小鼠单个植入前胚胎cDNA文库的构建及应用

哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法 ,阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种较好的方法。用小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2 细胞、4 细胞和 8 细胞胚胎分别构建了cDNA文库。滴度分别为 :6 2× 1 0 5、8 3× 1 0 5、1 0 4× 1 0 6、1 5 1× 1 0 6和 1 62×1 0 6。随机挑选了 2 9个克隆并进行了序列分析 ,结果表明 ,和已知表达序列标签 (ESTs)同源的序列为 65 5 2 % ( 1 9 2 9) ,未知序列为 1 3 79% ( 4 2 9) ,并发现了 2个重复序列。用特异性引物 ,分别对小鼠持家基因 ( β actin)和发育特异基因 (OCT 4)进行PCR扩增 ,结果表明 ,所建立的cDNA文库可以反映小鼠胚胎在不同发育阶段整个基因群体的转录活性 。

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.