肾上腺StAR/P450scc介导乙醇孕期暴露所致的IUGR发生机制

目的孕期乙醇暴露可导致严重的生殖毒性。甾体合成急性调节蛋白(StAR)和P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)是甾体激素合成的限速酶,甾体激素在胎儿生长发育过程中起着重要作用。本实验观察了孕中晚期乙醇连续暴露对胎鼠生长发育的影响,并探讨其导致IUGR的可能机制。方法雌鼠于6PM按雌雄比2∶1合笼,次晨观察雌鼠阴栓,查到阴栓之日为受孕第0天。于孕第11天开始,给予乙醇6.4g/(kg.d)灌胃。孕第17天处死孕鼠,观察孕鼠体重增长率、IUGR发生率以及胎鼠的体重、身长、尾长和胎盘重,检测孕鼠血清皮质酮水平,孕鼠肾上腺StAR/P450scc、胎盘11β-羟类固醇脱氢酶-2(11β-HSD2)和胎鼠肾上腺StAR/P450scc的mRNA水平。结果和正常对照组相比,乙醇暴露组孕鼠体重增长率在第17天时明显减慢(P<0.01),胎儿体重、身长、尾长及胎盘重量均有明显降低(P<0.01),胎鼠IUGR发生率明显增高(88.2%,P<0.01)。孕鼠肾上腺StAR/P450scc的mRNA水平显著升高(P<0.01),但孕鼠血清皮质酮水平无明显改变,同时胎盘11β-HSD2、胎鼠肾上腺StAR/P450scc的mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论孕中晚期乙醇暴露可致小鼠IUGR发生,其机制可能与乙醇影响母体和胎儿肾上腺甾体激素合成功能,降低胎盘甾体激素灭活功能,进而影响胎儿生长发育有关。

微波辐射对大鼠睾丸StAR、P450scc基因表达影响

目的 研究微波暴露后大鼠睾丸组织类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenicacuteregulatoryprotein ,StAR) ,细胞色素P4 5 0胆固醇侧链裂解酶(cytochromeP4 5 0Cholesterosidechainlyase ,P4 5 0scc)mRNA表达的变化和对睾酮分泌的影响,探讨微波暴露对成年雄性大鼠性功能影响的机制。方法 观测微波暴露后大鼠性功能,以扑捉潜伏期(capturelatentperiod ,CLP)和扑捉次数(capturetimes,CT)作为判别指标;采用RT PCR方法和放射免疫方法分别测定微波暴露后3,6 ,2 4 ,72h睾丸组织中StAR、P4 5 0sccmRNA水平及血清睾酮含量。结果 微波暴露后3h ,观测到雄性大鼠CLP明显延长(P <0 . 0 1) ,CP明显减少(P <0 .0 1) ,在观测的72h内,大鼠的性行为都较对照组明显下降。血清睾酮含量和睾丸组织StRA、P4 5 0sccmRNA变化有一致性,即在微波暴露后3h ,分别较对照降低83 .1% ,5 7. 3% ,5 3. 6 % (P <0. 0 1) ,6h略有回升,但仍明显低于对照组,2 4h恢复到正常水平,72h再次出现明显降低,分别较对照组降低5 7 .6 % ,39. 5 % ,5 3 .5 % (P <0 . 0 1)。结论 微波暴露可影响睾丸间质细胞StAR、P4 5 0sccmRNA表达而降低睾酮的合成,进而对雄性大鼠性行为造成影响。

高脂血症对小鼠睾丸StAR和P450 scc表达的影响及辛伐他汀的干预作用

目的探讨高脂血症(HL)影响小鼠睾丸睾酮合成机制及辛伐他汀(SIMV)的干预作用。方法 18只C57BL/6J雄性小鼠随机均分为3组:HL组、SIMV组和正常对照组(CTRL组);4个月后测血脂、体重;3β-HSD免疫组化法检测睾丸间质细胞;RT-PCR法和Western blot法检测类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)与细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)的表达。结果①HL组和SIMV组体重、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显高于CTRL组(P<0.05);SIMV组体重和TC比HL组显著下降(P<0.05),LDL-C无明显变化。②HL组StAR和P450scc的mRNA与蛋白表达较CTRL组显著下调(P<0.05,P<0.01);SIMV组较HL组则两者表达均升高(P<0.01)。③3β-HSD免疫组化染色显示各组小鼠睾丸间质细胞数差异无统计学意义。结论 SIMV可以改善HL引起的睾丸间质细胞合成睾酮能力下调。

