。结果经过优化体外筛选条件,经12轮筛选,获得特异性核酸适配子,经SDS-PAGE证实了其识别并特异性结合的物质为人血清CEA。结论经体外12轮筛选,证实了所获得的CEA适配子可特异性地与人血清CEA蛋白结合,为后续建立CEA特异性检测平台提供基础,也为靶向治疗药物的研制提供一定的思路。 展开更多
关键词 癌胚抗原 ssdna 检测 靶向治疗
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抗ssDNA单抗免疫组化法用于检测肿瘤细胞株对化疗药物敏感性的研究 被引量:1
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作者 吴晓燕 徐志伟 +2 位作者 吴国庆 苗乃法 冯永堂 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期456-458,共3页
目的 :应用本室制备的抗单链DNA (ssDNA)单克隆抗体(mAb) ,检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用 ,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 :用血浆峰值浓度 (PPC)的 9种化疗药物 ,分别诱导肿瘤细胞株K5 6 2和He... 目的 :应用本室制备的抗单链DNA (ssDNA)单克隆抗体(mAb) ,检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用 ,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 :用血浆峰值浓度 (PPC)的 9种化疗药物 ,分别诱导肿瘤细胞株K5 6 2和Hep 2的凋亡。用抗ssDNAmAb免疫组化染色法 ,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率。结果 :以抗ssDNAmAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法 ,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞。该法检测证明 ,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡 ,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同。结论 :抗ssDNAmAb免疫组化法 ,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。 展开更多
关键词 单克隆抗体 细胞凋亡 化疗药物 敏感性 ssdna单抗免疫组化法 检测 肿瘤细胞株
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随机ssDNA文库不对称PCR扩增条件的优化及回收效率比较 被引量:2
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作者 周晏丞 曹立亭 +1 位作者 陈露 马跃 《四川畜牧兽医》 2015年第11期33-35,37,共4页
本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增... 本研究开展了SELEX技术中ssDNA文库不对称PCR扩增及回收条件的优化试验,结果得出:20μL不对称PCR反应体系中上下游引物的最佳比例为60∶1,最优循环数为30个循环,回收效率最高的方法为乙醇沉淀法。此条件下,随机ssDNA文库不对称PCR扩增出来的条带清晰、稳定、特异性高,并具有较好的纯化效率。 展开更多
关键词 配基系统进化技术 ssdna文库 不对称PCR DNA纯化
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2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较 被引量:2
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作者 邹绮 王元凯 +4 位作者 毛紫微 杜斌 王恒安 孙建和 严亚贤 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2013年第5期54-60,共7页
体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分... 体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮单克隆抗体 适配子 SELEX ssdna文库
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SSB蛋白与ssDNA相互作用的动力学和可视化研究(英文) 被引量:2
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作者 乔惠丽 陈媛媛 +2 位作者 文祯中 毕利军 阚云超 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期145-150,共6页
研究大肠杆菌单链结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein,SSB)与单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)的相互作用对于了解其在DNA复制、重组和修复中的作用是非常重要的。通过表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR... 研究大肠杆菌单链结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein,SSB)与单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)的相互作用对于了解其在DNA复制、重组和修复中的作用是非常重要的。通过表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)得到了在有、无镁离子的情况下,SSB与ssDNA两者的平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,KD)分别为9.67×10-7M和4.79×10-7M,阐明了镁离子对于两者作用形式的影响。利用原子力显微镜技术分别观察SSB蛋白、ssDNA和SSB-ssDNA复合物的成像,为下一步研究SSB在DNA代谢中作用模式的单分子可视化奠定了基础。 展开更多
