食管鳞状细胞癌中微管不稳定蛋白stathmin表达及其与预后的关系

目的探讨微管不稳定蛋白stathmin在食管鳞状细胞癌中的表达水平及其与临床病理特征、预后的关系。方法收集2007年1月至2010年12月在复旦大学附属中山医院手术切除的496例食管鳞状细胞癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织stathmin的表达情况,分析其表达差异与患者临床病理特征和预后的关系。结果496例食管鳞状细胞癌患者中,266例为Ⅰ~Ⅱ期,230例为Ⅲ~Ⅳ期。Stathmin蛋白不表达、低表达和高表达的比例分别为2.4%、87.1%和10.5%。Stathmin高表达与肿瘤分化差相关(P=0.040)。生存分析发现:stathmin高表达组患者的无疾病生存期(disease free survival,DFS)和总生存期(overall survival,OS)与不表达/低表达组相比,有预后差的趋势,但差异无统计学意义(DFS:P=0.159;OS:P=0.176)。在Ⅰ~Ⅱ期患者中,stathmin高表达组比stathmin不表达/低表达组的预后差(DFS:P=0.032;OS:P=0.018);但是在Ⅲ~Ⅳ期患者中,stathmin高表达组与stathmin不表达/低表达组的预后差异无统计学意义(DFS:P=0.785;OS:P=0.613)。Ⅰ~Ⅱ期中stathmin高表达患者的预后,与Ⅲ~Ⅳ期stathmin不表达/低表达患者或者高表达患者差异无统计学意义。结论Ⅰ~Ⅱ期食管鳞状细胞癌中,stathmin高表达的患者预后差。

子宫颈鳞状上皮内病变中Stathmin表达及其与预后的关系

目的探讨Stathmin在子宫颈鳞状上皮内病变(cervical intraepithelial neoplasi,CIN)组织中的表达,及其与不同级别CIN及复发的关系。方法采用免疫组化EliVision两步法检测30例正常子宫颈组织、150例CIN组织[低级别鳞状上皮内病变(CIN1)50例,高级别鳞状上皮内病变(CIN2、CIN3)各50例]以及30例子宫颈鳞状细胞癌组织中Stathmin蛋白的表达,分析其表达与CIN的分级及复发之间的关系。结果CIN3中Stathmin蛋白的表达显著高于CIN1及CIN2,差异均有统计学意义(P<0.05),但CIN1与CIN2之间差异无统计学意义。且Stathmin表达与上皮内病变复发呈正相关(r s=0.563,P<0.05)。结论Stathmin在CIN3中的高表达可作为诊断的辅助指标,且对CIN的复发有一定的预后价值。

Stathmin表达抑制的鼻咽癌细胞系建立

目的建立stathmin表达抑制的鼻咽癌细胞系,为stathmin在鼻咽癌中的生物学功能研究提供实验基础。方法合成stathmin特异性干扰DNA片段,将合成的干扰DNA片段克隆到siRNA质粒表达载体pGenesil-1.1,载体导入JM109菌株进行扩增,酶切和测序对重组表达载体进行鉴定。应用脂质体将质粒表达载体转入鼻咽癌5-8F细胞,采用G418进行筛选;RT-PCR和Westernblot检测stathmin表达。结果酶切和测序分析证实,插入siRNA质粒表达载体中的stathmin干扰DNA片段的序列和方向正确。表达分析表明,构建的stathmin特异性siRNA质粒表达载体能有效沉默stathmin在鼻咽癌5-8F细胞中的表达。结论 stathmin表达抑制的鼻咽癌细胞系建立成功。