金雀异黄素对青年雌性大鼠卵巢组织中雄激素生成关键酶StAR、P450scc、CYP19基因表达的影响

研究金雀异黄素(genistein,GEN)对青年雌性大鼠卵巢内类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,St AR)、胆固醇侧链裂解酶(side-chain cleavage enzyme,P450scc)、细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,CYP19)基因表达的影响。选取40只SD青年雌性大鼠,按体质量随机分为阴性对照组(NC)、GEN低、中、高剂量组及己烯雌酚阳性对照组,剂量组分别灌胃GEN 15、30、60 mg/(kg·d),阳性对照组灌胃己烯雌酚0.5 mg/(kg·d),持续30 d。采用实时荧光聚合酶链式反应检测大鼠卵巢内St AR、P450scc、CYP19 m RNA水平;Western blot法检测卵巢内St AR、P450scc的蛋白水平。给予GEN后,与NC组相比,GEN中、高剂量组St AR、P450scc、CYP19 m RNA相对表达量显著增高(P<0.05)。卵巢内St AR、P450scc的蛋白检测结果显示:St AR表达量在GEN高剂量组增加明显(P<0.05);P450scc表达量在GEN中、高剂量组均增加明显,且与NC组相比差异显著(P<0.05)。得出结论为30~60 mg/kg的GEN可增强青年雌性大鼠体内雄激素生成关键酶的表达水平,影响卵泡的发育和成熟。

兔抗大鼠神经甾体合成关键酶P450scc抗体的制备、特性鉴定及应用

目的: 制备兔抗大鼠神经甾体合成关键酶P450侧链裂解酶 (rP450sidechaincleavage, rP450scc)合成肽片段的抗体, 并检测rP450scc在大鼠脑组织及神经细胞中的表达。方法: 利用多肽固相合成法 (Fmoc法 )合成对称的 8分支 16肽rP450scc多重抗原肽片段 (rP450scc- 16), 并以其免疫雄性新西兰兔制备抗rP450scc -16抗体。采用ELISA、Westernblot和免疫细胞化学染色法鉴定抗rP450scc- 16抗体的特性。结果: 于末次免疫后 5d, 动脉放血分离血清, 用ELISA法检测抗rP450scc -16抗体的效价为 1∶6 400。Westernblot检测显示, 抗rP450scc- 16抗血清与大鼠的脑、睾丸及肾上腺组织蛋白于相对分子质量为 50 000处出现一条特异性的条带。用抗rP450scc -16抗体进行免疫细胞化学染色显示, 在正常大鼠的下丘脑、皮质、海马等区及培养的胶质细胞胞质中均可见棕色颗粒。结论: 制备出高特异性的兔抗rP450scc- 16抗体, 该抗体可检测rP450scc在正常大鼠脑组织中的表达和分布。

细胞色素P450scc在人早期胎盘中的表达(简报)

人妊娠期间,胎盘合成大量的类固醇激素,与妊娠的启动、维持、分娩以及胎儿的发育均存在密切的关系[1].

