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油茶SAD基因的全长cDNA克隆及生物信息学分析 被引量:42
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作者 张党权 谭晓风 +4 位作者 陈鸿鹏 曾艳玲 蒋瑶 李魏 胡芳名 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期155-159,共5页
As a high-grade edible oil tree native in China,tea-oil tree(Camellia oleifera)has the oil-yielded rate of about 55% from its kernel.The recent researches suggested that tea-oil would be one of the best vegetable oils... As a high-grade edible oil tree native in China,tea-oil tree(Camellia oleifera)has the oil-yielded rate of about 55% from its kernel.The recent researches suggested that tea-oil would be one of the best vegetable oils,and even be better than olive oil with its abundant unsaturated fatty acids including 82.6% oleic acid.Stearoyl-ACP desaturase(SAD)is a key enzyme that catalyzes saturated fatty acids(C18∶0)bonded to ACP(Acyl carrier protein)and dehydrogenates the fatty acids into oleic acids,and hence controls the content of oleic acid and the proportion between saturated fatty acids and unsaturated fatty acids.With our previous acquisition of three cDNAs and ESTs of C.oleifera SAD(CoSAD)gene,5’RACE technology was used to obtain the full-length cDNA of CoSAD gene from the nearly matured C.oleifera seed.The comprehensive bioinformatic analyses including sequence characteristics of DNA and amino acid,multi-sequence aligning,identity and homology,molecular clustering,protein physicochemical properties,and protein structural prediction and characteristics were performed.The results may provide the theoretical and material elements for application of CoSAD gene and genetic improvement on other oil plants. 展开更多
关键词 油茶 硬脂酰-ACP脱饱和酶(SAD) 油酸 全长CDNA 生物信息学
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千年桐SAD基因克隆与分析及其丝状真菌表达载体构建 被引量:9
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作者 范妙华 李纪元 +2 位作者 范正琪 田敏 倪穗 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期18-22,共5页
以发育中的千年桐种子总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增得到硬脂酰脱饱和酶基因SAD的cDNA序列。该序列长度为1 191 bp,编码396个氨基酸。推测的分子量为45 541.01 u,等电点pI为6.05。BLAST分析表明,该cDNA序列与其它已登录的SAD基因cDNA... 以发育中的千年桐种子总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增得到硬脂酰脱饱和酶基因SAD的cDNA序列。该序列长度为1 191 bp,编码396个氨基酸。推测的分子量为45 541.01 u,等电点pI为6.05。BLAST分析表明,该cDNA序列与其它已登录的SAD基因cDNA序列一致性最高可达93.1%;编码的氨基酸蛋白序列性一致最高为89%。同时,构建了由构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的gpdA启动子驱动的丝状真菌表达载体,通过冻融法转入农杆菌中,PCR鉴定表明,pBAR-SAD已转入农杆菌EHA105中,成功构建了农杆菌工程菌株。 展开更多
