金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法。

随机引物扩增DNA多态性技术在分析金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌多态性中的应用

金黄色葡萄球菌和肺炎杆菌是医院内感染的主要条件致病菌 ,常常引起院内感染及暴发流行。本实验以一条含 10bp的随机引物将 5 2株肺炎杆菌和 2 8株金黄色葡萄球菌的DNA进行随机引物扩增DNA多态性 (RAPD)扩增 ,进行多态性分析 ,得到不同的带谱 ,在肺炎杆菌中存在很强的多态性 ,出现了 41种带型 ,通过肺炎杆菌间相似系数计算 ,绘制出表达菌株亲缘关系的系统树 ,图中可见各菌间的相似系数 ,5 2株菌分成 7个型 ;金黄色葡萄球菌出现了三条特征带。本实验说明RAPD技术能够追溯传染源 。

金黄色葡萄球菌随机扩增多态性DNA指纹图与药敏谱对医院感染管理的指导意义

目的 探讨金黄色葡萄球菌 (SA)药敏谱型对医院感染管理的指导意义。方法 通过随机扩增多态性 DNA(RAPD)技术分型 76株 SA,并归纳出药敏谱型与 RAPD型的对应关系。结果 药敏谱型 35种 ,RAPD分型 5 0种。二者呈单一对应关系的有 2 2种 ,呈一对二关系的有 12种 ,呈一对三关系的有 1种。结论 依据 SA药敏谱型可对 SA进行分型 ,从而指导医院感染管理。

应用RAPD技术研究金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌DNA的多态性

本试验利用RAPD技术对临床上重要的致病菌金黄色葡萄球菌28株和铜绿假单胞菌21株,用10bp引物进行扩增,结果铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的DNA带谱均出现了多态性;根据带谱的不同可将铜绿假单胞菌分成8个型,金葡菌分成3个型:根据铜绿假单胞菌的带型计算各菌间的相似系数,依此系数绘制了系统树,从系统树中清晰可见各菌间的亲缘关系。

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志。

医务人员与住院患者鼻前庭携带金黄色葡萄球菌的研究

目的探讨医务人员和住院患者鼻前庭携带金黄色葡萄球菌(SAU)的相互关系和对发生与控制医院感染的影响。方法对医院发生SAU感染较多科室的医务人员和住院>1周患者的鼻前庭进行采样,常规方法对SAU鉴定和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)确认;K-B纸片扩散法进行药敏试验并分型;对SAU进行随机引物扩增多态DNA检测并做同源性分析;比较SAU的耐药谱分型和随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型之间的差异,判断医务人员和住院患者鼻前庭携带SAU的相关性。结果从290份医务人员和患者鼻前庭标本中分离出45株SAU,根据药敏试验结果,按耐药模式45株细菌分为5型;RAPD聚类分析可以将本组细菌分为8个类型。结论部分医务人员和患者之间以及患者与患者之间鼻前庭携带的SAU有较高的同源性。

医患鼻前庭携带耐甲氧西林金黄色葡萄球菌与医院感染菌同源性的研究

目的探讨医院医务人员和住院患者鼻前庭带耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的相互关系和对发生与控制医院感染的影响。方法对本院发生金葡菌感染较多的某科医务人员和住院1周以上患者的鼻前庭进行采样,常规方法进行金葡菌鉴定和MRSA确认。将医患鼻前庭以及肺炎患者痰中分离出的MRSA菌株,进行随机引物扩增多态DNA(RAPD)检测,将RAPD指纹图输入凝胶成像分析系统,经计算机处理,运用RAPD软件(Quantityone4.4.0Bio-Rad)进行同源性分析。判断医患鼻前庭携带MRSA的相关性及其与MRSA医院感染的相关性。结果RAPD聚类分析,基因同源性较高的可分为5型,医患之间、患者之间鼻前庭以及3株MRSA院内肺炎与其本人鼻前庭所携带的MRSA有较高的同源性。结论MRSA在鼻前庭较的定植或携带,可通过患者、医务人员的移动发生病室内、病室间的患者之间和医患之间的传播或感染。

