应用CRISPR/Cas9技术构建内源表达双标签NPM1融合蛋白的细胞系

目的 旨在创建一个内源表达NPM-Stag-Flag融合蛋白的细胞模型,为精确分离和鉴定未知NPM1互作蛋白奠定基础。方法 结合CRISPR/Cas9基因编辑技术并利用同源重组机制在内源NPM1基因位点敲入编码Stag-Flag的序列,通过药物筛选分离和鉴定单克隆细胞。结果 成功建立了两种纯合型敲入Stag-Flag的人T淋巴瘤JurkatE6-1细胞系。在C-端插入Stag-Flag标签的NPM1表达效率明显优于N-端插入型。利用双标签的两步亲和纯化法可有效富集到NPM1蛋白复合物。结论 内源表达NPM1-Stag-Flag的JurkatE6-1细胞系是今后寻找未知NPM1互作分子和开展功能研究的有力工具。