关键词 千年桐 硬脂酰脱饱和酶 丝状真菌 表达载体
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陆地棉GhSAD2基因克隆与表达特征研究 被引量:9
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作者 蔡曼 李卫华 +4 位作者 王娟 王旭文 孔宪辉 余渝 刘丽 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1713-1720,共8页
Δ9硬脂酰ACP脱氢酶基因(GhSAD2)是脂肪酸合成代谢过程中关键的去饱和酶基因,为明确该基因在棉花脂肪酸合成代谢中的功能,该研究克隆了陆地棉GhSAD2基因,并对该基因的序列特征、进化关系及表达特性进行分析。序列分析显示,GhSAD2基因(Ge... Δ9硬脂酰ACP脱氢酶基因(GhSAD2)是脂肪酸合成代谢过程中关键的去饱和酶基因,为明确该基因在棉花脂肪酸合成代谢中的功能,该研究克隆了陆地棉GhSAD2基因,并对该基因的序列特征、进化关系及表达特性进行分析。序列分析显示,GhSAD2基因(GenBank登录号为KX197920)cDNA全长1 188bp,编码396个氨基酸,具有脂肪酸去饱和酶家族2个高度保守的组氨酸簇EENRHG和DEKRH,分别位于氨基酸的185和271位。系统进化分析显示,GhSAD2基因与可可树的同源基因进化关系非常接近。qPCR分析显示,GhSAD2基因在叶中的表达量高于茎和根,且在花后25d的种子中表达量达到最高值。低温胁迫诱导结果表明,GhSAD2基因在不同程度低温处理下均有上调表达,6h表达量最大,之后逐渐下调。研究表明,GhSAD2基因可能对棉子油不饱和脂肪酸的合成具有重要作用,同时在棉花抗寒方面也起一定的生理作用。 展开更多
关键词 Δ9硬脂酰ACP脱氢酶基因(GhSAD2) 陆地棉 基因克隆 序列分析 低温胁迫
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花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量:8
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作者 石磊 苗利娟 +7 位作者 齐飞艳 张忠信 高伟 孙子淇 黄冰艳 董文召 汤丰收 张新友 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1629-1637,共9页
Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD)是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(Ah SAD)起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5'RAC... Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD)是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(Ah SAD)起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5'RACE方法获得了该基因的5'UTR序列,通过序列比对确定720 bp片段为Ah SAD启动子区域。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多个与光诱导和激素响应相关顺式序列元件。将Ah SAD启动子片段替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游GUS基因表达,构建植物表达载体pBI-PAh SAD。通过农杆菌介导法转化拟南芥和在花生不同组织中瞬时表达,利用GUS组织化学染色研究其表达特性。表明在拟南芥和花生受体中,AhSAD启动子主要调控下游基因在根、茎、叶片和子叶中表达,在花生的果针中也检测到GUS活性;拟南芥的茎生叶只有叶脉中具有GUS活性,而花生整个叶片中都具有GUS活性。 展开更多
关键词 花生 Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(SAD) 启动子 基因组步移 GUS报告基因
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乌桕SsSAD基因的原核表达与纯化研究 被引量:4
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作者 周波 彭丹 +2 位作者 张琳 谭晓风 刘选明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期444-448,共5页