医院感染金黄色葡萄球菌的流行与耐药机制

目的对医院感染金黄色葡萄球菌进行基因分型,研究流行菌株的传播及其耐药的分子机制,以控制医院感染的发生。方法对分离的21株金黄色葡萄球菌进行RAPD分型,并进行mecA、gyrA、grlA基因分析,研究其耐药机制。结果21株金黄色葡萄球菌根据RAPD带型可分为3型,其中Ⅰ型12株,是医院感染的主要流行株;在临床分离的17株金黄色葡萄球菌中14株对甲氧西林和喹诺酮类均耐药;在耐药株中除1株(13064)外,其余菌株均检测出mecA基因;14株耐药株中均存在gyrA和(或)grlA突变;gyrA突变点为gyrA 84位TCA→TTA,gylA突变点为grlA80位TCC→TTC。结论RAPD基因分型技术简便快捷,可为医院感染金黄色葡萄球菌准确分型,是分子流行病学研究的有效方法;医院医院感染的金黄色葡萄球菌流行株主要为Ⅰ型,有可能经飞沫传播;17株临床分离株中14株存在多重耐药,并有相应的基因变异。

医院金黄色葡萄球菌耐药性及RAPD研究

目的:研究医院金黄色葡萄球菌耐药性及其与医院环境的相关性,了解医院病原菌的来源。方法:比较金黄色葡萄球菌院感株和环境株的耐药谱和RAPD型别间差异,判断相关性。结果:从耐药谱和RAPD分型综合研究表明,金黄色葡萄球菌院感株和环境株有较大相关性。结论:提示金黄色葡萄球菌的医院感染主要是外源性感染。

金黄色葡萄球菌所致食源性疾病分离株的多态性分析

目的对一起食源性疾病的病原学进行检测和分析。方法按照相关卫生检验标准对食源性疾病患者肛拭、呕吐物、剩余食品等26份检材进行致病菌检测,并对所分离的菌株进行随机扩增DNA多态性分析。结果从2名患者肛拭子、吃剩的相关食品中分离到8株产A型肠毒素的金黄色葡萄球菌,其中两份食品直接检出A型肠毒素,RAPD图谱显示8株金黄色葡萄球菌可分成2个基因型。结论结合流行病学调查资料、临床资料、病原学鉴定及随机扩增DNA多态性分析结果,证实该起食源性疾病是由于进食金黄色葡萄球菌污染的食品所致。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因多态性分型研究

目的探索一种准确、快速、可靠的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学分型方法,了解医院内MRSA的多态性,为临床合理、有效地使用抗生素和控制耐药基因在种群间的传播提供帮助。方法用MecA基因相关高变区PCR扩增(HVR-PCR)和随机扩增多态性DNA(RAPD)两种方法,对MRSA菌株进行多态性分析。HVR-PCR检测MecA基因相关高变区正相重复序列元件(DRUs)的长度,根据DRUs数目的不同对MRSA分型;RAPD根据电泳图谱中条带的数目及位置,经NTSYS统计软件进行聚类分析,得到遗传树状图,按MRSA菌株之间的相关性进行分型。结果应用HVR-PCR方法可将31株MRSA标本分为7型,分别含有7、8、9、10、11、12和16个DRUs,其中10DRUs型最多[11/31(35.48%)],16DRUs型最少[1/31(3.23%)];应用RAPD分型,31株MRSA共分10型,其中以Ⅳ型为主[10/31(32.26%)],其他型分布比较接近。在11株HVR-PCR分型的10DRUs型中RAPDⅣ型4株[4/11(36.36%)],RAPDⅢ型和RAPDⅣ型各2株[2/11(18.18%)];10株RAPDⅣ型中9DRUs型、10DRUs型各4株[4/10(40.00%)]。结论 RAPD方法和HVR-PCR方法对MRSA的分型率都比较高,而且这两种方法都比较简单、稳定、可靠、快速,实用性强,具有广阔的应用前景。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因多态性分型研究

