STAR基因在不同发育期绵羊睾丸和附睾中的表达与组织分布

为探讨STAR基因在发育的绵羊睾丸和附睾中的表达模式及潜在功能,该研究采集3月龄、 1周岁和3周岁藏绵羊睾丸和附睾(头、体和尾)组织样本,利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织荧光染色法检测STAR基因的表达及其编码蛋白的细胞定位。结果发现,随着年龄的增加,在藏绵羊睾丸和附睾(附睾头除外)中STAR基因在转录水平的表达总体呈下降趋势,而在蛋白质水平的表达呈上调趋势。STAR蛋白主要存在于藏绵羊睾丸间质细胞和附睾假复层纤毛上皮主细胞。鉴于间质细胞和主细胞的主要生物学功能是分泌睾酮和分泌促进精子成熟所需的蛋白质,由此推测,STAR基因可能主要在睾丸间质细胞和附睾主细胞的发育和功能维持中发挥作用,进而促进雄激素的合成和精子的成熟。

合作猪StAR基因克隆、组织表达及生物信息学分析

旨在对合作猪StAR基因CDS区进行克隆及生物信息学分析,采用RT-qPCR方法检测StAR基因在不同组织中的表达量,以揭示其功能。结果发现,合作猪StAR基因CDS区长858 bp,编码285个氨基酸,与猪参考序列相比,第572位点处的A突变为G,导致第191位的赖氨酸突变成精氨酸,为错义突变,第791位点处插入1个碱基C,后续的20个氨基酸发生改变,导致移码突变;蛋白分子量90.95 ku,理论等电点8.87;消光系数33835,不稳定系数41.49;含1个N-糖基化位点,二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲构成,二级结构与三级结构基本一致;合作猪与猪、绵羊和黄牛StAR基因核苷酸序列相似性分别为99.77%,90.45%,91.78%;进化树结果显示,合作猪与猪亲缘关系最近,表明StAR基因编码序列具有种属特异性;StAR蛋白是不稳定的亲水性蛋白,无信号肽和跨膜区;StAR基因在脾、肾、肺等组织中均有表达,睾丸表达量较高,表明可能与合作猪睾丸发育有关。

过表达STAR基因对牛成肌细胞增殖和分化的影响

骨骼肌质量是肉牛的重要生产性状,提高骨骼肌质量是肉牛育种的工作目标。STAR基因作为胆固醇转运的关键蛋白,参与脂质代谢。同时,参与心脏成纤维细胞的增殖与分化,并表现出抗凋亡特性。然而,目前缺乏该基因在成肌细胞上的功能研究。因此,探究STAR基因对牛成肌细胞的增殖与分化的影响,有利于为进一步探究STAR基因在骨骼肌发育中发挥的作用,为肉牛育种提供理论依据。该研究利用RT-q PCR的方法检测STAR mRNA在成肌分化过程中的表达规律;利用STAR过表达腺病毒侵染细胞,通过显微镜观察、RT-q PCR、蛋白免疫印迹、Ed U染色、CCK8、流式细胞术等生物技术检测过表达STAR对成肌细胞增殖与分化的影响。研究结果表明,随着成肌细胞的分化STAR基因的表达量上调,呈现出先升高后降低的趋势;过表达STAR基因后极显著地抑制细胞周期基因MCM3、MCM6、PCNA、CCNA2、CCND在mRNA水平以及PCNA在蛋白水平的表达(P<0.01),极显著地促进细胞周期抑制基因P21在mRNA水平和蛋白水平的表达(P<0.01),抑制成肌细胞的细胞活力和增殖活力,并使其滞留在S期;同时,抑制肌管的形成,显著地抑制成肌相关基因MYOG、MYOD、MYH3、MYF5、MRF4在mRNA水平以及MYOG、MYH3在蛋白水平的表达(P<0.01)。综上所述,过表达STAR基因抑制成肌细胞的增殖与分化,提示该基因可能在牛骨骼肌的生长发育中扮演重要角色。