Stathmin表达水平与乳腺癌细胞侵袭能力相关性研究

目的：探讨乳腺癌细胞 MDA-MB-231和 MCF-7中 Stathmin基因表达水平与细胞生长、黏附、侵袭等生物学行为之间的关系，为进一步研究乳腺癌转移机制奠定实验基础。方法应用 RT-PCR和 Western Blot方法检测 MDA-MB-231和 MCF-7细胞中 Stathmin基因的表达水平，同时利用细胞增殖试验、细胞黏附试验和细胞侵袭试验检测 MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长、黏附、侵袭能力，分析Stathmin表达与细胞的生长、黏附、侵袭能力之间的关系。结果 RT-PCR和Western Blot检测结果显示，Stathmin基因在 MDA-MB-231和 MCF-7细胞中表达均高于正常对照细胞（F＝10.173，P＜0.05），且 MDA-MB-231细胞中的表达水平明显高于 MCF-7细胞中的表达水平（t＝4.562，P＜0.05）。而 MDA-MB-231细胞在生长、黏附和侵袭能力方面均强于 MCF-7细胞（P＜0.05）。结论 Stathmin表达水平高的乳腺癌细胞相应的生长、黏附、侵袭能力较强，Stathmin表达水平与细胞侵袭能力密切相关。

食管癌患者血清MIP-3α、CA125、Stathmin表达与预后的相关性

目的探讨食管癌患者血清巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)、糖类抗原125(CA125)、Stathmin表达与病理特征及预后的相关性。方法选取2015年1月至2017年3月本院收治的食管癌患者102例(食管癌组),纳入健康体检者102例为对照组。采集入组患者和健康体检者清晨空腹状态下的肘静脉血5 mL,用酶联免疫吸附法检测血清MIP-3α、CA125、Stathmin水平。根据临床病理特征对102例食管癌患者进行分组,比较组间血清MIP-3α、CA125、Stathmin水平差异性。102例患者均获得随访,随访截止时间为2020年3月,记录患者生存情况,采取受试者工作曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)分析血清MIP-3α、CA125、Stathmin对预后的预测价值,分析血清指标之间的相关性。结果食管癌组血清MIP-3α、CA125、Stathmin水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。食管癌患者血清MIP-3α、CA125、Stathmin表达与肿瘤最大径、临床分期、分化程度、浸润程度、局部淋巴结转移具有显著的关联性(P<0.05)。102例患者3年生存率为39.22%(40/102)。死亡组血清MIP-3α、CA125、Stathmin水平均高于存活组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3项指标联合检测的AUC值为0.974,明显高于单一指标检测(P<0.05);血清MIP-3α、CA125、Stathmin两两之间均呈显著正相关(r=0.428、0.479、0.449,P<0.05)。结论食管癌患者血清MIP-3α、CA125、Stathmin呈高表达,且与肿瘤最大径、临床分期、分化程度、浸润程度、局部淋巴结转移具有显著的关联性,可用于评估病情进展情况,对患者预后判断也有较高的应用价值。

Stathmin表达与脑胶质细胞瘤侵袭转移的关系研究

目的研究Stathmin蛋白表达与星形胶质细胞瘤分级的关系。方法免疫组化方法检测Stath-min蛋白在脑胶质细胞瘤62例和正常脑组织20例中的表达。结果星形胶质细胞瘤组织中stathmin阳性率为77.4%(48/62),正常脑组织中Stathmin阳性率为30.0%(6/20),两组之间差异有显著性(P<0.05)。良性胶质细胞瘤(Ⅰ级+Ⅱ级)中的阳性率为46.2%(12/26),恶性胶质细胞瘤(Ⅲ级+Ⅳ级)中阳性率为100%(36/36),两者之间差异有显著性(P<0.05)。结论 Stathmin蛋白表达与星形胶质细胞瘤分级有关,可作为判别星形胶质细胞瘤分化程度的指标之一。

