ste7与ste15双基因敲除对依博素生物合成的影响

【目的】研究ste7和ste15基因双敲除对依博素生物合成的影响。【方法】通过基因同源重组双交换,对ste15基因缺失突变株Streptomyces sp.139(ste15-)再进行ste7基因的敲除,经Southern杂交验证,获得了ste7和ste15双基因缺失变株Streptomyces sp.139(ste7-ste15-)。对该突变株进行了基因互补。气相色谱分析ste7和ste15双基因缺失突变株及互补株产生的胞外多糖单糖组分,排阻色谱测定衍生物的重均分子量,ELISA法测定衍生物的IL-1R拮抗活性,并与依博素进行比较分析。【结果】获得ste7和ste15双基因缺失株Streptomyces sp.139(ste7-ste15-)及互补株。双基因缺失株产生的胞外多糖与依博素相比,葡萄糖与岩藻糖含量明显降低,分子量变小,生物活性明显下降。基因互补株产生的胞外多糖中葡萄糖与岩藻糖含量恢复。【结论】ste7和ste15基因编码产物参与了依博素生物合成中单糖重复单元序列的形成过程,在依博素的生物合成中起重要作用;变株产生的依博素新衍生物体内外活性有待进一步研究。

一个水稻双功能激酶基因的克隆及特征(英文)

从水稻中分离克隆出一个双功能激酶(OsSTY)基因,它编码一个含417个氨基酸的蛋白,其分子量为45 926 Da,等电点为7·689。OsSTY参与多种胁迫条件下的信号传导途径。低温或高温(4℃和37℃)处理后,OsSTY激酶的表达显著提高。机械损伤、水杨酸、乙烯等处理也促进该基因转录。另外,OsSTY基因在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ste7基因缺失株(ste7/ste7)中的异源表达能够抑制该菌株在氮源饥饿条件下假菌丝生长的缺陷。Ste7是酿酒酵母的一个丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸双功能激酶,它与OsSTY的激酶功能域有32%的同源性和50%的相似性。这揭示出OsSTY激酶能够校正,至少能部分地校正酿酒酵母ste7基因缺失株的假菌丝生长缺陷。