猪StAR基因启动子区克隆及其转录活性研究

旨在通过分析猪StAR基因启动子活性区域,探究猪StAR基因的转录调控机制,从育种学角度为提高猪繁殖力提供新思路。本研究根据Ensembl数据库已公布的猪StAR基因的5′侧翼区序列,利用在线预测软件对该基因启动子区序列信息进行分析,以大白猪基因组DNA为模板,利用特异性引物,进行PCR扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-StAR双荧光素酶表达载体,转染293T细胞并进行活性检测。结果显示,StAR基因5′侧翼区不含有典型的TATA-box和CpG岛;成功克隆了10个含有不同长度的启动子片段,并构建了各片段与表达载体的重组质粒;转染293T细胞后经双荧光素酶活性检测发现,大白猪StAR基因5′侧翼区存在着核心启动子,其中-196^+127bp这一区域活性值最高,且显著高于其他缺失片段(P<0.01),表明在+127^-196bp的区域内存在重要的正调控因素,外显子1对启动子活性起重要的调控作用。-41^-196bp为核心启动子区域,该区域存在着关键的正调控元件,包含GATA2、GATA4、SP1、ZNF263、Hoxa9、KLF16和ZNF740转录因子结合位点。本试验通过对StAR基因进行生物信息学分析,并结合不同长度启动子片段双报告基因活性检测,证实了StAR基因的5′侧翼区序列具有启动子转录活性。初步确定了该基因的启动子区域,找到了启动子的核心区域和主要调控区域,为进一步研究StAR基因转录调控机制提供理论依据。

先天性类脂质性肾上腺增生症临床及StAR基因突变分析

目的探讨先天性类脂质性肾上腺皮质增生症患儿的临床及类固醇生成急性调控蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)基因突变特点。方法收集2例先天性类脂质性肾上腺皮质增生症患儿临床资料,采集患儿及其父母静脉血2mL,用二代测序技术对2例患儿44个肾上腺皮质功能减退相关基因的外显子及其相邻内含子进行检测,对所检出的StAR基因突变用sanger测序验证,并对患儿父母StAR基因进行验证分析;对StAR基因突变相关文献进行复习。结果 2例患儿均为46XX女性,均为新生儿期发病;以皮肤色素沉着、呕吐、体重不增等肾上腺皮质功能减退症状为主要表现;实验室检查示血低钠高钾、促肾上腺皮质激素显著增高,皮质醇及17羟孕酮降低,睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮等各雄性激素不高;经皮质激素氢化可的松及9α-氟氢可的松替代治疗后生长正常;母妊娠史及患儿出生史、家族史无特殊。StAR基因突变分析显示病例1为c.229G>A(p.Q77X)及c.772G>A(p.Q258X)复合杂合已知致病突变;病例2为c.707_708delAG ins CTT(p.K236Tfs*47)纯合已知致病突变;2例患儿父母均为突变携带者。结合中国已报道13例StAR基因突变患儿,c.772G>A(p.Q258X)突变发生率为53.3%(8/15),c.707_708delAG ins CTT(p.K236Tfs*47)发生率为33.3%(5/15)。结论17羟孕酮及雄性激素不高的原发性肾上腺皮质功能减退患儿,尤其是女性表型者,应行染色体及StAR基因检测;c.772C>T(p.Q258X)及c.707_708delAG ins CTT(p.K236Tfs*47)突变可能为中国StAR基因突变热点;适当皮质激素替代治疗可使患儿长期生存、生长正常。

半滑舌鳎StAR基因克隆及其在不同组织的时空表达分析

利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列,设计RACE引物,克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列,全长为1 294 bp,5'端UTR为132 bp,3'端UTR为310 bp,开放阅读框(ORF)为852 bp,共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析,结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85%,与虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81%、83%和76%。雌、雄鱼不同组织StAR基因的表达分析表明,StAR基因在雄鱼性腺中高表达,在雄鱼的肝脏、脑及心脏中表达量较低,而在雄鱼的其他组织中不表达;在雌鱼肠中不表达,在其他组织(卵巢、肝脏、脾脏、脑、垂体、肌肉、心脏、肾脏)中微量表达。荧光定量PCR分析不同组织与不同时期性腺表达谱表明,雄鱼性腺中StAR基因的表达量显著高于雌、雄鱼其他各组织(P<0.05),提示StAR基因对雄鱼精巢发育起重要作用。雄鱼不同时期表达谱分析结果显示,StAR基因在66天前的精巢中不表达,在150天时表达量急剧增加,至2龄时表达量最高,3龄时表达量下降,说明该基因在精巢发育成熟过程中起重要作用。原位杂交结果显示,StAR基因主要在雄鱼精巢的精子细胞中表达,而在雌鱼的卵巢中不表达。研究表明,StAR基因在半滑舌鳎精巢发育中发挥作用,且可能在精子形成中发挥重要作用。