甲状旁腺相关肽调控骨骺干细胞后的stathmin表达

目的研究甲状旁腺相关肽全长及部分肽段PTHrp(107-139)对体外培养的骨骺干细胞的调控作用并检测调控后stathmin的表达。方法利用免疫磁珠分选细胞的方法,分离出原代骨骺干细胞。转化、提取、鉴定所需的三种质粒。用脂质体介导法将质粒转染入骨骺干细胞,通过G418筛选得到抗性克隆并将其分别扩增培养,并加入1.0g/ml的强力霉素进行诱导,并设置空白对照。转染后第4小时以及24、72、96小时对各组细胞用Western-blot检测stathmin的表达水平,并抽提各组细胞的RNA进行逆转录,然后通过RT-PCR的方法检测细胞内stathmin的mRNA表达变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果Tet-on基因表达系统能准确的调控骨骺干细胞中的基因表达。质粒转染后骨骺干细胞数量明显增多。PTHrp全长及部分肽段质粒转染实验组,其骨骺干细胞中stathmin的蛋白水平和mRNA水平均逐渐增加,且增高程度大致相当,空白对照组无明显变化。结论甲状旁腺相关肽及其肽段PTHrp(107-139)均可能有促进骨骺干细胞增殖的作用,stathmin在调控中出现高表达,提示细胞增殖。[关键词]甲状旁腺相关蛋白;骨骺干细胞;

Stathmin表达与食管鳞癌细胞对紫杉醇敏感性的机制研究

目的微管解聚蛋白Stathmin在食管鳞癌中的表达水平显著升高,而紫杉醇是靶向微管的临床食管癌常用化疗药物,文中探讨Stathmin高表达对食管鳞癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法以食管鳞癌KYSE 510和KYSE 170细胞为研究对象,构建过表达STMN1基因的食管鳞癌细胞系KYSE 510-Stathmin、KYSE 170-Stathmin和对照细胞KYSE 510-Control、KYSE 170-Control;过表达Stathmin的设定为Stathmin过表达组,同时以转染空载体筛选获得的单克隆细胞KYSE 510-Control做为对照组。MTT实验和集落形成实验比较实验组细胞与对照组细胞对紫杉醇敏感性;流式分析检测紫杉醇处理后KYSE 510-Stathmin与KYSE 510-Control细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡和自噬相关分子的变化情况。结果在KYSE510和KYSE 170细胞中外源表达STMN1基因,Stathmin蛋白水平显著高于对照细胞(P<0.01);紫杉醇浓度为50、100、250nmol/L处理24 h,KYSE 510-Control的抑制率均高于KYSE 510-Stathmin细胞(P<0.01);250 nmol/L的紫杉醇处理24、48、60h,KYSE 510-Control细胞抑制率均高于KYSE 510-Stathmin(P<0.01),在KYSE 170-Stathmin细胞中获得一致性结果;紫杉醇处理后,KYSE 510-Stathmin集落数量显著高于KYSE 510-Control(P<0.01);流式细胞仪检测KYSE 510-STMN1细胞凋亡比例低于KYSE 510-Control细胞[(11.90±0.78)%vs(29.63±3.26)%,P<0.05]。Western blot提示凋亡相关分子Caspase8和Caspase9活化片段增多。结论过表达Stathmin影响食管鳞癌细胞对微管相关化疗药物紫杉醇的敏感性。

Stathmin表达与局部晚期口腔鳞癌患者TPF诱导化疗远期疗效的相关性分析

目的:验证微管解聚蛋白(Stathmin)能否预测口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者从多西紫杉醇、顺铂、5氟尿嘧啶(TPF)诱导化疗中远期获益。方法:收集2008年3月—2010年12月入组TPF诱导化疗临床试验的256例OSCC患者的远期随访结果。收集患者肿瘤活检标本,进行Stathmin免疫组织化学染色并评分。根据Stathmin表达评分进行亚组预后分析。采用SPSS 13.0软件包将Stathmin和其他基线特征进行单因素、多因素和Cox回归模型预后分析。结果:Stathmin的表达可预测OSCC患者对TPF诱导化疗的反应,Stathmin低表达的OSCC患者从TPF诱导化疗中获益,而高Stathmin表达的OSCC患者不能获益于TPF诱导化疗。Stathmin的表达是独立的预测因子。结论:Stathmin是独立的预测OSCC诱导化疗疗效的生物标志物,基于Stathmin筛选指导OSCC患者接受TPF诱导化疗的后续临床研究具有重要意义。

