人参皂甙Rb1促进老年大鼠睾丸间质细胞睾酮产生和StAR蛋白表达

目的:探讨人参皂甙Rb1对老年大鼠间质细胞增殖及睾酮产生的影响,分析人参皂甙Rb1对睾酮提升作用的机制。方法:体外分离培养老年大鼠睾丸间质细胞,培养液中分别加入不同浓度Rb1,MTT法测定细胞增殖改变,ELISA法测定培养上清中睾酮水平,用RT-PCR分析间质细胞StAR基因和P450scc基因表达,western blotting方法检测间质细胞StAR和P450scc蛋白表达水平。结果:人参皂甙对间质细胞增殖没有明显影响,老年大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平明显低于青年大鼠,人参皂甙Rb1呈浓度依赖性上调老年大鼠睾丸间质细胞睾酮产生,上调StAR基因和蛋白表达水平,但对P450scc基因和蛋白表达基本没有影响。结论:衰老致睾丸间质细胞睾酮产生能力下降,人参皂甙单体Rb1可通过上调StAR蛋白表达,增强睾酮合成,达到延缓衰老的目的。

StARmRNA在仔猪睾丸组织中的表达研究

类固醇合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)在调节类固醇合成中发挥了重要作用,为了认识StAR蛋白在仔猪性腺发育早期中的表达,以7、14、23、37日龄的仔猪睾丸为研究对象,采用组织原位杂交方法研究了StARmRNA在仔猪睾丸中的表达水平。结果表明:在7、14、23、37日龄的仔猪睾丸中,StARmRNA在睾丸的间质细胞中表达,其中在7日龄StARmRNA表达很弱,14、23、37日龄StARmRNA表达较强,StAR蛋白在这一时期的睾丸间质表达与其合成睾酮的能力一致。

睾酮可通过抑制StAR蛋白的表达调节自身的分泌

为了研究睾酮的自分泌调节机制,选取2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为研究材料。不同浓度的睾酮(0、10mg/mL、20mg/mL、50mg/mL、100mg/mL)与间质细胞共孵育48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液,用放射免疫法(RIA)测定睾酮、hCG和cAMP的浓度。然后用浓度为50mg/mL的睾酮与胆固醇,5mg/mL;孕烯醇酮,500ng/mL;脱氢表雄酮,500ng/mL;雄烯二酮,500ng/mL和22R-羟胆固醇(3μg/mL)共同孵育间质细胞48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液和细胞,用放射免疫法(RIA)测定睾酮,用免疫印迹测定StAR水平。实验结果如下:(1)随着睾酮浓度的增加,睾酮对自身合成的抑制作用逐渐增强,当睾酮浓度为50mg/mL,睾酮分泌、hCG的结合率以及间质细胞内cAMP的浓度分别下降了69.93%、61.24%和52.4%。(2)尽管睾酮抑制了胆固醇和雄烯二酮向睾酮的转化,但对其它几种前体物的转化没有明显影响。(3)睾酮不但抑制了基础水平StAR的表达,而且也抑制了hCG刺激的StAR蛋白的表达,这表明睾酮可以通过抑制StAR蛋白的表达降低自身的合成。

玉米赤霉烯酮对小鼠睾丸间质细胞内StAR蛋白及类固醇合成关键酶表达的影响

为了探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)抑制睾丸间质细胞分泌雄激素的毒性机理,本研究以体外培养的原代小鼠睾丸间质细胞为材料,分别以0(对照组)、1、5、10、20μg·mL-1的ZEA进行染毒,染毒12h后,利用Western-blot和QRT-PCR技术,检测了细胞内类固醇合成快速调节蛋白(StAR)和类固醇合成关键酶(P450scc、3β-HSD、P450c17a1和17β-HSD)在转录和蛋白水平的表达。结果显示,与对照组相比,随着ZEA染毒浓度的升高,StAR转录水平及蛋白水平的相对表达量都呈上升趋势(P<0.05或P<0.01);而类固醇关键酶P450scc、3β-HSD、P450c17a1、17β-HSD的转录水平及蛋白水平的相对表达量都呈下降趋势(P<0.05或P<0.01)。结果表明:ZEA抑制睾丸间质细胞分泌睾酮的一个重要原因是其抑制了睾酮合成通路中类固醇合成关键酶的分泌。

类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)与胆固醇代谢

类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)在胆固醇的代谢中发挥重要的作用。近期研究表明StAR同样表达于肝脏组织中,通过调节胆汁酸的合成,增加胆固醇的排泄。这为脂肪肝等脂类代谢异常类疾病的防治提供了一条新的途径。