白斑狗鱼StAR基因克隆及其表达分析

【目的】克隆白斑狗鱼(Esox lucius)类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)基因(ElStAR)并分析其组织表达差异,为开展StAR基因生物学功能研究及揭示白斑狗鱼性腺发育机制提供基础资料。【方法】根据GenBank已公布的白斑狗鱼基因组测序结果(NC_047581.1)设计特异性引物,采用RT-PCR克隆ElStAR基因cDNA序列,通过ClustalX、ExPASy、TargetP 1.1、TMHMM 2.0和SignalP 5.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR进行ElStAR基因组织表达定量分析。【结果】ElStAR基因cDNA序列长度1485 bp,其开放阅读框(ORF)为864 bp,共编码287个氨基酸残基;ElStAR氨基酸序列与北极红点鲑StAR氨基酸序列的相似性最高(93.33%),与海鳟、条纹鲈鱼、金头鲷、大菱鲆、斑马鱼、半滑舌鳎的相似性均高于75.00%,而与小家鼠的相似性最低(59.15%);基于StAR氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示白斑狗鱼与北极红点鲑和海鳟等鲑科鱼类处于同一分支。ElStAR蛋白相对分子量为32.23 kD,理论等电点(pI)为8.98,为不稳定的亲水性蛋白;具有START结构域,无信号肽及跨膜结构,符合线粒体靶向肽的基本特征。ElStAR蛋白二级结构由α-螺旋(占40.77%)、无规则卷曲(占35.89%)、延伸链(占18.12%)和β-折叠(占5.23%)组成,其三级结构是由α-螺旋配合多个β-折叠卷曲盘旋而成。ElStAR基因在白斑狗鱼精巢、卵巢、头肾、肝脏、肌肉及脑组织中均有不同程度的表达,且在精巢中的相对表达量极显著高于在卵巢中的相对表达量(P<0.01),呈明显的性别二态性表达模式。【结论】ElStAR基因编码蛋白结构和功能十分保守,具有典型的START结构域,对胆固醇的运输和调节起重要作用。ElStAR基因在白斑狗鱼精巢及卵巢中的表达存在极显著差异,可能在维持白斑狗鱼精巢的发育形成中发挥重要作用。

牦牛StAR基因克隆及其生物信息学与组织表达特性的研究

旨在克隆获得牦牛StAR基因编码序列(CDS)并进行生物信息学分析,探究其mRNA组织表达特性。本研究以屠宰场采集的成年母牦牛心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、子宫组织(n=5),不同年龄(胎牛、1岁、2岁)牦牛的卵巢(n=3),不同发情周期(卵泡期、黄体期)的牦牛卵巢(n=3),黄体期黄牛的卵巢(n=3)及实验室冻存的牦牛颗粒细胞为研究材料。以牦牛黄体期卵巢cDNA为模板,用逆转录PCR克隆StAR基因,并使用MEGA7.0和ExPASy-ProtParam等软件分析其生物信息学特性;采用实时荧光定量PCR技术分析牦牛StAR基因组织表达特性。结果发现,StAR基因CDS区长858 bp,编码285个氨基酸,StAR蛋白总体带正电荷,属于碱性亲水稳定蛋白,无跨膜结构及信号肽,主要存在于细胞质和线粒体;StAR基因具有较高的保守性,符合物种进化规律。牦牛StAR基因在卵巢表达水平最高(P<0.01),且2岁时卵巢表达水平极显著高于胎牛和1岁龄(P<0.01),黄体期卵巢表达水平极显著高于卵泡期(P<0.01);黄体期黄牛卵巢中StAR基因的表达量极显著高于牦牛(P<0.01);在颗粒细胞的体外培养过程中StAR基因表达量逐渐上升,在培养24 h时达到高峰(P<0.01),随后显著降低。综上所述,StAR基因序列较为保守,在牦牛卵巢组织中表达最高,且表达水平随年龄与卵巢周期而变化,提示StAR基因可能参与牦牛卵巢及黄体功能相关的繁殖调控。

