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题名小鼠单个植入前胚胎cDNA文库的构建及应用
被引量:2
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作者
杨立新
郁卫东
李文雍
张冲
刘桂生
陈清轩
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机构
中国科学院遗传与发育生物学研究所
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2003年第6期50-54,共5页
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基金
国家重大基础研究发展规划 (973 )资助项目 (2 0 0 0 1610 7)
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文摘
哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法 ,阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种较好的方法。用小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2 细胞、4 细胞和 8 细胞胚胎分别构建了cDNA文库。滴度分别为 :6 2× 1 0 5、8 3× 1 0 5、1 0 4× 1 0 6、1 5 1× 1 0 6和 1 62×1 0 6。随机挑选了 2 9个克隆并进行了序列分析 ,结果表明 ,和已知表达序列标签 (ESTs)同源的序列为 65 5 2 % ( 1 9 2 9) ,未知序列为 1 3 79% ( 4 2 9) ,并发现了 2个重复序列。用特异性引物 ,分别对小鼠持家基因 ( β actin)和发育特异基因 (OCT 4)进行PCR扩增 ,结果表明 ,所建立的cDNA文库可以反映小鼠胚胎在不同发育阶段整个基因群体的转录活性 。
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关键词
小鼠
植入前胚胎
cdna文库
构建
阶段特异性表达基因
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Keywords
stage specific gene expression\ mouse preimplantation embryo\ cdna library
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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题名用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库
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作者
李文雍
王荣
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机构
阜阳师范学院生物系
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出处
《安徽师范大学学报(自然科学版)》
CAS
2003年第4期370-373,共4页
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基金
国家重点基础研究发展规划项目(G200016107).
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文摘
阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.
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关键词
小鼠
cdna文库
MⅡ卵
2-细胞期胚胎
植入前胚胎
阶段特异性基因表达
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Keywords
cdna library
preimplantation embryo
stage specific gene expression
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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