金雀异黄素对青年雌性大鼠卵巢组织中雄激素生成关键酶StAR、P450scc、CYP19基因表达的影响

研究金雀异黄素(genistein,GEN)对青年雌性大鼠卵巢内类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,St AR)、胆固醇侧链裂解酶(side-chain cleavage enzyme,P450scc)、细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,CYP19)基因表达的影响。选取40只SD青年雌性大鼠,按体质量随机分为阴性对照组(NC)、GEN低、中、高剂量组及己烯雌酚阳性对照组,剂量组分别灌胃GEN 15、30、60 mg/(kg·d),阳性对照组灌胃己烯雌酚0.5 mg/(kg·d),持续30 d。采用实时荧光聚合酶链式反应检测大鼠卵巢内St AR、P450scc、CYP19 m RNA水平;Western blot法检测卵巢内St AR、P450scc的蛋白水平。给予GEN后,与NC组相比,GEN中、高剂量组St AR、P450scc、CYP19 m RNA相对表达量显著增高(P<0.05)。卵巢内St AR、P450scc的蛋白检测结果显示:St AR表达量在GEN高剂量组增加明显(P<0.05);P450scc表达量在GEN中、高剂量组均增加明显,且与NC组相比差异显著(P<0.05)。得出结论为30~60 mg/kg的GEN可增强青年雌性大鼠体内雄激素生成关键酶的表达水平,影响卵泡的发育和成熟。

鸡StAR基因非同义单核苷酸多态性的生物信息学分析

以鸡StAR基因为研究对象,在分子水平上探究StAR编码区功能性位点。利用SIFT,PolyPhen-2,PANTHER和PROVEAN等4种方法预测对nsSNPs进行分析预测有害位点,使用SWISS-MODEL,Consurf server,Pymol,I-Mutant 3.0等软件对有害nsSNPs位点进行蛋白质的空间结构、氨基酸间氢键的改变及蛋白稳定性等相关分析。结果表明:从StAR基因的nsSNPs位点筛选出来6个主要有害突变(V125G,M144R,N148T,T204P,C224W和L247Q)。其中,M144R,N148T和T204P这3个位点氢键数目和空间结构发生变化,M144R,N148T,C224W和L247Q这4个位点降低了StAR蛋白质的稳定性,且M144R,N148T,T204P,C224W和L247Q均为高保守性位点。预测M144R,N148T,T204P,C224W和L247Q这5个位点可能为鸡StAR基因的潜在功能性位点。

Gal-3及StarD13在卵巢癌组织及癌旁组织中的表达差异及临床意义

目的探讨半乳糖凝聚素-3(Gal-3)、类固醇敏感性调节蛋白相关脂类转运体结构域13(StarD13)在卵巢癌组织及癌旁组织中的阳性表达差异及临床意义。方法选取2018年11月至2021年1月该院收治的106例上皮性卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学检测组织中Gal-3、StarD13阳性表达情况,分析其与患者临床病理、顺铂化疗耐药的关系。结果卵巢癌组织中Gal-3阳性表达率高于癌旁组织,StarD13阳性表达率低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);Gal-3阳性表达率与卵巢癌患者组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05),StarD13阳性表达率与卵巢癌患者国际妇产科联盟临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);顺铂耐药组Gal-3阳性表达率高于顺铂敏感组,StarD13阳性表达率低于顺铂敏感组,差异均有统计学意义(P<0.05);受试者工作特征曲线分析结果显示,Gal-3、StarD13预测顺铂耐药的曲线下面积(AUC)分别为0.796、0.789,二者联合检测的AUC为0.923,高于单项指标检测的预测价值(P<0.05)。结论与癌旁组织比较,卵巢癌组织Gal-3阳性表达率偏高、StarD13阳性表达率偏低,二者均与卵巢癌患者淋巴结转移有关,能在一定程度上预测卵巢癌的病情进展及顺铂化疗的耐药情况。

MMP9、AEG-1及EphA7蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、星形细胞提升基因-1(AEG-1)、络氨酸蛋白激酶受体A7(EphA7)蛋白在中耳鳞癌组织中的表达及其意义。方法选取65例中耳鳞癌患者作为研究对象,均行手术治疗,术中采集癌组织及癌旁正常组织送检,检测MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达情况,比较癌组织与癌旁正常组织内上述表达差异;并分析MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白表达与年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度等病理特征的关系。结果癌组织内MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白阳性表达患者Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移占比高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MMP-9、AEG-1、EphA7蛋白在中耳鳞癌组织内呈高表达状况,且其表达与肿瘤分期、淋巴结转移关系密切,或可作为临床治疗的新靶点。