宫颈液基细胞块中P16、IMP3和Stathmin表达的意义

目的:探讨细胞块技术检测宫颈液基脱落细胞(LCT)中抑癌基因P16、抑癌基因IMP3和Stathmin蛋白表达在宫颈病变诊断的意义和价值。方法:采用免疫组化法检测146例宫颈脱落细胞块中P16、IMP3以及Stathmin的表达情况。结果:随着病变级别的升高而P16、IMP3和Stathmin阳性表达率和强表达率有升高的趋势,其在高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组、鳞状上皮细胞癌(SCC)组的阳性表达率显著高于其他组(P<0.05);SCC组、HSIL组、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组与未见上皮内病变(NILM)组比较,P16、IMP3和Stathmin蛋白3指标的同一指标阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在HSIL组和SCC组病例中,P16、IMP3和Stathmin三者表达呈正相关。结论:将LCT标本行细胞块制作、联合检测P16、IMP3和Stathmin表达,可能能提高宫颈癌筛查的准确性,为指导治疗及评估预后的进一步研究奠定了基础。

瓠瓜KNOX基因家族全基因组鉴定及组织表达分析

【目的】探明瓠瓜KNOX基因家族特征,在瓠瓜全基因组水平上对KNOX基因家族成员进行鉴定和分析,研究其组织表达模式。【方法】利用生物信息学方法,对瓠瓜KNOX家族基因成员进行鉴定、编码蛋白理化性质分析及家族成员结构域和保守基序分析,利用MEGA 5.05软件构建系统进化树,采用实时荧光定量PCR技术,分析KNOX基因在瓠瓜不同组织(根、茎、叶、花、果实)中的表达情况。【结果】鉴定到12个瓠瓜KNOX家族基因,这些基因分布在6条染色体上,且均定位于细胞核。大多数瓠瓜KNOX家族蛋白含有同源异型盒蛋白特有的4种结构域KNOX1、KNOX2、ELK和Homeobox_KN。系统进化分析将瓠瓜KNOX基因分为KNOX ClassⅠ和KNOX ClassⅡ2大类群,2个类群又可进一步分为5个分支,其中ClassⅠ-C为瓠瓜特有的进化分支。KNOX基因启动子区有多个激素响应元件和植物生长相关元件。组织表达分析发现,瓠瓜KNOX基因具有不同的表达模式,KNOX ClassⅠ类基因表达具有组织特异性,在根、茎和果实中表达量较高,在其余组织中表达量较低或不表达,其中Lsi04G014450在根和茎中表达量最高,Lsi11G006380在果实中表达量最高;KNOX ClassⅡ类基因在所有组织中均有较高表达。【结论】瓠瓜KNOX基因家族有12个成员,分布于6条染色体上,在进化关系上可分为5组,具有瓠瓜特有的进化分支,在不同组织中的表达具有特异性。

笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响

本试验旨在探讨笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响。选用21日龄黄脚麻鸡720只,3层层叠式笼内饲喂,鸡笼规格为长×宽×高=1.2 m×0.8 m×0.4 m,公鸡和母鸡分开饲养,均随机分为4组(每组5个重复),笼养密度分别为15(低密度组)、17(中密度组)、19(中高密度组)和21只/m 2(高密度组)。试验期42 d。结果表明:1)对于公鸡,21~42日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05);43~63日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组和高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。对于母鸡,21~42日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组(P<0.05),高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05);43~63日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。2)对于公鸡,低密度组肝脏重量显著低于其他各组(P<0.05),肝脏指数显著低于高密度组(P<0.05)。3)对于母鸡,中密度组血清超氧化物歧化酶活性显著高于高密度组(P<0.05),中高密度组血清丙二醛含量显著高于高密度组(P<0.05)。4)对于公鸡,中密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05)。对于母鸡,高密度组十二指肠隐窝深度显著高于中高密度组(P<0.05),中高密度组十二指肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05);高密度组空肠绒毛高度显著低于中密度组和中高密度组(P<0.05),高密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著低于低密度组(P<0.05);高密度组回肠隐窝深度显著高于其他各组(P<0.05)。5)对于公鸡,中高密度组空肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA相对表达量显著高于其他各组(P<0.05)。对于母鸡,中高密度组空肠核因子E2相关因子2(Nrf2)和Toll样受体4(TLR4)mRNA相对表达量显著高于低密度组(P<0.05)。由此可见,高笼养密度会对黄羽肉鸡生长性能、抗氧化能力、肠道组织形态等相关指标产生影响;笼养密度可能通过影响肠道抗氧化和免疫相关基因表达影响黄羽肉鸡肠道免疫功能。