乌桕是一种重要的木本油料树种。SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)是油料植物中将饱和脂肪酸转变成不饱和脂肪酸的一种关键脱氢酶。为了进一步揭示乌桕SsSAD的功能,该研究在大肠杆菌中表达了该蛋白。结果表明:(1)通过RT-PCR的方法从... 乌桕是一种重要的木本油料树种。SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)是油料植物中将饱和脂肪酸转变成不饱和脂肪酸的一种关键脱氢酶。为了进一步揭示乌桕SsSAD的功能,该研究在大肠杆菌中表达了该蛋白。结果表明:(1)通过RT-PCR的方法从乌桕种子中克隆出了SsSAD基因编码区全长序列,并将其克隆到低温诱导的原核表达载体pCold TF上,构建原核重组表达载体pCold TF/SsSAD,转化大肠杆菌BL 21star(DE3)并获得原核表达工程菌株。(2)通过IPTG法低温诱导表达融合蛋白。该重组质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,融合蛋白分子质量约为101kD,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化和Western blotting检测证实获得了重组蛋白,上述结果为进一步研究乌桕SsSAD的结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 SsSAD基因 pCold TF 原核表达 融合蛋白 纯化
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抗寒蛋白硬脂酰-ACP脱饱和酶的结构与功能预测 被引量:9
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作者 罗秀芹 欧文军 +1 位作者 李开绵 陈松笔 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第5期484-489,共6页
采用生物信息学方法对已在GenBank上注册的木薯、木油桐、蓖麻、麻风树、油桐和天山雪莲的△9硬脂酰-ACP脱饱和酶(Stearoyl-ACP desaturase,SAD)核酸序列以及推导的氨基酸序列、组成成分、导肽、跨膜拓扑结构、疏水性、亲水性、蛋白质... 采用生物信息学方法对已在GenBank上注册的木薯、木油桐、蓖麻、麻风树、油桐和天山雪莲的△9硬脂酰-ACP脱饱和酶(Stearoyl-ACP desaturase,SAD)核酸序列以及推导的氨基酸序列、组成成分、导肽、跨膜拓扑结构、疏水性、亲水性、蛋白质二级结构与功能域及三维结构进行分析预测和推断.结果表明:木薯、木油桐、蓖麻、麻风树、油桐和天山雪莲的SAD核酸序列以及推导的氨基酸序列、组成成分均比较一致;木薯SAD存在叶绿体转运肽,天山雪莲SAD存在线粒体目标肽,均无跨膜结构;α-螺旋和无规卷曲是该蛋白质二级结构的主要结构元件,β-转角和延伸链散布于整个蛋白质中,只有一个功能结构域位于第66-394氨基酸位点. 展开更多
关键词 木薯 抗寒 硬脂酰-ACP脱饱和酶 结构与功能
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绿色巴夫藻脂肪酸去饱和酶的克隆和初步研究(英文) 被引量:1
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作者 元冬娟 周克元 +1 位作者 康景轩 江黎明 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期732-739,共8页
在高等植物中,Δ9脂肪酸去饱和酶引入第一个双键到饱和的脂肪酸链中,导致单不饱和脂肪酸的形成。我们通过RT-PCR、RNA ligase mediated RACE(RLM-RACE)and Overlap-PCR方法从海洋微藻绿色巴夫藻中克隆到一个命名为PvfadA的脂肪酸去饱和... 在高等植物中,Δ9脂肪酸去饱和酶引入第一个双键到饱和的脂肪酸链中,导致单不饱和脂肪酸的形成。我们通过RT-PCR、RNA ligase mediated RACE(RLM-RACE)and Overlap-PCR方法从海洋微藻绿色巴夫藻中克隆到一个命名为PvfadA的脂肪酸去饱和酶候选基因。通过将PvfadA基因在大肠杆菌表达系统中成功表达,PvFadA可以特异性地将C18∶0脂肪酸转变成C18∶1脂肪酸。PvFadA的氨基酸序列中存在一个存在于acyl-ACP去饱和酶的特异性金属离子结合区段(D/E)X2HX~100(D/E)X2H。通过同源模建PvFadA的3D结构显示,其包含了11个α螺旋,其中α3、α4、α6和α7组成了一个4个螺旋桶的核心结构,预测其可能是酶的活性中心。PvFadA的3D结构类似于蓖麻和结核分枝杆菌H37Rv的acyl-ACP去饱和酶。 展开更多
关键词 硬脂酰-ACP Δ9去饱和酶 RLM-RACE PCR 绿色巴夫藻 GC-MS
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花生中两个硬脂酰-ACP去饱和酶基因的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 焦坤 迟晓元 +7 位作者 潘丽娟 陈娜 陈明娜 王通 王冕 杨珍 和亚男 禹山林 《花生学报》 2013年第3期1-7,共7页