阳江豆豉Aspergillus oryzae分离鉴定及其中性蛋白酶分析

对阳江豆豉分离菌株进行多项分类鉴定,并对该菌中性蛋白酶基因克隆和序列分析,预测菌株中性蛋白酶二级结构。采用18SrRNA基因序列鉴定菌株,并以菌株中性蛋白酶的氨基酸序列为基础,应用DNA Star Protean软件对蛋白酶的二级结构进行预测。通过形态和18SrRNA基因序列分析,鉴定该菌株为米曲霉Aspergillus oryzae。通过RT-PCR和PCR从菌丝体中克隆了基因序列,与产中性蛋白酶有关的核苷酸序列有2 113bp,推测出634个氨基酸序列。

类固醇激素合成急性调节蛋白研究进展

类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)是类固醇激素合成过程中的重要调节因素。它具有高度的组织特异性,位于相关细胞的线粒体膜上,参与类固醇激素的前体———胆固醇由线粒体外膜向线粒体内膜的转运,此过程是类固醇激素合成的限速步骤。最近的研究表明,StAR的转录及翻译水平不仅受cAMP-PKA信号通路的影响,而且还受多种促性腺激素、细胞因子的调控,从而影响着机体类固醇激素的合成。

何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织P450胆固醇侧链裂解酶和类固醇激素急性调节蛋白的影响

目的探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和类固醇激素急性调节蛋白(StAR)的影响。方法 60只雄性SD大鼠,随机分为安静对照组(A组)、安静何首乌饮组(B组)、模型组(C组)、自然恢复组(D组)、何首乌饮治疗组(E组);何首乌饮预防组(F组),每组10只。C、D、E和F组大鼠复制运动疲劳动物模型,其中F组每天训练前给何首乌饮20g/(kg.d)(含生药4.8kg/L)灌胃60 d。模型成功后E组给何首乌饮20 g/(kg.d)(含生药4.8kg/L)灌胃治疗60 d。采用美国Beckmancoulter Unicel Dxl 800仪器测定睾酮水平;采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测各组睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达变化。结果 P450scc免疫组织化学阳性颗粒主要表达于间质细胞及精母细胞,B组和F组表达最强,C组最弱,与其余各组相比差异有统计学意义。P450scc蛋白和mRNA表达变化为B、F组明显高于E、D和A组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A组和D组以及B组和F组两两之间差异无显著性;StAR免疫组织化学阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质,阳性强度表现为E组和F组最强,C组最弱。StAR蛋白和mRNA表达变化为E和F组明显高于A、D组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A、D组之间无差异。结论何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达。

八角茴香提取物在冷藏调理猪肉饼中抗氧化及抑菌效果的研究

探讨不同剂量八角茴香提取物在4℃冷藏过程中对调理猪肉饼抗氧化能力、抑菌效果和品质特性的影响。将0.03%、0.06%和0.09%的八角茴香提取物分别添加到调理猪肉饼中,测定其在10 d冷藏过程中羰基含量、TBARS值（硫代巴比妥酸值,thiobarbituric acid reactive substance）、菌落总数、pH值、颜色、质构、出品率和感官指标的变化。结果表明：与对照组相比,添加八角茴香提取物的各处理组在冷藏4和7 d后表现出显著的抗蛋白氧化效果（P〈0.05）,且0.06%和0.09%处理组在10d冷藏过程中效果与0．02％BHT（二丁基羟基甲苯，butylated hydroxytoluene）组相当，这2个处理组在冷藏4、7和10d后抗脂肪氧化效果也显著高于对照组（P〈0．05），其中0．09％A角茴香提取物处理组与0．02％BHT组效果相当。添加提取物的各处理组冷藏4d后抑菌效果与对照组相比显著升高（P〈0．05）。在1～4d的冷藏过程中，对照组的a^＊值（红度值，redness）显著降低（P〈0．05），而添加提取物的各处理组a^＊值没有显著变化（P〉0．05）。在冷藏7和10d后，添加提取物的肉饼咀嚼性均显著升高（P〈0．05）。0和7d时的肉饼感官得分均以0．06％A角茴香提取物处理组最高，其色泽、香气及总体可接受度得分与对照组相比均显著上升（P〈0．05）。此外，添加八角茴香提取物没有显著影响肉饼的pH值和出品率。结论：八角茴香提取物在猪肉饼中具有较好的抗氧化和抑菌效果，并且在一定程度上能改善肉饼颜色，提高其感官品质。