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的基因多态性分型特征，为控制感染提供分子流行病学依据。方法利用一条10bp随机引物，建立随机引物多态性（RAPD）分析方法，并利用这一方法对44株MRSA进行基因分型的研究。结果44株MRSA中有30株产生RAPD指纹图谱，经电泳得到2．8条片段，可分为5个型，其中Ⅲ型菌株占50％。结论通过RAPD分型研究，可了解MRSA的基因型流行特征，为控制感染提供分子流行病学依据。

儿科分离金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林株的流行病学研究

目的了解儿童感染金黄色葡萄球菌的耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的基因型及分布,为临床治疗提供依据和确定MRSA流行情况。方法采用ATB分析系统对菌株进行药敏试验,头孢硝基噻吩显色法检测β-内酰胺酶,随机扩增多态DNA（RAPD）方法进行MRSA同源性分析。结果 348株金黄色葡萄球菌中,334株产β-内酰胺酶,对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率为6.03%~100.00%。耐药率较高的有四环素（65.23%）、大环内酯类（64.66%）、复方新诺明（48.28%）和克林霉素（43.97%）,较低的有呋喃妥因（3.74%）、利福平（4.02%）、左氧氟沙星（8.91%）和环丙沙星（16.38%）。未发现对万古霉素、替考拉林和利奈唑胺耐药。MRSA的检出率为9.77%,MRSA对17种抗菌药物的耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）。经RAPD分型,34株MRSA分为6型,以Ⅰ型为主（64.71%）,主要分布于儿科PICU。结论本地区儿童感染金黄色葡萄球菌有不同耐药谱,应加强儿童感染金黄色葡萄球菌的耐药性监测和掌握MRSA流行情况,对防止耐药性进一步蔓延和MRSA感染暴发有重要意义。

烧伤患者创面金黄色葡萄球菌感染的耐药性与流行病学分析

目的了解烧伤患者创面感染金黄色葡萄球菌的耐药性及流行状况。方法收集烧伤病房2007年10-12月之间63例患者创面分离的金黄色葡萄球菌63株,纸片扩散法检测其对10种抗生素的耐药率、随机引物扩增PCR(RAPD)检测其流行状况。结果63株金黄色葡萄球菌对氨苄西林的耐药率最高,没有检测到对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。56株金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA),7株为甲氧西林敏感的葡萄球菌(MSSA),除万古霉素外,MRSA对其他9种抗生素的耐药率比MSSA高16.1%～100%,63株金黄色葡萄球菌经RAPD分型分为7个基因型,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、ⅤⅥ、Ⅶ型分别占12.7%、17.5%、9.5%、39.7%、9.5%、6.3%、4.8%。结论烧伤患者创面金黄色葡萄球菌分离株对多种抗生素具有高耐药性,以MRSA感染为主,基因型以Ⅳ型为主。

儿童烧伤患者感染MRSA的耐药性及分子流行病学研究

目的调查儿童烧伤患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学情况,为控制感染提供科学依据。方法通过PCR扩增mecA基因鉴定MRSA菌株,K-B纸片法检测菌株耐药性,随机扩增多态性DNA(RAPD)对其进行同源性分析。结果从住院烧伤儿童临床标本分离得到的52株金黄色葡萄球菌中MRSA占44.2%(23/52),且对多种抗菌药物均耐药。23株MRSA经RAPD分析可分为4型,以Ⅱ型为主。结论儿童烧伤患者分离MRSA菌株具有多重耐药性,应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物进行治疗;RAPD技术能为控制感染提供分子流行病学依据。