关键词 SSB蛋白 单链DNA 相互作用 动力学 可视化
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A theoretical investigation on anomalous switching of single-stranded deoxyribonucleic acid(ssDNA) monolayers by water vapor 被引量:2
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作者 赵新军 高志福 蒋中英 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2015年第4期262-268,共7页
In this paper, we use a molecular theory to study the anomalous switching of ssDNA monolayers. Here, both ssDNA- water and water-water hydrogen bonds and their explicit coupling to the ssDNA conformations are consider... In this paper, we use a molecular theory to study the anomalous switching of ssDNA monolayers. Here, both ssDNA- water and water-water hydrogen bonds and their explicit coupling to the ssDNA conformations are considered. We find that hydrogen bonding becomes a key element in inducing the anomalous switching of ssDNA monolayers. This finding accords well with the experimental observations. Based on our theoretical model, we predict that the anomalous switching induced by water vapor will be applicable to a wide range of hydrogen bonds polymers, and ssDNA-water hydrogen bonds and water-water hydrogen bonds hybridization will lead to the hydrogen-bond network formation of 3D ssDNA monolayers. 展开更多
关键词 molecular theory ssdna monolayers anomalous switching hydrogen bonding
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ssDNA适配体阻断FcγR介导巨噬细胞吞噬作用的研究 被引量:1
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作者 李桢 徐华 +1 位作者 周华友 张印则 《中国输血杂志》 北大核心 2017年第9期981-983,共3页
目的验证ssDNA适配体阻断RhD抗原-抗体的结合,进而阻断FcγR介导巨噬细胞吞噬作用的能力。方法0.2%红细胞悬液分为三组:实验组(加入经ssDNA处理过的RhD IgG单克隆抗体)、空白对照(未处理的红细胞悬液)、阳性对照(加入未经ssDNA处理的RhD... 目的验证ssDNA适配体阻断RhD抗原-抗体的结合,进而阻断FcγR介导巨噬细胞吞噬作用的能力。方法0.2%红细胞悬液分为三组:实验组(加入经ssDNA处理过的RhD IgG单克隆抗体)、空白对照(未处理的红细胞悬液)、阳性对照(加入未经ssDNA处理的RhD IgG单克隆抗体)。37℃孵育30 min。洗涤后加入1∶500的羊抗人IgG Alexa Fluor 488荧光抗体,37℃,30 min。洗涤后流式细胞仪检测。单核细胞单层试验收集6人份外周血单核细胞于37℃混合培养1h,洗去未贴壁细胞。以2∶1体积加入不含荧光抗体的三组红细胞,培养1.5 h后进行瑞氏-姬姆萨染色。镜下观察500个单核细胞,计算平均吞噬指数。结果流式结果显示,阳性对照荧光强度为3 166.33±172.55,而实验组荧光强度仅为307.00±45.18,与空白对照组(287.33±30.50)无显著性差异。MMA实验结果显示,阳性对照组单核细胞平均吞噬指数(7.20±1.48)Cut-off值(0.35),结果为阳性;试验组的吞噬指数(0.07±0.12)低于Cut-off值,结果为阴性。结论 ssDNA与RhD抗体结合后可使RhD抗体丧失与RhD抗原特异性结合的能力,以至于红细胞不会被致敏,为新生儿溶血病的治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 核酸适配体 RhD抗体 单核细胞单层试验 流式细胞术
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电荷对ssDNA与红细胞结合的影响
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作者 邓超干 吴凡 +2 位作者 苏宇清 梁延连 张印则 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期180-182,共3页