鸡StAR基因非同义单核苷酸多态性的生物信息学分析

以鸡StAR基因为研究对象,在分子水平上探究StAR编码区功能性位点。利用SIFT,PolyPhen-2,PANTHER和PROVEAN等4种方法预测对nsSNPs进行分析预测有害位点,使用SWISS-MODEL,Consurf server,Pymol,I-Mutant 3.0等软件对有害nsSNPs位点进行蛋白质的空间结构、氨基酸间氢键的改变及蛋白稳定性等相关分析。结果表明:从StAR基因的nsSNPs位点筛选出来6个主要有害突变(V125G,M144R,N148T,T204P,C224W和L247Q)。其中,M144R,N148T和T204P这3个位点氢键数目和空间结构发生变化,M144R,N148T,C224W和L247Q这4个位点降低了StAR蛋白质的稳定性,且M144R,N148T,T204P,C224W和L247Q均为高保守性位点。预测M144R,N148T,T204P,C224W和L247Q这5个位点可能为鸡StAR基因的潜在功能性位点。

黔北麻羊StAR基因的克隆、生物信息学分析及在单、多羔黔北麻羊不同性腺组织中的表达

本文旨在克隆获得黔北麻羊StAR基因编码序列并进行生物信息学分析,探究其mRNA在单、多羔黔北麻羊母羊不同组织中的表达水平,初步了解StAR基因对山羊产羔性状的影响机制。实验采用逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)以及生物信息学在线软件对实验样本和数据进行分析。结果显示:黔北麻羊StAR基因序列全长858 bp,共编码285个氨基酸,存在多个氨基酸的磷酸化位点。高级结构分析显示黔北麻羊StAR蛋白质二级结构主要由无规则卷曲与α-螺旋构成,三级结构预测结果与二级结构分析结果一致,同源性与系统进化树显示黔北麻羊StAR基因编码序列与绵羊的同源性最高,与鸡的同源性最低。qRT-PCR结果显示StAR基因mRNA在单、多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量最高,在子宫组织中的表达量最低,两者之间差异极显著,且StAR基因在多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于单羔黔北麻羊。本研究为进一步研究黔北麻羊StAR基因的功能及其对产羔性状的调节机制提供了基础数据。

STAR基因新发突变致先天性类脂性肾上腺皮质增生症1例报道

先天性类脂性肾上腺皮质增生症(congenital lipoid adrenal hyperplasia,CLAH)是先天性常染色体隐性遗传病,是类固醇激素合成过程中最严重和最罕见的一种类型。临床呈现失盐、肾上腺皮质功能减退、男性假两性畸形和女性性幼稚等表现。它是由类固醇生成急性调控蛋白(StAR)基因或编码胆固醇侧链裂解酶(P450scc)的基因CYP11A1突变引起,其中以StAR基因突变最为常见[1]。

先天性类脂质性肾上腺皮质增生症临床特点及StAR基因突变分析

该文回顾性分析2例先天性类脂质性肾上腺皮质增生症(LCAH)患儿的临床表现、类固醇激素谱及影像学检查结果,采用DNA直接测序法及限制性片段长度多态性(RFLP)技术对类固醇生成急性调节蛋白(St AR)基因突变进行分析。2例患儿均为46,XX女性,确诊年龄分别为4个月及2岁4个月。婴儿早期出现皮肤色素沉着、生长迟缓、低钠血症等肾上腺皮质功能低下表现,血ACTH显著增高,皮质醇正常或降低,各类雄性激素均未见增高。肾上腺超声提示双侧肾上腺增大或正常,经氢化可的松及9α-氟氢可的松替代治疗后生长发育正常。St AR基因突变分析显示患儿1为p.Q258X纯合已知无义突变;患儿2为p.E123K/IVS4+2T>A复合杂合突变,且为新突变,其父母分别为新突变IVS4+2T>A及p.E123K的携带者。保守性分析及Poly Phen-2软件预测提示p.E123K为致病性突变。RFLP分析显示患儿2及其父亲的PCR扩增产物经酶切后同时出现670、423、247?bp?3条条带,而其母亲及50例正常对照仅出现423和247bp两条条带,提示IVS4+2T>A突变改变氨基酸酶切位点。对于婴儿早期发生的肾上腺皮质功能低下的女性表型患儿应警惕LCAH,类固醇激素谱、核型分析及肾上腺超声有助诊断,确诊依赖St AR基因突变分析。

