响应面法优化提取壮药三七姜总酚酸及其镇痛抗炎作用机制研究

试验采用响应面法优化壮药三七姜总酚酸提取工艺并探究其镇痛抗炎作用机制。以三七姜为原料,采用回流提取法提取总酚酸,通过单因素试验和Box-Behnken试验对提取工艺进行优化,探究乙醇浓度、液料比、提取时间对总酚酸得率的影响;建立醋酸致小鼠扭体模型和小鼠棉球肉芽肿模型,探究三七姜总酚酸的镇痛抗炎作用机制。结果表明,三七姜总酚酸的最优提取工艺为乙醇浓度42%、液料比60 mL/g、回流时间60 min。在此条件下,三七姜总酚酸得率可达6.09 mg/g。与模型组相比,三七姜醇提物各剂量对肉芽肿炎症具有抑制作用,可以降低小鼠扭体次数,降低白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、5-羟色胺(5-HT)含量,增加环磷酸腺苷(cAMP)含量。研究表明,响应面法优化壮药三七姜总酚酸的提取工艺稳定可靠;三七姜总酚酸具有一定的镇痛抗炎活性,其机制可能与减少体内IL-6、TNF-α、IL-1β和PGE2等促炎性细胞因子分泌有关。

基于大鼠体内代谢的壮药三七姜抗炎药效物质基础研究

目的 为壮药三七姜的药效物质基础研究提供参考。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为空白组(纯化水)、给药组(三七姜醇提物,以生药量计为15.75 g/kg),每组12只。每天灌胃药液/纯化水2次,每次灌胃间隔6~8 h,连续3 d。给药结束后,收集2组大鼠血液、尿液及粪便样品。利用超高效液相色谱联用四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对三七姜醇提物中的化学成分及大鼠灌胃三七姜醇提物后的血清、尿液、粪便代谢物进行鉴定。采用多元统计分析方法筛选血清中差异代谢物,并使用MetaboAnalyst 5.0平台对代谢通路进行分析。结果 从三七姜醇提物中鉴定出了38个化合物,从尿液样品中鉴定出了14个原型成分和3个代谢产物,从粪便样品中鉴定出了9个原型成分,从血清样品中鉴定出了10个原型成分和1个代谢产物。在2组大鼠血清样本中共筛选得到71个差异代谢物,其中给药组中阿魏酸、甘草素等44个差异代谢物的水平相较于空白组上调,花生四烯酸、苯乙酰谷氨酰胺等27个差异代谢物的水平相较于空白组下调。71个差异代谢物主要富集在苯丙氨酸代谢、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢、色氨酸代谢等11条代谢通路上。结论 阿魏酸、甘草素、异嗪皮啶和刺芒柄花素等成分可能是三七姜直接发挥抗炎药效作用的物质基础,三七姜可能通过影响花生四烯酸代谢和色氨酸代谢等通路发挥抗炎作用。

壮药三七姜抗氧化活性及化学成分研究

为研究壮药三七姜抗氧化能力及其化学成分,本文通过DPPH、O_(2)^(-)·、·OH自由基清除实验,超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对三七姜抗氧化能力及化学成分进行分析。结果表明:三七姜不同极性部位均具有一定的抗氧化能力,乙酸乙酯部位抗氧化能力最强;三七姜中含有莪术醇、莪术二酮、樟脑、α-香附酮、壬二酸、柠檬酸、原儿茶醛、异夏佛塔苷、尿苷、L-酪氨酸、烟酰胺、L-色氨酸、甘露醇、丁烯基苯酞等14个化合物,均为首次从三七姜中鉴定出来。研究表明三七姜具有一定的抗氧化活性,原儿茶醛、烟酰胺等成分可能是其直接发挥药效作用的物质,该研究为三七姜的开发利用提供参考依据。

壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制

目的研究壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制。方法将三七姜醇提物(75.35 g/kg)或纯净水灌胃大鼠以制备含药血清或空白血清。以RAW264.7细胞为研究对象,将细胞分为正常对照组,LPS组(1μg/mL),三七姜醇提物高、中、低剂量组(50、25、12.5μg/mL),4%或15%空白血清组,4%或15%空白血清+LPS组,4%或15%含药血清组,4%或15%含药血清+LPS组,按相应条件培养24 h后,检测各组细胞活力和细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6含量,以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平,一氧化氮合酶(NOS)、环氧化酶2(COX-2)蛋白表达水平。结果各组细胞培养24 h后,细胞活力差异无统计学意义。与正常对照组比较,LPS组细胞中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量,TLR4、NF-κB mRNA表达水平和NOS、COX-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与4%或15%空白血清组比较,4%或15%空白血清+LPS组细胞中上述指标水平显著升高(P<0.05)。与LPS组比较,三七姜醇提物各剂量组大鼠上述指标水平均显著降低(P<0.05)。与4%或15%空白血清+LPS组比较,4%或15%含药血清+LPS组细胞中上述指标水平均显著降低(P<0.05)。结论三七姜醇提物及含药血清均可明显减轻LPS诱导的细胞炎症反应,其抗炎机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活性,下调COX-2、NOS蛋白表达,减少炎症因子释放有关。

主要栽培技术对“姜三七”产量与药效成分的影响

研究不同种植密度、不同肥料用量和不同施肥类型对"姜三七"产量和药用成分含量的影响,为"姜三七"的人工栽培措施的制定提供依据。结果表明:种植密度与产量呈显著正相关;与不施肥(对照)相比,有机肥+复合肥组合处理增产198%,施用复合肥处理的樟脑和莰烯含量分别增加1.14%和5.74%。

土田七醇提物抑制肝癌细胞增殖活性部位筛选及其对肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的筛选土田七醇提物抗肝癌活性部位,并研究其对肝癌SMMC-7721细胞和HepG2细胞侵袭迁移的影响。方法采用大孔树脂对土田七醇提物进行洗脱,并采用CCK-8法检测不同洗脱部位对肝癌细胞增殖的影响;建立荷瘤小鼠模型,通过瘤体质量变化评价不同洗脱部位的体内抗肿瘤作用;采用Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测肝癌细胞侵袭迁移能力。结果土田七醇提物的大孔树脂不同洗脱部位均有抑制肝癌细胞增殖的作用,并可抑制裸鼠肿瘤的生长,其中70%洗脱部位的效果最好。Transwell侵袭实验和细胞划痕实验结果显示,70%洗脱部位可抑制肝癌细胞侵袭和迁移过程。结论土田七醇提物的大孔树脂70%洗脱部位抗肝癌活性最好,并可抑制肝癌细胞侵袭迁移能力。

土田七中化学成分的分离与鉴定

姜科是多年生草本植物的一个大科,其成员因其可食用性、生物活性和药用活性而引起人们对植物化学的兴趣。姜科植物土田七的根茎在传统医学中一直被用于治疗炎症、疼痛和发烧。为阐明土田七的作用机制和对其进一步开发利用,系统研究土田七的化学成分具有重要意义。目前已经从土田七中分离出卡丹烷二聚体、倍半萜类等化合物,为进一步研究土田七的化学成分,利用半制备型高效液相色谱、柱色谱等多种色谱分离技术对土田七进行了系统分离纯化,并利用高分辨质谱和核磁共振波谱鉴定了所得单体化合物的结构。从土田七75%乙醇提取物的乙酸乙酯部位和正己烷部位中,分离鉴定出了11个化合物,分别为豆甾醇(1)、5,5'–二羟甲基糠醛(2)、顺式–6–甲基–5–亚甲基–3–亚乙基–6–乙酰氧基己二酸(3)、反式–(2R,3S)–2,3–二甲基–5–亚乙基–2–乙酰氧基己二酸(4)、反式–(2R,3S)–2,3–二甲基–5–亚乙基-2-羟基己二酸(5)、2,5–二羟基甲苯(6)、2–乙基–2–丁烯酸(7)、糠酸(8)、反式–4–羟基肉桂酸(9)、千里光宁碱(10)、乙酰化千里光菲林碱(11)。其中化合物3为新化合物,其余化合物为已知化合物。化合物3为无定型粉末,通过质谱数据[M+Na]^(+)=279.0841可确定化合物的分子式为C12H16O6。根据13C NMR谱图和HSQC数据可确定C–H关系,再结合COSY谱可以推断出该化合物的结构。通过1H NMR谱图数据中C–2烯烃质子的化学位移可推测C–2和C–3之间的烯烃为Z型,故命名为顺式–6–甲基–5–亚甲基–3–亚乙基–6–乙酰氧基己二酸。