金黄色葡萄球菌医院感染与外环境关系的研究

目的 分析比较金黄色葡萄球菌医院感染与外环境金黄色葡萄球菌的相关性 ,以了解医院感染病原菌来源。方法 采用分层随机抽样方法抽取深圳市宝安区 15家医院中的 3家医院 (A医院为区级 ,B、C医院为镇级 ) ,连续 5个月收集 3家医院金黄色葡萄球菌的医院感染株、社区感染株、环境株 ,比较 3种来源菌株的耐药谱以及随机引物扩增多态性基因分型 (RAPD)型别之间的差异 ,判断三者之间的相关性。结果 收集金黄色葡萄球菌医院感染株 6株 ,社区感染株 3株 ;在 1190份环境样中共分离到金黄色葡萄球菌 9株 ,环境分离率为 0 76 %。耐药性分析显示环境株、医院感染株对苯唑西林、头孢噻吩、红霉素、复方新诺明的耐药率差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。RAPD分型分析显示A医院的 4株医院感染株、2株环境株以及 2株社区感染株均属于A型 ;B医院的 1株医院感染株和 1株社区感染株同属C型 ,表明医院感染株与社区感染株、环境株之间存在明显相关性。结论 金黄色葡萄球菌医院感染可能以外源性途径为主。

甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌的基因多态性研究

目的应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌(MRSH)进行基因多态性研究。方法对81株MRSH通过RAPD技术进行扩增,电泳条带采用SPSS13.0软件分析,根据树状图分型。结果81株MRSH通过RAPD技术可产生相对固定的6条电泳带,经遗传相关系数分析后可分为8型,其中A型占70.37%,而10株血培养阳性的MRSH中有9株为A型。结论通过RAPD分型研究,可以了解MRSH基因流行型的特性,为该菌的感染控制提供分子流行病学依据。

医院获得性肺炎的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因多态性研究

目的探讨引起医院获得性肺炎(HAP)的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的基因多态性。方法2007年1月至2008年1月上海交通大学医学院附属新华医院住院诊断为医院获得性MRSA肺炎患者74例,对所得82株菌株进行随机扩增DNA的多态性(RAPD)基因分型。结果82株MRSA经电泳得到2～15条片段,经聚类分析可分为11个基因型。从重症监护室(ICU)病例中分离所得的菌株,主要为Ⅲ、Ⅵ型和Ⅶ型(32.56%、30.23%和13.95%)。从老年科、急诊科和呼吸科病例中分离所得的菌株,除有各自相对独立的基因型外,同时还有与ICU所得菌株重叠的基因型存在。其余临床科室病例所分离的MRSA菌株数量较少,分布也较分散与独立。暴发和聚集性病例共占48.65%(36/74),所有暴发病例均发生于ICU病区内。结论院内获得性MRSA肺炎易于播散,特别是在ICU可发生小范围的暴发。随机扩增DNA的多态性分型对及早识别高危患者、预防MRSA在院内的播散具有价值。

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分子流行病学调查

实验对从内蒙古自治区分离到的63株引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行了随机扩增多态性分析（RAPD），可扩增出2—13条条带，主要分为12个基因型，亲缘关系相同或相近的菌株占73％。

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌RAPD基因分型及药敏分析

目的探讨社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)对临床常用抗菌药物的耐药性及其分子流行病学情况。方法收集从CA-MRSA感染患者伤口分泌物分离的金黄色葡萄球菌,采用PCR扩增mec A基因确定为MRSA菌株,同时对其进行17种抗菌药物耐药性检测。利用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对51株CA-MRSA进行同源性分析。结果 51株CAMRSA对红霉素、克林霉素、四环素的耐药率均在30%以上,未发现对莫西沙星、利福平、利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素、奎奴普丁/达托霉素以及呋喃妥因的耐药菌株,经RAPD分型可分为I^V个亚型,以I型(53.70%)为主。CA-MRSA感染患者主要分布于普外科(39.22%)和皮肤门诊(27.45%)。结论为有效预防和控制CA-MRSA的感染,临床应合理选用抗菌药物,采用RAPD技术对MRSA进行同源性分析,可为基层医院控制感染提供流行病学监测。