京星肉鸡杂交配套效果与其亲本某些性状的遗传差异研究

经杂交组合试验筛选出京星２０１和１０２肉鸡的母系口型矮洛克鸡Ｄ１、Ｄ２系及其配套父系Ａ系、Ｈ系和Ｂ系，并进行了血型和血浆蛋白质多态基因群体遗传学分析，发现凡优良杂交组合中的父系（Ａ、Ｈ系）与母系（Ｄ１、Ｄ２系）遗传距离远。父系纯合系数较高，母系较低。这些均与实际杂交结果基本一致。

类固醇合成相关酶在小鼠不同组织中的表达

利用RT-PCR和Western-blotting技术分析了胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟甾脱氢酶(3-βHSD)、C17-20裂解酶(P450c17)、StAR mRNA和蛋白在成年昆明小白鼠心脏、脾、肝、肾中的表达。结果显示,StAR mRNA及其蛋白、P450scc mRNA在以上组织中均有表达;3-βHSD在肾中有较强的表达,在其他组织的表达较弱;P450c17在上述组织中无明显的表达,但在睾丸中有明显的表达。这表明,心脏、脾、肝、肾均具有合成类固醇的能力,但合成类固醇的类型存在一定的差异。

类固醇激素合成急性调节蛋白与动脉粥样硬化

类固醇激素合成急性调节蛋白StAR在胆固醇转化为类固醇激素的过程中具有重要作用。StAR表达于血管内皮细胞中,影响胆固醇代谢并受胆固醇、低密度脂蛋白、25-羟基胆固醇等脂类物质的调节,StAR可能参与脂质代谢平衡并在动脉粥样硬化的防治中起到重要作用。

高效氯氰菊酯对小鼠卵巢生殖功能的影响及维生素E的干预作用

为探究高效氯氰菊酯(beta-cypermethrin,β-CP)对雌性小鼠卵巢生殖功能的影响及维生素E (vitamin E, VE)的干预作用,将雌性昆白小鼠随机分为6组:空白对照组(花生油处理)、β-CP不同剂量(10、20、40 mg/kg)处理组、VE保护组(20 mg/kgβ-CP+20 mg/kg VE)和VE组(20 mg/kg VE),连续灌胃10 d。灌胃结束后取小鼠卵巢组织,观察组织结构的病理变化,采用免疫组化法、蛋白免疫印迹试验及RT-PCR方法检测卵巢中StAR蛋白含量及casp-3、casp-8、INHα和INHβB基因mRNA表达的变化。结果显示:与对照相比,10、20和40 mg/kg的β-CP处理均使小鼠卵巢组织结构发生了损伤,使组织中StAR蛋白的浓度分别降低了18.8%、36.3%和40.3%,casp-3基因的表达分别升高了16.0%、26.7%和52.9%,INHα基因的表达分别升高了34.5%、83.6%和228.7%,INHβB基因的表达分别升高了7.5%、39.2%和52.7%;20和40 mg/kg的β-CP处理使得casp-8基因的表达分别升高了27.1%和36.7%。上述处理组与对照组的差异均达显著水平(P<0.05)。与20 mg/kgβ-CP处理组相比,VE保护组的StAR蛋白含量也显著增多(P<0.05)。研究表明,β-CP对小鼠卵巢具有毒性作用,这与β-CP抑制StAR蛋白的合成,上调casp-3、casp-8、INHα及INHβB基因的表达有关;添加VE对小鼠卵巢有一定的保护作用,这与VE可减弱β-CP对StAR蛋白合成的抑制作用有关。

黄连素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢血供的影响

目的:探讨黄连素对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢血供的影响。方法:30只大鼠随机分为模型组、实验组和阳性对照组,采用脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射构建PCOS大鼠;另选10只仅皮下注射大豆油作为对照组,1次/d,连续注射20 d。实验组和阳性对照组分别灌胃黄连素(80 mg/kg)和罗格列酮(3 mg/kg),模型组和对照组灌胃生理盐水(10 mL/kg),1次/d,连续干预22 d。检测大鼠血清睾酮(T)和游离睾酮(FT)含量,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠卵巢组织形态及微血管密度(MVD),原位杂交法与免疫组化法分别检测大鼠卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平与甾体类生成快速调节蛋白(StAR)蛋白表达。结果:模型组大鼠卵巢组织MVD、VEGF mRNA表达及StAR蛋白相对表达量较对照组升高,实验组和阳性对照组较模型组降低,且实验组低于阳性对照组(P<0.05)。结论:黄连素可通过调控PCOS大鼠卵巢组织血供及血管生成而改善卵巢组织形态,同时可通过下调StAR蛋白表达改善高雄激素血症。