土田七属植物一新种

无茎，根茎灰黑色，具线状根。叶3～4枚，具3～ 7cm长的柄；叶片椭圆形，长9～ 16cm，宽4～6．5cm，顶端短渐尖，基部圆形，不等宽，叶面绿色，边缘红色，叶背淡绿色。

三七姜挥发油成分的GC-MS分析与体外抗肿瘤活性研究

目的:对三七姜挥发油成分进行定性和定量分析并探讨挥发油对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法:采用水蒸气蒸馏法测定三七姜挥发油的含量,并用气相色谱-质谱(GC-MS)计算机联用技术分离鉴定其中的挥发性化学组成,用归一化法测定其百分含量。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测三七姜挥发油对体外培养的人鼻咽癌细胞系CNE-2细胞株、人肺癌细胞系A549细胞株、人肝癌细胞系Hep G2细胞株、人乳腺癌细胞系MCF-7细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。结果:已鉴定挥发油成分占总挥发油含量为94.03%,各成分分离度较好,初步鉴定了58种成分,其中含9类化合物,单萜类化合物,单萜氧化物类化合物,倍半萜类化合物,倍半萜氧化物类化合物,酯类化合物,芳烃类化合物,醛类化合物,醇类化合物和烷烃类化合物。含量最高的是3,6,7,8-四氢化-3,3,6,6-四甲基环戊二烯并[E]茚-1(2H)-酮,占25.75%;其次是莰烯,占13.54%;居第3位的是1,7,7-三甲基-二环[2.2.1]庚-2-茨酮,占11.93%。三七姜挥发油能抑制不同肿瘤细胞(CNE-2、A549、Hep G2、MCF-7)的增殖,且呈剂量依赖性,IC50值分别为1.27,1.24,0.84和1.04 mg/ml。结论:三七姜挥发油具有体外抗肿瘤活性。以上研究为三七姜挥发油进一步开发利用提供实验基础,为寻找三七姜中抗肿瘤的有效组分或新的化合物提供科学依据,抗肿瘤活性有待进一步研究。

壮药姜叶三七醇提取物抗炎作用的研究

对壮药姜叶三七醇提取物的抗炎作用进行研究。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性和小鼠棉球肉芽肿法观察其对小鼠急慢性炎症的影响。姜叶三七醇提物各剂量组能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀、醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加和小鼠棉球肉芽肿增生。表明姜叶三七醇提物具有抗炎作用。