香猪卵巢StAR和CYP11A1基因的差异表达研究

为了揭示香猪繁殖调控的分子机制,本试验结合生物信息学分析方法对StAR和CYP11A1基因在香猪卵巢组织中的差异表达进行分析。运用实时荧光定量PCR方法检测高、低产群体6月龄香猪卵巢组织中StAR和CYP11A1基因的表达量变化;从香猪基因组中克隆两个基因的启动子区域,分析两个基因表达差异的分子机制。高通量转录组测序和实时荧光定量PCR检测结果均显示,高产香猪两个基因的表达量较高,启动子区序列长分别为1 144与970bp。StAR基因启动子区结合转录因子ER、COUP、Sp1等34种72个,转录起始位点上游68~698bp存在8个变异位点,但不影响转录因子的结合;与CYP11A1基因启动子区相结合的转录因子为Sp1、PU.1、C/EBPdel等30种75个,转录起始位点上游12~593bp存在5个变异位点,其中69bp处检测到C-T变异,高产香猪的T等位基因检出频率为17%,低产香猪为33%;对预测结果整合分析,T等位基因丢失了转录因子Sp1的结合位点。高、低产香猪之间StAR和CYP11A1基因的表达存在差异,CYP11A1基因启动子区69bp处的变异可能是基因表达量差异的原因之一。

先天性类脂性肾上腺皮质增生症33例临床特点及StAR基因分析

目的探讨类固醇生成急性调节蛋白(StAR)基因变异所致的先天性类脂性肾上腺皮质增生症(CLAH)患儿的临床和分子遗传学特点。方法回顾性分析2006至2021年上海交通大学医学院附属新华医院诊断及随访的33例CLAH患儿的临床表现、实验室检查、基因检测结果及随访情况(截至2021年12月)。结果 33例CLAH患儿中17例染色体核型为46, XX, 16例为46, XY;31例社会性别为女性, 2例为男性。33例CLAH确诊年龄为9.0(3.0, 34.5)月龄, 其中包含30例经典型和3例非经典型, 30例经典型CLAH均于新生儿或婴儿期起病, 表现为皮肤色素沉着(28例, 93%)、呕吐和(或)腹泻(19例, 63%)、体重不增(8例, 27%)等, 患儿均表现为女性外生殖器。实验室检查提示血促肾上腺皮质激素均升高[21例患儿(70%)>275 pmol/L]、皮质醇降低[47(31, 126)nmol/L]、低血钠[(126±13)mmol/L]、高血钾[(5.7±1.1)mmol/L]、17α-羟孕酮水平均正常。3例非经典型CLAH患儿同样有肾上腺皮质功能不全表现, 其中2例(1例46, XY和1例46, XX)于1岁后起病且外生殖器分别为男性和女性, 另外1例(46, XY)于2月龄起病, 外生殖器为男性伴小阴茎和尿道下裂。17例46, XX女性患儿中, ≥10岁的4例均有自发性青春期发育。共发现25种StAR基因变异, 常见的变异为p.Q258*(27%, 18/66)、p.K236Tfs*47(12%, 8/66)和p.Q77*(9%, 6/66), 发现6种未报道的新变异(c.358T>G、c.71314del、c.125del、c.745-1G>A、c.179-2A>C和外显子1缺失)。结论经典型CLAH主要表现为婴儿早期出现原发性肾上腺皮质功能不全且外生殖器为女性外观。p.Q258*、p.K236Tfs*47和p.Q77*是CLAH患者常见的致病性变异。