先天性类脂质性肾上腺皮质增生症临床及基因突变特点:病例报告及文献复习

目的探讨类固醇生成急性调控蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)基因突变致先天性类脂质性肾上腺皮质增生症(congenital lipoid adrenal hyperplasia,CLAH)的临床特征及分子遗传学特点。方法回顾性分析2020年1月广东省妇幼保健院收治的1例CLAH患儿的临床资料,采用高通量测序及Sanger测序进行基因分析。在万方数据库、中国知网、PubMed等数据库中检索StAR基因突变致CLAH的相关文献,检索时间为2000年1月1日至2020年12月31日,对文献报道的病例结果进行整理分析。结果本例患儿在4月龄发现反复呕吐、皮肤色素沉着等症状,实验室检查发现低血钠、高血钾,皮质醇、17-羟孕酮、雄烯二酮、睾酮、孕酮等类固醇激素均明显低下。肾上腺CT示双侧肾上腺正常结构消失。基因检测发现存在StAR基因c.772C>T(p.Q258X)及c.229C>T(p.Q77X)复合杂合突变,父母验证发现上述2个突变分别遗传自其父亲和母亲,确诊为StAR基因突变致CLAH。经糖、盐皮质激素替代治疗后症状逐渐好转,随访至1周岁,生长发育正常。本研究经文献检索,共检索到中文文献10篇,英文文献4篇,合并本例共报道32例CLAH。综合分析显示大部分CLAH患儿在婴儿期发病,常见的临床表现依次为皮肤色素沉着、呕吐和生长发育迟缓,社会性别均为女性;实验室检查提示大部分患儿有低钠血症、高钾血症,皮质醇、17-羟孕酮、雄烯二酮、睾酮等类固醇激素明显低下;经糖、盐皮质激素替代治疗后监测生长发育均正常;StAR基因突变的常见位点为c.772C>T(p.Q258X)。结论CLAH为先天性肾上腺皮质增生症的罕见类型,常在婴儿期起病,常表现为皮肤色素沉着,水、电解质紊乱,外阴呈女性化等。及时、合适的激素替代治疗可以改善患儿临床表现及预后,基因检测有助于CLAH的诊断。p.Q258X突变可能是中国人群StAR基因的热点突变。

脑蛋白水解物对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的修复作用及其胃漂浮片处方的优化

目的:检测脑蛋白水解物(BPH)对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的修复作用,运用星点设计-效应面法对BPH胃漂浮片的处方进行优化。方法:将对数生长期PC12细胞分为正常对照组、模型组(300μmol·L-1 H2O2)、BPH组、人工胃液处理的BPH(GBPH)组、人工肠液处理的BPH(IBPH)组、人工胃液处理的BPH片(GBPH-T)组和人工胃液处理的BPH漂浮片(GBPH-FT)组(后5组均加不同条件处理的20、40、60、80和100mg·L-1BPH),另设空白对照组;正常对照组不做任何处理,空白对照组只加培养基,其他各组采用300μmol·L-1 H2O2孵育3h造成损伤模型。采用MTT法检测细胞活力;利用Design-expert8.0.6Trial软件,将HPMC-K4M、十八醇和丙烯酸树脂Ⅱ号用量作为考察因素,以8h累积释放度为评价指标,优化处方。结果:与正常对照组比较,60mg·L-1 BPH组细胞活力明显升高(P<0.05);与模型组比较,BPH、IBPH、GBPH和GBPH-FT组细胞活力明显升高(P<0.05或P<0.01);与BPH组比较,IBPH组细胞活力明显降低(P<0.05),GBPH组细胞活力差异无统计学意义(P>0.05);与GBPH-T组比较,GBPH-FT组细胞活力明显升高(P<0.05)。优化处方为BPH 20mg,乳糖10mg,硬脂酸镁0.4mg,微晶纤维素20mg,HPMC-K4M27mg,十八醇63mg,丙烯酸树脂Ⅱ号13mg;BPH胃漂浮片均在5s内起漂,持续漂浮>8h,8h累积释放度实测值与预测值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BPH对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤具有修复作用。星点设计-效应面法预测性和重复性良好,合理可行,可用于BPH胃漂浮片处方的优化。