壮药三七姜乙酸乙酯提取物抗炎、镇痛作用的谱-效关系研究

目的:考察不同产地壮药三七姜乙酸乙酯提取物抗炎、镇痛作用的谱-效关系。方法:以不同产地的10批三七姜为样品,分别以二甲苯致小鼠耳廓肿胀、乙酸致小鼠扭体反应实验考察其乙酸乙酯提取物的抗炎、镇痛活性。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立10批三七姜乙酸乙酯提取物的高效液相色谱指纹图谱并进行相似度评价,通过与对照品比对进行共有峰的指认。基于Pearson相关系数法(以小鼠耳肿胀度和15 min内扭体次数为药效指标)和灰色关联分析法(以耳肿胀抑制率和镇痛率为药效指标)分析三七姜乙酸乙酯提取物抗炎、镇痛的谱-效关系。结果:10批不同产地三七姜乙酸乙酯提取物均具有较好的抗炎、镇痛作用,其对小鼠的耳肿胀抑制率为46.43%~55.16%,对小鼠的镇痛率为45.56%~52.72%。10批样品共确定了18个共有峰,其与对照指纹图谱的相似度为0.994~0.997。通过与对照品比对,指认出了峰1、2、4分别为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛。Pearson相关性分析结果显示,峰10、18与小鼠耳肿胀度和15 min内扭体次数均呈显著负相关(r分别为-0.853、-0.738,P分别为0.002、0.015);灰色关联分析结果显示,18个共有峰与耳肿胀抑制率和镇痛率的关联度均在0.65以上,其中峰14、1(原儿茶酸)、17、9、4(对羟基苯甲醛)、2(对羟基苯甲酸)、16、7、6与耳肿胀抑制率的关联度相对较高(关联度均高于0.7),峰1(原儿茶酸)、17、14、9、16、2(对羟基苯甲酸)、4(对羟基苯甲醛)与镇痛率的关联度相对较高(关联度均高于0.7)。结论:三七姜乙酸乙酯提取物具有较好的抗炎、镇痛作用,峰1(原儿茶酸)、2(对羟基苯甲酸)、10、14、17、18等可能是其主要活性成分。

三七姜高效液相色谱指纹图谱建立及3种成分含量测定

目的采用高效液相色谱法(HPLC)建立壮药三七姜药材的指纹图谱,并测定其中原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量。方法Phenomenex Kinetex XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长为220 nm,流速0.8 mL·min^(-1),柱温35℃,进样量15μL。以莪术二酮作为参照峰,建立10批三七姜药材的指纹图谱,综合应用相似度评价,聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)评价三七姜药材批间质量差异。同法测定10批三七姜药材原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量。结果10批样品中有16个共有峰,相似度均>0.9。聚类分析可将样品分为3类,筛选出3个主成分因子,累计贡献率93.875%。原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛在测定范围内(2.36~16.52,2.12~14.84,1.49~10.43μg·mL^(-1))呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为101.50%,101.54%,100.67%,RSD分别为1.85%,1.81%,1.54%;10批三七姜药材中原儿茶酸、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛的含量分别为0.3321~1.4642,0.4757~1.3450,0.3306~1.0465 mg·g^(-1)。结论该方法稳定可靠,可用于三七姜药材的质量控制。

土田七幼嫩根茎的组培快繁

以土田七的幼嫩根茎为外植体,通过对其芽启动诱导、继代增殖及生根诱导培养基的筛选,建立了土田七幼嫩根茎的离体快繁体系。结果表明:土田七幼嫩根茎的最佳芽诱导培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA0.10 mg/L+3%蔗糖+卡拉胶粉9.5 g/L+10%椰汁;继代增殖最佳的培养基为MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L+3%蔗糖+卡拉胶粉9.5 g/L+10%椰汁;生根最佳的培养基为MS+NAA 0.10 mg/L+3%蔗糖+卡拉胶粉9.5 g/L+10%香蕉泥+活性碳1.0 g/L;组培苗移栽较合适的基质为进口泥炭∶红壤∶腐叶土混合的基质。

