目的探讨信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在牙移动中的作用,为改善正畸牙槽骨塑建与重建提供证据。方法体内实验选取8周龄雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分为对照组(牙移动)、实验组...目的探讨信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在牙移动中的作用,为改善正畸牙槽骨塑建与重建提供证据。方法体内实验选取8周龄雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分为对照组(牙移动)、实验组(牙移动加STAT3抑制剂stattic局部注射),于牙移动的第7天、第14天收集实验区域牙槽骨标本进行micro-CT扫描,评估骨体积分数(bone volume/tissue volume,BV/TV)、骨小梁数目(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)、骨密度(bone mineral density,BMD),测量牙移动量。体外实验选取小鼠成骨前体细胞MC3T3-e1和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7于Transwell^■培养板共培养3d,分为对照组(空白)和实验组(加入STAT3抑制剂stattic);以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨分化;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测破骨分化;qRT-PCR检测成骨细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA表达。结果实验组牙槽骨骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨密度(BMD)在第14天时较对照组明显降低,Tb.Sp在第14天时明显增高;以上指标第7天时的2组间差异无统计学意义。与对照组相比,实验组牙移动量在第7天时明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);第14天时2组牙移动量差异无统计学意义(P>0.05)。体外实验ALP染色和TRAP染色显示,抑制剂同时抑制成骨和破骨分化;qRT-PCR结果显示,抑制剂抑制成骨前体细胞RANKL、OPG mRNA表达,升高RANKL/OPG mRNA比值。结论抑制STAT3的激活可导致成骨、破骨活动同时被抑制,使正畸牙移动速率减慢、牙槽骨骨质疏松。STAT3可能在调控正畸牙槽骨塑建与重建中发挥重要作用。展开更多
目的通过信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化抑制剂Stattic的应用,探讨STAT3磷酸化在白塞病(Behcet’s disease,BD)发病机制中的作用及其与BD活动的关系。方法采集BD活动期(BD-A...目的通过信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化抑制剂Stattic的应用,探讨STAT3磷酸化在白塞病(Behcet’s disease,BD)发病机制中的作用及其与BD活动的关系。方法采集BD活动期(BD-A)、BD缓解期(BD-R)患者各10例和健康对照(HC)10例的外周血各15 mL,分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。将各组PBMC分为Stattic抑制剂亚组和空白对照亚组。Stattic抑制剂亚组中加入Stattic 2.5μmol/L和1 640培养基共5 mL,空白对照亚组仅加1 640培养基5 mL。使用Western blot和流式细胞术检测PBMC中STAT3及其磷酸化(pSTAT3)蛋白质水平;ELISA和RT-PCR分别检测TNF-α、IFN-γ、IL-17蛋白质和mRNA水平。采用双因素方差分析和Bonferroni post hoc test事后检验分析各项检测结果。结果与健康对照比较,BD患者pSTAT3、STAT3蛋白质水平,TNF-α、IFN-γ、IL-17蛋白质和mRNA水平均升高;与空白对照亚组比较,Stattic抑制剂亚组pSTAT3、STAT3蛋白质水平,TNF-α、IFN-γ、IL-17蛋白质和mRNA水平均降低。BD活动期pSTAT3蛋白质水平,TNF-α、IFN-γ和IL-17蛋白质和mRNA水平均显著高于BD缓解期。结论 STAT3通路激活可能通过介导BD患者TH1、TH17活化而与BD活动性相关。展开更多
目的构建信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法。方法分别构建pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体,利用脂质体...目的构建信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法。方法分别构建pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体,利用脂质体转染技术将二者共转入HEK-293T细胞,利用ECFP和EYFP 2种荧光蛋白之间能量共振转移,检测磷酸化STAT3分子的二聚化水平,并检测Stattic对二聚化的影响。结果成功构建了pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体。将2种荧光报告载体共转染HEK-293T细胞后,Western Blot检测结果显示STAT3以及p-STAT3的表达水平明显增加。以458nm波长激发ECFP,其发射波长可激发EYFP。加入STAT3二聚化抑制剂Stattic后,荧光强度降低,且呈现一定的剂量依赖性。结论基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型构建成功。展开更多
文摘目的构建信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法。方法分别构建pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体,利用脂质体转染技术将二者共转入HEK-293T细胞,利用ECFP和EYFP 2种荧光蛋白之间能量共振转移,检测磷酸化STAT3分子的二聚化水平,并检测Stattic对二聚化的影响。结果成功构建了pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体。将2种荧光报告载体共转染HEK-293T细胞后,Western Blot检测结果显示STAT3以及p-STAT3的表达水平明显增加。以458nm波长激发ECFP,其发射波长可激发EYFP。加入STAT3二聚化抑制剂Stattic后,荧光强度降低,且呈现一定的剂量依赖性。结论基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型构建成功。