PCPA对大鼠大脑皮质P450scc、CB1R、MAP2基因表达的影响及酸枣仁汤的干预作用研究

目的:研究PCPA对大鼠大脑皮质P450scc、CB1R、MAP2mRNA表达的影响,探讨酸枣仁汤治疗失眠的潜在机制。方法:SPF级SD大鼠50只,随机分为正常组、对照组、PCPA组、酸枣仁汤组、PCPA+酸枣仁汤组,每组10只。根据实验动物分组采取相应处理,RT-PCR检测大鼠大脑皮质P450scc、CB1R、MAP2mRNA的表达情况。结果:与对照组相比,PCPA组P450scc mRNA表达增加(P<0.05),CB1RmRNA表达下降(P<0.01),MAP2mRNA表达降低(P<0.05),差异具有统计学意义。与PCPA组比较,PCPA+SZRD组P450scc mRNA表达降低(P<0.05),CB1R mRNA表达增加(P<0.05),MAP2mRNA表达增加(P<0.01),差异具有统计学意义。对照组与正常组、对照组与SZRD组比较,P450scc、CB1R、MAP2mRNA表达均无统计学差异(P>0.05)。结论:PCPA能导致大鼠大脑皮质P450scc mRNA表达增加,CB1R、MAP2mRNA表达下降,酸枣仁汤能降低P450scc mRNA表达,增加CB1R、MAP2mRNA表达,提示酸枣仁汤治疗失眠的机制可能与中枢神经甾体及其受体有关。

何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响

目的探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)蛋白表达的变化。方法选用10~20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集。采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型。实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组。结果衰老模型组Leydig细胞St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P<0.01)。另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P<0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组。结论何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞St AR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老。

何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织P450胆固醇侧链裂解酶和类固醇激素急性调节蛋白的影响

目的探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和类固醇激素急性调节蛋白(StAR)的影响。方法 60只雄性SD大鼠,随机分为安静对照组(A组)、安静何首乌饮组(B组)、模型组(C组)、自然恢复组(D组)、何首乌饮治疗组(E组);何首乌饮预防组(F组),每组10只。C、D、E和F组大鼠复制运动疲劳动物模型,其中F组每天训练前给何首乌饮20g/(kg.d)(含生药4.8kg/L)灌胃60 d。模型成功后E组给何首乌饮20 g/(kg.d)(含生药4.8kg/L)灌胃治疗60 d。采用美国Beckmancoulter Unicel Dxl 800仪器测定睾酮水平;采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测各组睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达变化。结果 P450scc免疫组织化学阳性颗粒主要表达于间质细胞及精母细胞,B组和F组表达最强,C组最弱,与其余各组相比差异有统计学意义。P450scc蛋白和mRNA表达变化为B、F组明显高于E、D和A组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A组和D组以及B组和F组两两之间差异无显著性;StAR免疫组织化学阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质,阳性强度表现为E组和F组最强,C组最弱。StAR蛋白和mRNA表达变化为E和F组明显高于A、D组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A、D组之间无差异。结论何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达。

大鼠P450侧链裂解酶抗原决定簇多参数预测及合成

目的预测大鼠P450侧链裂解酶(P450scc)的抗原表位,确定合成肽序列,并合成八分枝肽,制备多克隆抗体。方法根据P450scc的氨基酸序列,采用GOLDKEY核酸及蛋白质分析软件,多参数预测P450scc的抗原表位,筛选并确定合成肽序列。采用的方案包括抗原性、Hopp&Woods亲水性、可及性、柔韧性、电荷分布参数、二级结构β转角和万氏综合表位参数方案。利用固相合成法,在Rink树脂上合成八分枝赖氨酸核心树脂,并在此基础上合成八分枝肽,用于制备抗体。结果将P450scc的羧基端16肽确定为合成肽序列(LKQDLGSTMPRKGDTV),约Mr8000。固相合成获得目的肽约30mg,经鉴定纯度达到90%以上。结论P450scc抗原表位预测及八分枝肽固相合成,为利用该合成肽制备抗体提供了一条简捷的途径。

睾丸中细胞色素P450酶的生物学特性及调控

睾丸中两种细胞色素P450酶——细胞色素P450侧链裂解酶和细胞色素P450 17α羟化酶对睾酮的生成起重要作用,从而保证男性生殖系统正常发生、分化和成熟。本文综述了这两种酶的生物学特性以及在激素、细胞因子和转译水平等几方面的调控。