基于Nrf2/ARE信号通路研究姜叶三七挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究姜叶三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法实验采用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立细胞损伤模型,分为空白对照组、模型组、EOSIR低、中、高剂量组(0.01、0.05、0.10μg/mL)以及阿司匹林组。通过水蒸气蒸馏法提取EOSIR,采用GC-MS联用技术对EOSIR的成分进行分析。采用MTT法确定ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的最佳浓度与时间,分析EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞存活率的影响。Hoechst 33342染色实验观察EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤形态的变化。JC-1染色实验观察EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的线粒体膜电位变化的影响。ELISA法分析EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量影响。流式细胞术检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量以及细胞凋亡的影响。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的核因子E2相关因子2(nuclear factory erythroid-2 related,Nrf2)、醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、Bcl-2、Bax mRNA表达水平的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EOSIR对ox-LDL诱导HUVECs细胞的Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。结果(1)水蒸气蒸馏法提取得到的挥发油出油率为3.78%,GC-MS技术初步分析鉴定了EOSIR中54种化合物,占总挥发油含量的98.86%,其中含量最高的是莰烯,占22.38%;其次是α-蒎烯,占16.11%;居第三位的是D-樟脑,占9.74%;第四位的是3,3,6,6-四甲基-3,6,7,8-四氢化-并茚-1(2H)-酮,占8.41%。(2)MTT结果显示:与空白对照组相比,EOSIR在0.01~60μg/mL时对正常的HUVECs细胞没有毒性,但大于80μg/mL时有明显的细胞毒性(P<0.01);在200μg/mL的ox-LDL诱导24小时条件下,HUVECs存活率为54.32%(P<0.01),以此作为造模的最佳条件;与模型组比较,EOSIR能显著抑制ox-LDL诱导的HUVECs细胞存活率下降(P<0.01)。(3)Hoechst 33342染色结果显示:与空白对照组相比,模型组出现较强的蓝色荧光,给药EOSIR能明显减弱荧光强度并显著改善细胞损伤的形态。(4)JC-1染色结果显示,与空白对照组相比,模型组损伤的细胞表现出绿色荧光强度增强,红色荧光强度下降,给药EOSIR能减弱绿色荧光强度并增强红色荧光强度。(5)ELISA结果显示,与空白对照组相比,模型组的LDH、MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-Px、NO的含量减少(P<0.05,P<0.01)。给药EOSIR能降低LDH、MDA含量,升高SOD、CAT、GSH-Px、NO的含量(P<0.05,P<0.01)。(6)流式细胞术结果发现,与空白对照组相比,模型组的ROS含量显著升高,凋亡率显著增加(P<0.05)。给药EOSIR能显著下调ROS含量并降低细胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01)。(7)RT-qPCR分析表明,ox-LDL能诱导激活促凋亡基因Bax mRNA的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,并且降低Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA的表达(P<0.01)。EOSIR能显著下调Bax mRNA表达水平,上调Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。(8)蛋白免疫印迹法结果表明,ox-LDL能诱导激活促凋亡蛋白Bax的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,并且降低Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平(P<0.01)。EOSIR能显著下调Bax蛋白表达水平,上调Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。EOSIR抑制了ox-LDL诱导的HUVEC细胞毒性和凋亡。同时,EOSIR显著抑制了ox-LDL处理的细胞中ROS、LDH和MDA水平的增加,并增加了NO、SOD、CAT和GSH-Px水平。EOSIR上调了Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平。此外,EOSIR能够显著降低了与细胞凋亡相关的生化变化,例如MMP的丢失、Bax mRNA和蛋白质水平的下调以及ox-LDL处理的细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白质水平的上调。结论EOSIR能够通过调节线粒体依赖性细胞凋亡和激活Nrf2/ARE信号通路来预防ox-LDL诱导的内皮损伤。

野生姜科植物土田七的外植体灭菌技术研究

为筛选出土田七组织培养适宜的外植体类型及其消毒方法,为土田七的无性繁殖提供技术支持,以土田七的茎尖、幼嫩叶片和根茎作为外植体,采用75%酒精和0.1%HgCl_2 2种灭菌剂进行消毒灭菌处理,研究了土田七组织培养中外植体的最佳灭菌方法。结果表明:茎尖的消毒相对容易,幼嫩叶片次之,根茎的消毒相对较难。茎尖采用75%酒精30 s+0.1%HgCl_2 15 min的灭菌方法好;幼嫩叶片采用75%酒精10 s+0.1%HgCl_2 5 min的灭菌方法好;根茎采用75%酒精30 s+0.1%HgCl_2 30 min方法效果较好。