目的改变红细胞电荷性质,克服因红细胞与单链DNA均带负电荷而引起的排斥力,达到单链DNA易与红细胞靠近并特异结合的目的。方法以不改变红细胞电荷性质的生理盐水及低离子强度液反应介质为对照组,使用凝聚胺溶液反应介质为试验组,在室温... 目的改变红细胞电荷性质,克服因红细胞与单链DNA均带负电荷而引起的排斥力,达到单链DNA易与红细胞靠近并特异结合的目的。方法以不改变红细胞电荷性质的生理盐水及低离子强度液反应介质为对照组,使用凝聚胺溶液反应介质为试验组,在室温下与ss DNA孵育30 min,并定量检测各组结合于红细胞的单链DNA拷贝数。结果在生理盐水、LISS液、凝聚胺溶液反应介质中,与红细胞结合的单链DNA拷贝数分别为(4.22±2.17)×10~7/μL、(6.13±5.50)×10~7/μL、(8.54±2.97)×10^(10)/μL(n=9)。试验组与对照组间比较P<0.05。结论在凝聚胺溶液反应介质中,携带负电荷的ssDNA可更好地与红细胞结合。与对照组相比,试验组中结合于红细胞的单链DNA拷贝数量级数可提高10~3拷贝/μL。 展开更多
关键词 红细胞 电荷 单链DNA 凝聚胺
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Specific ssDNA concentration in liver tissue as an index of apoptosis in hepatitis C virus-infected patients
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作者 Tadeusz Wojciech Lapiski Anatol Panasiuk +3 位作者 Jerzy Jaroszewicz Oksana Kowalczuk Robert Flisiak Magdalena Rogalska 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第39期6130-6133,共4页
AIM: To evaluate the activity of apoptosis in liver tissue and explore its possible association with hepatic necroinflammation and fibrosis as well as serum hepatitis C virus (HCV)load.METHODS: The studied population ... AIM: To evaluate the activity of apoptosis in liver tissue and explore its possible association with hepatic necroinflammation and fibrosis as well as serum hepatitis C virus (HCV)load.METHODS: The studied population included 50 chronic hepatitis C patients (20 women and 30 men, aged 18-66years). HCV-RNA quantification was performed by two-step real-time quantitative RT-PCR method using the TaqMan technology (reagents of Applera Corporation firm, USA). The morphology of liver tissue was assessed descriptively and scored (necroinflammatory activity and fibrosis). The early apoptosis activity in liver tissue was examined by ssDNA apoptosis ELISA kit, (Chemicon,Germany).RESULTS: The correlation between apoptosis and fibrosis in liver tissue was observed. High intensification of apoptosis was proportional to the increase of fibrosis (ssDNA:16.65× 10-5 μg/g; 12.71x 10-5 μg/g), however, this difference was not statistically significant (P>0.05). Activity of apoptosis in the liver tissue, expressed by ssDNA concentration did not depend on hepatic necroinflammatory changes, HCVRNA viral load, ALT, and AST activity as well as prothrombin time and INR index.CONCLUSION: Fibrosis in the tissue is closely associated with early apoptosis in HCV-infected patients. 展开更多
关键词 ssdna 肝组织 细胞凋亡 丙型肝炎病毒 病理机制
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Pairing Mismatched ssDNA to dsDNA Studied with Reflectometric Interference Spectroscopy Sensor
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作者 武青青 王凯歌 +3 位作者 孙聃 王爽 张琛 赵伟 《Chinese Physics Letters》 SCIE CAS CSCD 2016年第8期151-154,共4页