先天性类脂质性肾上腺皮质增生症临床及基因突变特点:病例报告及文献复习

目的探讨类固醇生成急性调控蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)基因突变致先天性类脂质性肾上腺皮质增生症(congenital lipoid adrenal hyperplasia,CLAH)的临床特征及分子遗传学特点。方法回顾性分析2020年1月广东省妇幼保健院收治的1例CLAH患儿的临床资料,采用高通量测序及Sanger测序进行基因分析。在万方数据库、中国知网、PubMed等数据库中检索StAR基因突变致CLAH的相关文献,检索时间为2000年1月1日至2020年12月31日,对文献报道的病例结果进行整理分析。结果本例患儿在4月龄发现反复呕吐、皮肤色素沉着等症状,实验室检查发现低血钠、高血钾,皮质醇、17-羟孕酮、雄烯二酮、睾酮、孕酮等类固醇激素均明显低下。肾上腺CT示双侧肾上腺正常结构消失。基因检测发现存在StAR基因c.772C>T(p.Q258X)及c.229C>T(p.Q77X)复合杂合突变,父母验证发现上述2个突变分别遗传自其父亲和母亲,确诊为StAR基因突变致CLAH。经糖、盐皮质激素替代治疗后症状逐渐好转,随访至1周岁,生长发育正常。本研究经文献检索,共检索到中文文献10篇,英文文献4篇,合并本例共报道32例CLAH。综合分析显示大部分CLAH患儿在婴儿期发病,常见的临床表现依次为皮肤色素沉着、呕吐和生长发育迟缓,社会性别均为女性;实验室检查提示大部分患儿有低钠血症、高钾血症,皮质醇、17-羟孕酮、雄烯二酮、睾酮等类固醇激素明显低下;经糖、盐皮质激素替代治疗后监测生长发育均正常;StAR基因突变的常见位点为c.772C>T(p.Q258X)。结论CLAH为先天性肾上腺皮质增生症的罕见类型,常在婴儿期起病,常表现为皮肤色素沉着,水、电解质紊乱,外阴呈女性化等。及时、合适的激素替代治疗可以改善患儿临床表现及预后,基因检测有助于CLAH的诊断。p.Q258X突变可能是中国人群StAR基因的热点突变。

星形孢菌素产生菌电转化条件的优化及其高产菌株的构建

目的提高星形孢菌素的产量。方法本研究以星形孢菌素产生菌(Streptomyces sp.ST-07)为出发菌株,采用电转化方法和应用PCR扩增星形孢菌素生物合成的调控基因staR,成功构建含不同启动子(kasO*p和ermE*p)的加强表达staR基因的重组工程菌,分别命名为ST-D-5和ST-H-23。结果通过对电转化条件的甘氨酸浓度、电场强度、菌丝体浓度、质粒浓度、孵育时间和孵育温度等关键参数优化,使电转化的效率从4×10^(6)提高至9.6×10^(8)(CFU/μg DNA);工程菌摇瓶发酵结果表明,与星孢菌素原始菌株ST-07相比,采用kasO*p启动子构建的工程菌ST-D-5星形孢菌素的产量提高了17%,最高单位可达923 mg/L。结论本文系统摸索了星形孢菌素产生菌的电转化条件,显著提高了电转化效率,不但为该菌株的高产遗传改造奠定了基础,而且对其他放线菌的遗传操作体系建立提供了有益借鉴。

不同程度邪毒证H22荷瘤小鼠肾上腺皮质酮合成酶及其转录因子表达的差异

目的:探讨小鼠荷瘤状态下不同程度邪毒证肾上腺皮质酮合成与分泌的差异。方法:在220只昆明种小鼠右腋下接种H22肝癌腹水细胞,复制肝癌荷瘤小鼠模型,于接种肿瘤后第9天进行小鼠四诊检测,依据邪毒程度将各荷瘤小鼠排序,并排除气血阴阳虚证小鼠,筛选邪毒壅盛证组18只、邪毒微弱证组18只,并以18只正常小鼠为对照组。第11天处死各组小鼠,剥离肿瘤称瘤重,用ELISA方法检测血浆激素含量;应用实时荧光定量PCR检测各组小鼠肾上腺组织Cyp11b1、Cyp11a1、Star、Fdx1、Fdxr、Mc2r、Nr4a1、Nr5a1、Nr0b1、Gata6基因mRNA表达,并以Gapdh和β-actin两个基因作内参照;应用Western blot方法检测St AR和CYP11A1蛋白表达。结果:邪毒壅盛证小鼠肿瘤质量明显大于邪毒微弱证组(P<0.05);不同程度邪毒证肝癌小鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)均高于正常组(P<0.05);皮质酮合成最后一步关键酶Cyp11b1、促肾上腺皮质激素受体(Mc2r)及铁氧还蛋白还原酶(Fdxr)基因表达在邪毒壅盛证组显著升高(P<0.05);转录抑制因子Nr0b1在邪毒壅盛证组明显低于邪毒微弱证组(P<0.05);转录因子Nr4a1、Nr5a1和Gata6基因表达在不同程度邪毒证肝癌小鼠均高于正常组(P<0.05);St AR蛋白表达在不同程度邪毒证肝癌小鼠均显著升高(P<0.05)、且邪毒壅盛证组显著高于邪毒微弱证组(P<0.05)。结论:小鼠肿瘤形成后,邪毒程度越重者,为适应机体慢性应激反应,其肾上腺皮质功能呈现失代偿性增加,导致垂体与肾上腺皮质激素储备功能减少,可能与邪毒壅盛证荷瘤小鼠带瘤生存期缩短有关,提示肿瘤早期治疗也需注意扶助正气。