LHCGR胞外结构域蛋白的生信分析、原核表达及纯化

目的为获得小鼠LHCGR胞外结构域蛋白(LHCGR-1),分析其结构及理化性质,为今后研究该蛋白功能及筛选与之相互作用的小分子化合物奠定基础。方法根据NCBI中小鼠LHCGR氨基酸序列合成目的基因Lhcgr-1,经生物信息学分析后,将该基因插入至表达载体pET-28a(+),并转化至BL21(DE3)感受态细胞中;经IPTG诱导,表达重组蛋白pET-28a-LHCGR-1,利用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定,之后对该蛋白进行纯化,并通过分子对接技术预测该蛋白与LH、CG的相互作用。结果预测LHCGR-1蛋白分子量为40749.08,由367个氨基酸组成,等电点理论值为5.47;氨基酸序列中有29个丝氨酸位点、10个苏氨酸位点和5个酪氨酸位点;成功构建了表达载体pET-28a-LHCGR-1并获得纯化的目的蛋白;分子对接结果表明目的蛋白可以与LH、CG通过多种相互作用,形成稳定的复合物,有利于其发挥原有的生物学功能。结论成功构建了小鼠胞外结构域蛋白LHCGR-1在大肠杆菌内的原核表达体系并获得了纯化蛋白,分子对接预测该蛋白具有生物学功能,提示该蛋白可以用于后续研究。

黄芩苷对多杀性巴氏杆菌感染猪巨噬细胞后炎症因子表达及信号通路影响的研究

为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路3个关键蛋白(p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK)的表达水平;采用ELISA和荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)分析检测低浓度剂量黄芩苷(L组,20μmol/L)、中浓度剂量黄芩苷(M组,40μmol/L)和高浓度剂量黄芩苷(H组,60μmol/L)对Pm感染的猪巨噬细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β分泌水平及其m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)和模型组(HN-13);利用抑制剂SCH772984阻断ERK通路,采用ELISA和RT-qPCR检测黄岑苷对Pm感染的HD11细胞内炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达及m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)、模型组(HN-13)、抑制组(HN-13+抑制剂)。结果显示:与HN-13株处理0 min组相比,随着感染时间的延长,HN-13株感染HD11细胞中p-ERK/ERK的蛋白表达量逐渐升高(P<0.01),而p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白表达量均未发生显著变化(P>0.05),表明,HN-13株可使HD11细胞炎症相关ERK通路蛋白表达增强,且与作用时间呈正相关。与模型组(HN-13)相比,3个浓度剂量的黄芩苷均显著抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌水平及m RNA转录水平(P<0.05),且抑制作用随着黄芩苷浓度升高而增强。与抑制组相比,黄芩苷与抑制剂共处理组可以显著抑制HN-13感染的HD11细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌及m RNA转录水平(P<0.05)。综上所述,黄芩苷可以抑制Pm感染的HD11细胞中ERK通路相关蛋白的表达和分泌,进而发挥抗炎作用。本研究为研制防治Pm引起的猪肺疫的新药提供了思路。