Cox7a2对睾酮合成及StAR、P450scc和3β-HSD蛋白表达影响研究

目的研究Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leyidg细胞中过农达对LH诱导的睾酮合成及对StAR(睾酮合成调节关键蛋白),P450scc(胆同醇侧链裂解酶),3β—HSD(3β-羟基甾脱氢酶)蛋白表达的影响。方法构建Cox7a2荧光表达载体,转染TM3小鼠睾丸Leydig细胞,融合蛋白表达及LH诱导刺激后,ELISA测定细胞上清液中睾酮含量,Western blot检测StAR蛋白、P450scc和3β-HSD酶的表达变化。结果Cox7a2在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中过表达抑制LH诱导的睾酮合成,降低StAR蛋白的表达,对P450scc和3β-HSD的蛋白表达没有明显影响。结论在TM3小鼠睾丸Leydig细胞中,Cox7a2至少通过抑制类固醇快速调节蛋白StAR的表达,进而抑制LH诱导的睾酮合成。

邻苯二甲酸二乙基己基酯暴露对青春期大鼠卵巢StAR、P450scc基因表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对大鼠卵巢组织类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达的影响。方法取青春期雌性SD大鼠32只,随机分为对照组(8只)和DEHP(低、中、高)3个实验组,每组各8只。按10、100和1000 mg/(kg·d)DEHP分别对各实验组大鼠灌胃,并用溶剂(玉米油)作为对照为对照组灌胃。连续灌胃10天,取大鼠卵巢组织提取总mRNA,逆转录PCR(RT-PCR)测定StAR和P450scc基因表达水平。结果大鼠体重保持上升;高剂量组大鼠卵巢重量较对照组降低(P<0.05);中剂量、高剂量组大鼠卵巢组织StAR、P450scc mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 DEHP体内暴露可能降低StAR、P450scc基因的转录水平。

人参皂甙Rb1促进老年大鼠睾丸间质细胞睾酮产生和StAR蛋白表达

目的:探讨人参皂甙Rb1对老年大鼠间质细胞增殖及睾酮产生的影响,分析人参皂甙Rb1对睾酮提升作用的机制。方法:体外分离培养老年大鼠睾丸间质细胞,培养液中分别加入不同浓度Rb1,MTT法测定细胞增殖改变,ELISA法测定培养上清中睾酮水平,用RT-PCR分析间质细胞StAR基因和P450scc基因表达,western blotting方法检测间质细胞StAR和P450scc蛋白表达水平。结果:人参皂甙对间质细胞增殖没有明显影响,老年大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平明显低于青年大鼠,人参皂甙Rb1呈浓度依赖性上调老年大鼠睾丸间质细胞睾酮产生,上调StAR基因和蛋白表达水平,但对P450scc基因和蛋白表达基本没有影响。结论:衰老致睾丸间质细胞睾酮产生能力下降,人参皂甙单体Rb1可通过上调StAR蛋白表达,增强睾酮合成,达到延缓衰老的目的。

雄蚕益肾方对肝郁肾虚阳痿大鼠性腺轴及睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达的影响

目的:探讨雄蚕益肾方对肝郁肾虚阳痿大鼠性腺轴及睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达的影响。方法:50只8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、他达拉非组、疏肝益肾组和雄蚕益肾方低、中、高剂量组,采用氢化可的松注射液肌注加束缚四肢复合造模方法连续14d诱发肝郁肾虚阳痿模型。造模成功后,他达拉非组给予他达拉非片溶液0.52mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,疏肝益肾组给予疏肝益阳胶囊溶液0.3125g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,雄蚕益肾方低、中、高剂量组给予10.4、20.8、41.6g·kg^(-1)·d^(-1)雄蚕益肾方溶液灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,各组每日均早、晚各灌胃1次,连续28d。ELISA法测定血清中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量,HE染色光镜下观察睾丸微细结构,免疫组化法测定睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中T含量及睾丸中P450scc、StAR、NR5A1表达均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,疏肝益阳组和雄蚕益肾方各剂量组血清T及睾丸中P450scc表达均显著升高(P<0.05);雄蚕益肾方各剂量组大鼠睾丸中StAR表达均显著升高(P<0.05),血清FSH水平均显著降低(P<0.05);雄蚕益肾方高、中剂量组大鼠睾丸中NR5A1表达显著升高(P<0.05)。结论:雄蚕益肾方可调节性腺轴和提高P450scc、StAR、NR5A1表达。