土田七的组织培养与快速繁殖

通过比较不同的外植体、基础培养基、植物生长调节剂种类和浓度配比、蔗糖浓度以及生根苗的移栽基质,建立土田七组织培养快速繁殖体系。结果表明,以茎尖为外植体诱导效果最好;培养基MS+6-BA 3.0 mg·L^(-1)+NAA 0.2 mg·L^(-1)+蔗糖40 g·L^(-1)利于形成丛生芽,30 d的增殖系数为4.16;MS+NAA 0.6~0.8 mg·L^(-1)适宜诱导生根获得再生植株,生根率100%;生根苗移栽于椰糠中成活率达100%。

三七姜挥发油抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖的作用

目的:体外培养法研究三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞株生长的抑制作用和作用机制。方法:运用MTT法、Hoechst33258荧光染色法、流式细胞仪和倒置荧光显微镜进行研究。结果:三七姜挥发油对鼻咽癌CNE-2细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。作用24 h后CNE-2细胞的IC50为304.8μg·ml-1;Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化;FITC-Annexin V/PI双染法发现三七姜挥发油能诱导CNE-2细胞凋亡,且随着剂量的增加作用增强;PI染色法说明三七姜挥发油将CNE-2细胞阻滞于G1期。结论:三七姜挥发油能有效抑制CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡。

三七姜挥发油诱导(CNE-2)细胞周期G_1期阻滞及相关基因表达的影响

目的:研究三七姜挥发油对人鼻咽癌(CNE-2)细胞周期的调控作用,并探讨其可能的机制。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株(CNE-2),采用MTT法观察三七姜挥发油对CNE-2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析三七姜挥发油处理CNE-2细胞后对细胞周期分布的影响;实时荧光定量PCR检测细胞周期调控相关基因的表达水平。结果:不同浓度的三七姜挥发油作用CNE-2细胞24,48,72,96 h后,均能明显抑制细胞增殖(P<0.05),且呈浓度与时间依赖性,其IC50分别为71.12,60.034,53.167,34.75μg·ml-1;三七姜挥发油诱导CNE-2细胞发生G1期阻滞,与阴性对照相组比,200μg·ml-1加药处理CNE-2细胞72 h后G1期细胞增加了13.94%(P<0.01);伴随ATM,CCND1/E1,CDK6,CDC25A,E2F1等mRNA表达水平下调,而Tp53基因表达显著增强(P<0.01)。结论:三七姜挥发油诱导人鼻咽癌CNE-2细胞G1期阻滞、抑制细胞增殖,其作用可能与抑制了介导DNA损伤修复的ATM-Chk2-Cdc25A通路,以及激活p53通路有关,从而抑制CDC25A,cyclinD1/E1、CDK6、E2F1等基因的表达而实现的。

土田七醇提物对实验性糖尿病小鼠血糖、血脂的影响及安全性研究

目的 观察土田七醇提物对2型糖尿病模型小鼠的体质量及血清中血糖、血脂水平的影响,并考察其安全性。方法 采用高脂饲料喂养雄性昆明小鼠30d,续以腹腔注射四氧嘧啶,使之产生高血糖症,建立2型糖尿病小鼠模型。以土田七醇提物通过灌胃给药,30d后测定小鼠空腹血糖、糖耐量、血液各项生化指标。采用亚慢性毒性实验,测定并比较各组小鼠在实验期间的体重、脏器指数及血液生化指标,以考察土田七醇提物的安全性。结果 土田七醇提物显著降低了2型糖尿病小鼠的血糖值(GLU)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)值(P<0.05),非常显著地降低了总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)值(P<0.01),非常显著地升高了超氧化物歧化酶(SOD)值(P<0.01)。在亚慢性毒性实验中,小鼠生长状况良好,试验组小鼠在体质量测定、脏器指数测定和血液生化指标检测中,与对照组均无显著差异(P>0.05);各组组织病理学结果显示,各组小鼠肝脏、肾脏的色泽、形态及质地均未见明显异常,各剂量组和模型对照组的肝脏、肾脏均未见明显病理学改变。结论 土田七醇提物对2型糖尿病小鼠的糖脂代谢具有显著的调节、改善作用。土田七醇提物对小鼠无明显亚慢性毒性作用,未观察到有害作用剂量(NOAEL)为20mg/(kg·d)。