荔枝GRF基因家族的全基因组鉴定及表达分析

为揭示荔枝(Litchi chinensis)GFR基因的功能,对荔枝生长调控因子(LcGRF)基因家族进行了全基因组鉴定和分析,并研究其在荔枝中的表达模式。基于荔枝基因组数据库,使用生物信息学软件对LcGRFs家族成员进行全基因组鉴定,分析基本理化性质、染色体定位、基因结构、进化关系、蛋白保守基序、顺式作用元件和时空表达情况进行系统分析。共获得12个GRF基因,不均匀地分布在10条染色体上,内含子2~5个。蛋白保守基序分析发现,荔枝GRF蛋白均含有保守的motif1(WRC)和motif2(QLQ),进化分析LcGRF划分为5个亚家族,LcGRFs启动子上存在大量的光、植物激素、非生物胁迫响应以及生长发育相关的顺式作用元件。不同转录组表达模式结果显示,各个组织中呈现出多样化的表达特征,表明不同成员可能在荔枝不同生长发育过程中发挥调控作用,参与调节荔枝的生长发育。研究显示,荔枝GRF家族成员有12个,划分为5个亚家族。

心理资本对大学生压力知觉的影响:认知重评的中介效应和表达抑制的遮掩效应

目的:考察心理资本对大学生压力知觉的影响以及认知重评的中介效应和表达抑制的遮掩效应。方法:利用心理资本问卷、情绪调节量表和压力知觉量表对1502名大学生进行问卷调查,采用SPSS 24.0进行描述性统计分析,采用PROCESS进行中介效应分析。结果:1压力知觉与心理资本(r=-0.67,P<0.001)、认知重评(r=-0.48,P<0.001)和表达抑制(r=-0.08,P<0.01)显著负相关,心理资本与认知重评(r=0.65,P<0.001)、表达抑制(r=0.18,P<0.001)显著正相关,认知重评与表达抑制(r=0.37,P<0.001)显著正相关;2中介效应结果表明,控制性别后,认知重评在心理资本对大学生压力知觉的影响间具有中介效应,表达抑制在心理资本对大学生压力知觉的影响间具有遮掩效应。结论:通过提升大学生的心理资本、增加大学生对认知重评策略的使用频率和减少对表达抑制策略的使用频率来降低其感知的压力。

大白菜BrCYP83B1基因的克隆及表达分析

【目的】细胞色素P450家族是十字花科植物硫苷合成重要的酶系,其中CYP83亚家族主要参与核心结构的合成,旨在探究大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)CYP83B1基因的功能。【方法】利用RT-PCR技术克隆BrCYP83B1基因,通过生物信息学软件分析其编码蛋白理化性质、同源性及启动子顺式作用元件,利用RT-qPCR技术分析BrCYP83B1的表达模式,并构建其植物超表达载体。【结果】BrCYP83B1 cDNA序列全长为1500 bp,编码499个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450超家族,主要定位于细胞质,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,与甘蓝型油菜、青花菜的CYP83B1蛋白具有较高的同源性。启动子分析表明,该基因启动子区域包含水杨酸、脱落酸及茉莉酸甲酯等激素响应的顺式作用元件,说明BrCYP83B1基因表达可能受激素调控。RT-qPCR分析结果表明,BrCYP83B1基因在大白菜的根、茎、叶、花和果中均有表达,且以叶中的表达量最高;茉莉酸甲酯够显著促进该基因的表达,而水杨酸处理对其表达具有一定的抑制作用,脱落酸处理下基因先上调后又下调。【结论】BrCYP83B1可能参与大白菜对激素的响应调控。