类脂性先天性肾上腺皮质增生症合并甲基丙二酸尿症1例患儿的临床特点及基因突变分析

目的 通过分析1例STAR基因合并MMUT基因突变导致类脂性先天性肾上腺皮质增生症合并甲基丙二酸尿症患儿的病例资料,为相似疾病诊治提供参考。方法 回顾分析患儿临床资料,采集患儿及其父母外周血,应用trio全外显子组测序及Sanger测序技术对患儿遗传学特点进行分析。结果 患儿典型临床特征为转氨酶升高,总胆红素升高,总胆汁酸升高,皮肤色素重。经全外显子组测序技术发现患儿同时携带STAR与MMUT基因的复合杂合突变:STAR基因,c.135delT(p.S46Afs*18)与c.772C>T(p.Q258*);MMUT基因,c.1208G>A(p.R403Q)与c.729_730insTT(p.D244Lfs*39),分别来源于其表型正常的父母。目前为止,国内未见同时携带两个致病基因突变的案例被报道。结论 STAR与MMUT基因的复合杂合突变可能是该患儿的致病原因。

先天性类脂性肾上腺皮质增生症的临床及基因突变特点并文献复习

目的探讨儿童先天性类脂性肾上腺皮质增生症(CLAH)的临床及类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)基因突变特点。方法选择2018年7月至2019年5月,于首都儿科研究所附属儿童医院接受治疗的3例CLAH患儿为研究对象。回顾性分析其临床病例资料,包括临床表现、家系基因检测结果、治疗和随访结果等。以“先天性类脂性肾上腺皮脂增生症”“肾上腺皮质增生”“StAR基因”“congenital lipoid adrenal hyperplasia”“congenital adrenal hyperplasia”“StAR”等为中、英文关键词,在PubMed数据库、中国医知网、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、中国知网和万方数据库中,检索有关类CLAH及StAR基因突变相关文献,检索时间设定为各数据库建库至2019年5月1日。本研究经首都儿科研究所附属儿童医院伦理委员会批准(审批文号:SHERLL2020006),基因检测均征得患儿家属知情同意,并与其签署知情同意书。结果3例患儿的临床StAR基因突变特点如下。①临床表现:均在婴儿期起病,有皮肤色素沉,呕吐,体重不增等肾上腺功能不全症状。②实验室检查结果:均有低血钠、高血钾及低血糖,皮质醇水平显著降低,促肾上腺皮质激素(ACTH)水平明显升高。③肾上腺增强CT检查结果:均提示可见双侧肾上腺显著增生,表现为低密度影(类似液体密度)。④染色体核型分析结果:患儿1、3为46,XY,表现为女性外阴外观。⑤高通量测序结果:均发生StAR基因的纯合突变,突变位点分别位于c.772C>T,c.707_708delinsCTT和c.229G>A。本研究文献检索结果显示,国内文献曾报道23例CLAH患儿,均经StAR基因突变检测而被确诊,结合本研究3例,共计26例CLAH患儿纳入本研究。StAR基因的纯合突变中,突变位点位于c.772C>T(p.Q258X)为23.1%(12/52),c.707_708delAG ins CTT(p.K236Tfs*47)为15.4%(8/52),c.229G>A(p.Q77X)所占比例为15.4%(8/52)。结论CLAH为先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的罕见类型,常在婴儿期起病,可表现为水、电解质紊乱,男性女性化,可伴有梗阻性黄疸。StAR基因的纯合突变位点位于p.Q258X,这可能是中国人群StAR热点突变。临床医师应注意对具有上述临床症状患儿的CLAH鉴别诊断,基因检测有助于CLAH的诊断,并可为该病的遗传咨询提供参考依据。

染色体46,XY外生殖器男性化的先天性类脂质性肾上腺皮质增生症二例并文献复习

先天性类脂质性肾上腺皮质增生症(CLAH)是一种罕见的遗传病,常表现为肾上腺皮质功能低下及男性女性化表型等一系列临床症状。本研究报道2例46,XY外生殖器男性化的CLAH患儿,总结其临床表现及遗传学特点,并复习国内外文献,以提高对该病的认识。