The interaction between two single-stranded DNA (ssDNA) molecules as pairing to a double-stranded DNA (dsDNA) molecule is studied by the reflectometric interference spectroscopy (RIFS) technology. A nano-porous ... The interaction between two single-stranded DNA (ssDNA) molecules as pairing to a double-stranded DNA (dsDNA) molecule is studied by the reflectometric interference spectroscopy (RIFS) technology. A nano-porous anode alumina membrane coated an Au layer is employed as the sensor substrate. The results indicate that when there are mismatched nucleotide bases, the effective optical thicknesses (OTeft) have obvious difference, and the changes of OTeff are connected with the sensor layer thickness and the effective refractive index. It is also demonstrated that the RIFS technique can be used to precisely detect the ssDNA molecules with individual base mismatched as pairing to dsDNA. 展开更多
关键词 DSDNA is WILL ssdna of with
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Oxidation degree dependent adsorption of ssDNA onto graphene-based surface
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作者 马慧姝 陈济舸 +1 位作者 方海平 雷晓玲 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2021年第10期488-494,共7页
DNA/GO composite plays a significant role in the research field of biotechnology and nanotechnology,and attracts a great deal of interest.However,it is still unclear how the oxidation degree of the graphene-based surf... DNA/GO composite plays a significant role in the research field of biotechnology and nanotechnology,and attracts a great deal of interest.However,it is still unclear how the oxidation degree of the graphene-based surface affects the adsorption process of single-strand DNA(ssDNA).In this paper,based on the molecular dynamics simulations,we find that ssDNA molecule is absorbed on the GO surface in the most stable state with the oxidation degree around 15%.The microscopic mechanism is attributed to the van Der Walls and the electrostatic interactions between the ssDNA molecule and the graphene-based surface,which is accompanied with theπ-πstacking and hydrogen bond formation.The number ofπ-πstacking between ssDNA and GO reaches the maximum value when the oxidation degree is around 15%among all the GO surfaces.Our simulation results also reveal the coexistence of stretched and curved configurations as well as the adsorption orientation of ssDNA on the GO surface.Furthermore,it is found that the absorbed ssDNA molecules are more likely to move on the graphene-based surface of low oxidation degree,especially on pristine graphene.Our work provides the physics picture of ssDNA’s physisorption dynamics onto graphene-based surface and it is helpful in designing DNA/GO nanomaterials. 展开更多
关键词 single-strand DNA(ssdna) molecular dynamics simulation oxidation degrees graphene-based surfaces
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水蒸气诱导单链DNA(ssDNA)刷的构象的反常转变
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作者 赵新军 郭秀珍 《伊犁师范学院学报(自然科学版)》 2017年第1期25-32,共8页