急性脑出血模型大鼠脑组织中差异表达基因测序的验证及功能分析

背景:急性脑出血中存在差异表达的基因,这些基因与脑出血发生发展有关。目的:筛选急性脑出血大鼠模型脑组织中差异表达的基因和关键基因,并采用qPCR进行验证,分析关键基因与脑出血后神经功能、脑组织含水量的关系。方法:78只SD大鼠随机分为2组:脑出血组大鼠于右侧尾状核部位注射胶原酶构建脑出血模型,假手术组大鼠于相同部位注射等量生理盐水。运用TRIzol法将2组大鼠的脑组织提取出RNA,转录组测序,筛选急性脑出血脑组织的差异表达的基因,经过qPCR验证,分析基因与脑出血后神经功能、脑组织含水量的关系,并结合生物信息学对关键基因进行GO、KEGG功能富集分析。结果与结论:①筛选出10个关键基因,分别是CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E、CCL20;②脑出血组的关键基因GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E含量低于假手术组(P<0.05),CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、CCL20含量高于假手术组(P<0.05);③关键基因GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E含量与脑组织含水量、神经功能缺损评分正相关(P<0.05),CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、CCL20含量与脑组织含水量、神经功能缺损评分负相关(P<0.05);④GO分析显示基因在生物过程差异表达基因主要富集于白细胞趋化性、趋化因子介导的信号通路;细胞组成差异表达基因主要富集于阳离子通道复合物、离子通道复合物;分子功能差异表达基因主要富集于门控通道活动、离子通道活动;⑤KEGG分析示基因集中于TNF信号通路、谷氨酸能突触、GABA能突触;⑥结论:在脑出血中出现差异表达的基因为CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E、CCL20,这些基因与脑出血后脑组织含水量、神经功能相关,这些基因主要富集在细胞组分、结合功能、细胞突起等相关的生物学功能上。

低温处理下青花菜衰老过程中叶绿素降解相关基因的表达

为研究不同低温处理对青花菜黄化衰老过程中叶绿素变化及叶绿素降解相关基因表达量的影响。以兰州高原特色蔬菜‘耐寒优秀’品种的青花菜为试验材料,设置近冰温(-0.7℃~-0.4℃)、4℃、10℃3个贮藏温度。结果表明,近冰温(-0.7℃~-0.4℃)处理组在整个贮藏期叶绿素含量显著高于4℃、10℃处理,且L^(*)、a^(*)和b^(*)显著低于4℃和10℃处理。在整个贮藏期,近冰温处理的青花菜BoCLH1(叶绿素酶1)和BoCLH2(叶绿素酶2)的表达量显著低于4℃、10℃处理,这说明近冰温处理抑制了青花菜贮藏期BoCLH1(叶绿素酶1)和BoCLH2(叶绿素酶2)的表达,而4℃、10℃处理诱导了青花菜贮藏期BoCLH1(叶绿素酶1)和BoCLH2(叶绿素酶2)的表达;近冰温处理的青花菜BoPPH(脱镁叶绿素酶)的表达量随着贮藏时间的延长不断下降,而在4℃和10℃处理组中在贮藏15 d时有显著上升,且始终高于近冰温处理组。近冰温处理的BoPaO(脱镁叶绿酸a加氧酶)表达量高峰出现明显滞后,而BoRCCR(红色叶绿素代谢产物还原酶)的表达量在贮藏过程中始终显著高于4℃和10℃处理组。可见,近冰温处理可有效抑制叶绿素的降解,延缓青花菜组织衰老。

羽衣甘蓝BoLMI基因的克隆及时空表达分析

【目的】探究羽衣甘蓝裂叶表型形成的分子机制,研究BoLMI基因对裂叶形成的作用。【方法】以裂叶羽衣甘蓝DH系为试验材料,利用同源克隆技术,成功获取基因完整的cDNA序列,将其命名为BoLMI。【结果】序列分析发现,BoLMI基因全长531个碱基对,共编码176个氨基酸,其蛋白分子量为20 789.35 Da,理论等电点为7.24。根据Pfam保守结构域分析,BoLMI蛋白包含homeobox保守结构域。系统发育分析结果显示,羽衣甘蓝的BoLMI基因与甘蓝型油菜以及结球甘蓝的BoLMI基因同属于一个分支,亲缘关系较近。BoLMI蛋白是位于细胞核内的可溶性蛋白,包含1个跨膜结构域,无信号肽序列。qRT-PCR分析表明,BoLMI基因在裂叶羽衣甘蓝的幼苗期表达水平较高,在莲座期表达水平较低;在羽衣甘蓝莲座期,裂叶品种不同部位叶片BoLMI基因的表达水平均高于圆叶品种,其中在第1片叶的表达量最高。裂叶品种和圆叶品种不同叶片BoLMI基因的表达量差异显著。【结论】推测BoLMI基因在羽衣甘蓝裂叶形成中起重要作用,为加速羽衣甘蓝叶形育种提供了理论基础。