脂肪酸去饱和酶是不饱和脂肪酸合成途径的关键酶,催化脂肪酸链特定位置上脱氢形成双键。本研究通过构建花生种子全长cDNA文库,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了两个FAB2基因,分别命名为AhFAB2-2和AhFAB2-3。其中Ah... 脂肪酸去饱和酶是不饱和脂肪酸合成途径的关键酶,催化脂肪酸链特定位置上脱氢形成双键。本研究通过构建花生种子全长cDNA文库,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了两个FAB2基因,分别命名为AhFAB2-2和AhFAB2-3。其中AhFAB2-2全长为1387bp,ORF为1158bp,理论分子量为43.7kD,理论等电点为5.69;AhFAB2-3全长为1452bp,ORF为1188bp,理论分子量为44.9kD,理论等电点为6.37。它们推导的氨基酸序列与拟南芥的相似性依次为60.8%和57.2%;与大豆的相似性分别是62.3%和59.3%。这两个基因在GenBank上的登录号分别为KF358459和KF358460。 展开更多
关键词 硬脂酰-ACP去饱和酶基因 花生 基因克隆 序列分析
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美国白蜡抗寒基因FaSAD的克隆及进化分析 被引量:3
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作者 陈罡 叶景丰 +3 位作者 马冬菁 魏忠平 刘红民 白丽萍 《辽宁林业科技》 2015年第6期1-5,21,共6页
利用RT-PCR和RACE技术从美国白蜡总RNA中分离出硬脂酰-ACP脱饱和酶(SAD)基因的全长c DNA。该序列所推导的氨基酸序列与已知SAD蛋白序列具有高度的相似性,同时又存在单个氨基酸残基或基序的替换、插入和缺失。半定量PT-PCR表明,SAD基因... 利用RT-PCR和RACE技术从美国白蜡总RNA中分离出硬脂酰-ACP脱饱和酶(SAD)基因的全长c DNA。该序列所推导的氨基酸序列与已知SAD蛋白序列具有高度的相似性,同时又存在单个氨基酸残基或基序的替换、插入和缺失。半定量PT-PCR表明,SAD基因在白蜡茎中表达量最高,在叶片中最低;Fa SAD蛋白质三级结构预测表明,其是个结构紧密的球形蛋白;进化分析表明,来自同一家族的基因基本上聚到了1个群,但是来自木本植物的所有基因被分成2个大群,没有都被聚到1个独立的群中,Fa SAD基因与猫爪藤的SAD基因相似性最高。 展开更多
关键词 美国白蜡 4L温 硬脂酰-ACP去饱和酶(SAD) 进化分析
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花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(SAD)的序列分析 被引量:8
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作者 东金玉 万勇善 刘风珍 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1167-1177,共11页
利用同源克隆技术获得花生区组二倍体野生种A.duranensis和A.ipaensis的Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因SAD(命名为gSAD-A和gSAD-B)及3个栽培品种的SAD,每个栽培品种有2个SAD(命名为gSAD-1和gSAD-2)。同时获得丰花2号SAD的两条全长cDNA(命名为... 利用同源克隆技术获得花生区组二倍体野生种A.duranensis和A.ipaensis的Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因SAD(命名为gSAD-A和gSAD-B)及3个栽培品种的SAD,每个栽培品种有2个SAD(命名为gSAD-1和gSAD-2)。同时获得丰花2号SAD的两条全长cDNA(命名为FhrSAD-1和FhrSAD-2)。丰花2号的FhgSAD-1和FhgSAD-2均含有2个内含子,二者同源性97.5%,共有69个变异位点,其中62个是SNP位点、6个特异性酶切位点。FhrSAD-1和FhrSAD-2间核苷酸序列同源性98.6%,其中编码区序列同源性98.9%,共有12个变异位点,编码的Ah-SAD2氨基酸序列与Ah-SAD1相比在N端的17PSSSSSSSSSSFSL30丝氨酸聚集区少一个丝氨酸。gSAD-1和gSAD-A同源性为99.9%,存在4个SNP位点;gSAD-2和gSAD-B同源性为100%。推测gSAD-1和gSAD-2分别来自花生栽培品种的A、B2个染色体组。研究明确了花生不同染色体组SAD的序列特征,为进一步探讨SAD的表达及其在控制花生籽仁脂肪酸组分中的作用提供了重要的参考。 展开更多
关键词 花生 硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD) 序列分析