StAR——类固醇激素合成急性调节蛋白

类固醇激素合成急性调节蛋白 (StAR)是类固醇激素合成过程中的重要调节因素。它具有高度的组织特异性 ,位于相关细胞的线粒体膜上 ,参与类固醇激素的前体胆固醇由线粒体外膜向线粒体内膜的转运 ,此过程是类固醇激素合成的限速步骤。StAR的物种间同源性很高 ,其基因突变导致先天性肾上腺皮质脂质增生 (一种致命性的疾病 )。StAR在转录及翻译水平上受多种促激素、细胞因子的调控 ,从而影响着机体类固醇激素的合成。

精制逍遥散对抑郁症大鼠行为学及海马区P450scc蛋白表达的影响

目的:探讨精制逍遥散治疗抑郁症的作用机制。方法:将40只健康SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组和氟西汀组,后3组进行大鼠抑郁症造模。逍遥散组、氟西汀组于实验的第1天开始分别灌服精制逍遥散、氟西汀,每日1次。21d后观察大鼠行为学以及海马区P450scc蛋白表达的变化。结果:抑郁症模型大鼠体质量增长缓慢,糖水消耗率降低,摄食潜伏期延长,5min内移动的速度减慢,5min内移动总距离、进入中央区停留时间减少;海马CA3和DG区P450scc蛋白表达明显减弱(P<0.05,P<0.01)。逍遥散组及氟西汀组体质量、糖水消耗率、摄食潜伏期、5min内移动速度及总距离和中央区停留时间与模型组比较有统计学意义,CA1区相对增加,并能有效逆转抑郁症大鼠海马CA3和DG区P450scc蛋白表达。结论:大鼠抑郁模型脑区存在神经活性甾体的功能紊乱,逍遥散治疗抑郁症其机制可能是通过调节P450scc蛋白表达。进一步影响神经活性甾体的功能而实现的。

类固醇生成因子-1与青春期小鼠睾丸P450scc mRNA水平的相关性研究

细胞色素Ｐ４５０胆固醇侧链裂解酶（Ｐ４５０ｓｃｃ）是催化胆固醇转化为类固醇的关键酶，其活性受到类固醇生成因子（ＳＦ１）的调节。本研究应用定量ＰＣＲ的方法比较了５天、２０天、２５天和３０天正常小鼠睾丸中Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ与ＳＦ１ｍＲＮＡ的水平。结果显示：从２５天起，小鼠睾丸内Ｐ４５０ｓｃｍＲＮＡ与ＳＦ１ｍＲＮＡ的总水平同步升高，提示了ＳＦ１对青春期小鼠Ｐ４５０ｓｃｃ的调节作用。

电磁辐射对大鼠睾丸合成睾酮功能的影响

目的探讨电磁辐射对成年大鼠睾丸组织中类固醇合成急性调节蛋白 (StAR)、细胞色素P4 5 0胆固醇侧链裂解酶 (P4 5 0scc)的作用。方法采用放射免疫方法分别测定电磁辐照后 3、6、2 4、72h及对照组血清睾酮含量 ,同时运用RT -PCR方法测定睾丸组织中StARmRNA、P4 5 0sccmRNA水平。结果辐照后 3h血清睾酮含量和StARmRNA、P4 5 0sccmRNA水平分别较对照组降低 83.1%和 5 7.3%、5 3.6 % ,(P <0 .0 1) ;6h略有回升 ,但仍分别较对照组降低 5 2 .6 %、17.9%、2 9.2 % (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;2 4h恢复到正常水平 ,72h再次分别较对照组降低 5 7.6 %、39.5 %、5 3.5 % (P <0 .0 1)。结论电磁辐射能在转录水平影响睾丸间质细胞StARmNA、P4 5 0sccmRNA的表达 。