把Flory-Huggins模型推广应用到暴露于水蒸气中的单链DNA(ss DNA)刷体系,研究水蒸气诱导的ss DNA刷构象的反常转变.理论模型考虑ss DNA-水氢键以及水-水氢键作用,结果表明:水蒸气诱导的ss DNA刷构象的反常转变的本质是由于ss DNA-水氢... 把Flory-Huggins模型推广应用到暴露于水蒸气中的单链DNA(ss DNA)刷体系,研究水蒸气诱导的ss DNA刷构象的反常转变.理论模型考虑ss DNA-水氢键以及水-水氢键作用,结果表明:水蒸气诱导的ss DNA刷构象的反常转变的本质是由于ss DNA-水氢键以及水-水氢键作用的结果,当ss DNA刷暴露于水蒸气中,由于ss DNA-水氢键、水-水氢键和ss DNA刷的构象耦合,随着水蒸气浓度的增加,ss DNA刷首先塌缩,然后随着水蒸气浓度继续增加,ss DNA刷开始溶胀;在降低水蒸气浓度的过程中,ss DNA刷则是单调地塌缩;ss DNA刷在增加水蒸气/减少水蒸气的两个过程中构象转变的滞后现象(不可逆性)也是由于氢键效应.通过计算从理论上解释了实验结果,预言了在ss DNA接枝密度足够高的情况下,增加体系中的水蒸气,会形成由ss DNA-水氢键和水-水氢键交错链接的三维网络状凝胶结构. 展开更多
关键词 水蒸气 单链DNA刷 构象转变 氢键
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二巯基苯并咪唑自组装金电极检测和识别ssDNA的电化学传感器
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作者 谭倩倩 《中国西部科技》 2010年第4期58-60,共3页
本文制备了一种新型的用2-巯基苯并咪唑(MBI)自组装金电极检测目标ssDNA的电化学生物传感器。因为MBI可以嵌插到dsDNA的双螺旋结构中,所以可以用Au-MBI选择性地区分ssDNA和dsDNA,通过循环伏安的方法预先表征了Au-MBI的组装情况。将修饰... 本文制备了一种新型的用2-巯基苯并咪唑(MBI)自组装金电极检测目标ssDNA的电化学生物传感器。因为MBI可以嵌插到dsDNA的双螺旋结构中,所以可以用Au-MBI选择性地区分ssDNA和dsDNA,通过循环伏安的方法预先表征了Au-MBI的组装情况。将修饰了ssDNA-A的玻碳电极作为探针,然后将杂交了ssDNA-B或ssDNA-C的电极浸入100oC0.1mol/LNaCl溶液中1min,接着将电极迅速冷却到冰点。在过量的探针ssDNA-A和适量的目标ssDNA-B的杂交溶液中,以组装电极为工作电极通过DPV表征了DNA的杂交情况。发现目标ssDNA-B的浓度与还原峰电流有一定的线性关系。此传感器对目标ssDNA-B的检测范围为1.32×10-8~1.59×10-6mol·L-1,检测限为4.58×10-9mol·L-1。此种传感器制备方便,价格低廉,在连续和定量检测实际的生物样品中目标ssDNA方面具有很大的发展潜力。 展开更多
关键词 ssdna 2-巯基苯并咪唑 自组装膜 玻碳电极 生物传感器
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乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化
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作者 邵可可 史新惠 +2 位作者 崔蕾蕾 马达 邵启祥 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第11期823-826,共4页
目的建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ss DNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率。方法构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成ds DNA文库,再以ds DNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常... 目的建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ss DNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率。方法构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成ds DNA文库,再以ds DNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ss DNA文库,并对二者进行比较。通过改变模板、聚合酶、d NTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件。结果乳液PCR能高效扩增出ds DNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ss DNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15~35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR。在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大。结论乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化(SELEX)技术筛选效率。 展开更多
关键词 乳液PCR 乳液单引物PCR 适配子 指数富集配体进化技术 随机ss DNA文库
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特异识别已分化PC12细胞的ssDNA适体的结构和功能研究 被引量:1
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作者 王成龙 邵宁生 +4 位作者 张明 杨光 张达矜 丁红梅 王会信 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第6期516-518,529,共4页