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牡丹PoSAD基因克隆与表达分析 被引量:4
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作者 廖冰楠 陆俊杏 +3 位作者 黄兴琳 管丽 白辉扬 张涛 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期35-40,共6页
以凤丹牡丹(Paeonia ostii)叶片为试验材料,采用RACE和RT-PCR方法,克隆得到凤丹牡丹硬脂酰-ACP去饱和酶基因SAD的cDNA全长,命名为PoSAD(GenBank登录号为KY038819)。序列分析表明,该基因cDNA序列全长1 559bp,其中开放阅读框1 197bp,编码... 以凤丹牡丹(Paeonia ostii)叶片为试验材料,采用RACE和RT-PCR方法,克隆得到凤丹牡丹硬脂酰-ACP去饱和酶基因SAD的cDNA全长,命名为PoSAD(GenBank登录号为KY038819)。序列分析表明,该基因cDNA序列全长1 559bp,其中开放阅读框1 197bp,编码398个氨基酸,3′端非编码区长172bp,5′端非编码区长123bp。多序列比对结果表明,凤丹牡丹PoSAD氨基酸序列含有2个保守结构域。系统发育分析结果显示,凤丹牡丹与蓖麻处于同一分支,其亲缘关系最近。TMHMM和TargetP亚细胞定位分析得知,PoSAD蛋白无跨膜区域,可能定位于叶绿体中发挥功能。组织特异性结果分析表明,PoSAD基因在凤丹牡丹的根、茎、叶、花瓣、雌蕊、雄蕊、种子中均有表达,且在花瓣中表达量最高,雌蕊中次之,在根中的表达量最低;不同时期种子中,60d表达量最高,80d次之,10d中表达量最低。 展开更多
关键词 凤丹牡丹 硬脂酰-ACP脱氢酶基因 表达分析 RACE RT-PCR
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油用牡丹△~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD)生物信息学分析
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作者 侯晓宇 尚宏芹 +2 位作者 刘梦迪 郭梦露 高昌勇 《黑龙江农业科学》 2018年第7期23-29,共7页
Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(stearoyl-ACP desaturase,SAD)是控制植物油脂中饱和与不饱和脂肪酸比例的关键酶之一。利用生物信息学在线工具,对油用牡丹—凤丹(Paeonia ostii)Po-SAD的氨基酸序列特征、理化性质、二硫键、磷酸化位点、高级结... Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶(stearoyl-ACP desaturase,SAD)是控制植物油脂中饱和与不饱和脂肪酸比例的关键酶之一。利用生物信息学在线工具,对油用牡丹—凤丹(Paeonia ostii)Po-SAD的氨基酸序列特征、理化性质、二硫键、磷酸化位点、高级结构进行预测,并利用MEGA6.0构建了不同植物SAD分子进化树。结果表明:Po-SAD蛋白在相对分子量、理论pI与芍药、拟南芥的SAD相近,属于稳定的、可溶性蛋白。二级结构包括α螺旋(40.91%)、延伸串(12.37%)和不规则卷曲(46.72%),Po-SAD含有35个磷酸化位点和6个糖基化位点,亚细胞定位在质体中。进化树分析表明,凤丹Po-SAD与芍药的高度同源且亲缘关系最近。 展开更多
关键词 油用牡丹 凤丹 △9-硬脂酰-ACP脱氢酶(SAD) 生物信息学分析
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高等植物硬脂酰-ACP脱饱和酶基因表达模式及在响应温度胁迫中的作用 被引量:1
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作者 赵丰兰 张晗 +1 位作者 段永波 薛建平 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期7350-7361,共12页
细胞膜为植物细胞响应温度胁迫的原初位点,其通过调节脂肪酸饱和程度适应温度变化。而硬脂酰-ACP脱饱和酶(SAD)是催化硬脂酸引进第一个不饱和键的关键酶,在调控膜饱和与不饱和脂肪酸比例中承担着重要功能。通过NCBI数据库获得42种高等植... 细胞膜为植物细胞响应温度胁迫的原初位点,其通过调节脂肪酸饱和程度适应温度变化。而硬脂酰-ACP脱饱和酶(SAD)是催化硬脂酸引进第一个不饱和键的关键酶,在调控膜饱和与不饱和脂肪酸比例中承担着重要功能。通过NCBI数据库获得42种高等植物SAD基因信息,本研究对其中内含子和UTR分布以及表达模式进行总结,分析不同来源SAD基因的功能及亲缘关系。同时回顾了SAD基因在植物响应低温和高温方面的研究进展,并对其在调控植物对温度响应的深入研究及遗传改良进行了展望。 展开更多
关键词 高等植物 硬脂酰-ACP脱饱和酶 温度逆境 研究进展
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