目的 :研究特异识别已分化PC12细胞的ssDNA适体的二级结构及截短前后的适体与已分化PC12细胞的结合能力。方法 :利用RNAstructure 3.5软件对截短前后的适体的空间结构进行模建 ,体外合成这些截短适体 ,利用流式细胞术和荧光显微镜研究... 目的 :研究特异识别已分化PC12细胞的ssDNA适体的二级结构及截短前后的适体与已分化PC12细胞的结合能力。方法 :利用RNAstructure 3.5软件对截短前后的适体的空间结构进行模建 ,体外合成这些截短适体 ,利用流式细胞术和荧光显微镜研究适体与已分化PC12细胞的结合能力。结果 :单茎环结构是适体与已分化PC12细胞结合的二级结构 ;截短后的适体与已分化PC12细胞的结合能力明显大于与未分化PC12细胞结合能力 ;AP17 38与已分化PC12细胞结合的荧光强度明显大于与未分化PC12细胞结合的荧光强度 ;截短前后的适体均能够特异识别混合物中已分化PC12细胞。结论 :截短后的适体能够保留适体的空间结构 ,而且与已分化PC12细胞的亲合力不会降低。 展开更多
关键词 ssdna适体 结构 功能
原文传递
指数级富集配体的系统进化技术筛选高转移肝癌细胞HCCLM3的ssDNA适配子 被引量:1
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作者 高国生 刘兴晖 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第2期160-162,共3页
目的采用指数级富集配体的系统进化(SELEX)技术筛选高转移肝癌细胞HCCLM3的ssDNA适配子。方法构建长度为71 nt的随机文库,中间为25 bp的随机序列,通过12轮反复的SELEX筛选获得特异性结合HCCLM3细胞的ssDNA适配子,并初步测定筛选的适配... 目的采用指数级富集配体的系统进化(SELEX)技术筛选高转移肝癌细胞HCCLM3的ssDNA适配子。方法构建长度为71 nt的随机文库,中间为25 bp的随机序列,通过12轮反复的SELEX筛选获得特异性结合HCCLM3细胞的ssDNA适配子,并初步测定筛选的适配子与细胞的亲和力,对结合力高的适配子进行克隆测序,用RNA structure 5.3分析适配子序列的二级结构。结果经过12轮正向筛选及6轮低转移肝癌细胞MHCC97-L的反筛后,获得了与HCCLM3细胞具有高亲和力的ssDNA适配子;将第12轮ssDNA经克隆测序获得10条测序结果,其中有4条序列一致,另外有2条序列也一致;二级结构预测可知ssDNA适配子二级结构主要以"发夹型"构型为主。结论成功筛选获得了高亲和力的转移肝癌细胞HCCLM3 ssDNA适配子,为实现适配子靶向性治疗奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 指数级富集配体的系统进化技术 肝癌细胞 ssdna适配子
原文传递
慢性粒细胞白血病ssDNA适配子检测方法的评价
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作者 习静 徐攀 +7 位作者 郭鹏 韩跃武 陈雪丽 张萍 王瑞玲 袁琳 陈丹 马驰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第9期1342-1346,共5页
目的评价慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)ssDNA适配子检测方法的临床诊断应用价值。方法基于前期构建的方法,用ssDNA适配子与K562细胞及临床CML标本结合进行检测,在优化的检测条件下,以美国临床实验室标准化组织(Clinic... 目的评价慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)ssDNA适配子检测方法的临床诊断应用价值。方法基于前期构建的方法,用ssDNA适配子与K562细胞及临床CML标本结合进行检测,在优化的检测条件下,以美国临床实验室标准化组织(Clinical and Laboratory Standard Institude,CLSL)的相关标准为依据,对该方法进行方法学评价,并对方法进行临床诊断性能的评价。结果建立的方法回归方程为:y=1 476.4+495.31 x,r2=0.976 6,拟合度较高;该方法敏感性较高,特异性较强,检测高、中、低浓度的K562细胞的批内变异系数均小于5%,日间变异系数均大于5%;该方法测得的不同浓度CML标本的总平均回收率为78.7%;测得的溶血、黄疸及血脂标本的平均干扰率均>10.0%;ROC曲线下面积为0.867,ssDNA适配子检测CML组、非慢粒类型白血病组、健康对照组标本的敏感度为75%,特异度为77%,阳性似然比为3.26,阴性似然比为0.32,漏诊率为25%,可靠度为0.306,可用度为0.52。结论 CML ssDNA适配子检测方法本身灵敏度高,检测阈值低,特异性强;在临床诊断性能研究中,该方法特异性高,但敏感性较低,具有一定的临床诊断价值。但该方法抗干扰能力弱,重复性较差,且可靠度<0.5,其临床应用还有一定的局限性。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 ssdna适配子 方法学评价 诊断价值
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慢性粒细胞白血病ssDNA适配子PCR扩增条件的优化
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作者 习静 郭鹏 +2 位作者 韩跃武 刘文伟 张雪燕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期422-424,429,共4页
目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)... 目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)、循环次数(12、16、20、24、28、30、35、38、40)及非限制性与限制性引物比例(1∶1、30∶1、50∶1、70∶1、80∶1、100∶1),进行PCR扩增,优化CML ssDNA适配子对称PCR及间接不对称PCR扩增条件,并验证优化的PCR条件的重复性。结果对称PCR扩增的最佳退火温度为44.2℃,最佳循环次数为30次;间接不对称PCR的最佳循环次数为38次,非限制性引物与限制性引物浓度比例为50∶1时,可获得理想的ssDNA和较少的dsDNA;优化的PCR条件重复性较好。结论优化了CML ssDNA适配子的PCR扩增条件,为筛选到特异性的ssDNA适配子提供了参考,也为后续试验奠定了基础。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 ssdna适配子 聚合酶链反应 优化
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