伴GATA2基因突变的急性髓系白血病患者的临床特征及预后分析

目的:探讨伴有GATA2基因突变的急性髓系白血病(AML)患者的临床特征、共存突变基因及其对预后的影响。方法:回顾性分析2008年1月至2021年1月就诊于解放军总医院第一医学中心血液科的370例初诊AML患者的临床资料,应用二代基因测序技术检测其突变基因,分析AML中GATA2突变患者的临床特征、GATA2突变的共变基因及GATA2突变对预后的影响。结果:370例AML患者中,共23例(6.2%)患者检测到GATA2突变。与GATA2未突变组相比,GATA2突变组患者多属于正常核型(P=0.037)且多处于低危细胞遗传学分层(P=0.028),CEBPAdm、NRAS在GATA2突变组的发生率显著高于GATA2未突变组(P=0.010,P=0.009),两组在性别、年龄、白细胞数、血小板数、血红蛋白、原始细胞数、诱导方案、CR率方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。23例伴有GATA2突变的患者中主要共存基因突变依次为CEBPAdm、NRAS(均为39.1%),NPM1、FLT3、TET2、WT1(均为17.4%),ASXL1、IDH1(均为13.0%)。生存分析结果显示,在整个队列中,伴GATA2突变组患者与不伴GATA2突变组患者5年总生存(OS)及无白血病生存(LFS)率无统计学差异(P=0.306,P=0.308);在306例不伴CEBPAdm的患者中,GATA2突变组患者较GATA2未突变组患者5年OS率及LFS率均有提高趋势,但差异未达统计学意义(P2=0.092,P=0.056);而在64例伴CEBPAdm的患者中,GATA2突变组患者与GATA未突变组患者5年OS率无统计学差异(P=0.104),但GATA2突变组患者5年LFS率显著降低(P=0.047)。23例GATA2突变患者中,16例接受“3+7”诱导方案,其中12例接受异基因造血干细胞移植;7例接受“PDCAG”诱导方案,其中3例接受移植。“3+7”方案组与“DCAG”方案组相比,CR率无统计学差异(=1.000)。移植组较化疗组5年OS率及LFS率显著提高(P=0.021,P=0.020)。结论:GATA2突变显著多见于核型正常及低危细胞遗传学分层的m AML患者,与CEBPAdm、NRAS共突变显著相关。GATA2对预后的意义受CEBPAd共突变影响。GATA2突变患者诱导方案选择“3+7”方案或“DCAG”方案不影响其CR率,而选择异基因造血干细胞移植相较于化疗能显著改善预后。

慢性髓系白血病干细胞核心基因及关键通路的生物信息学分析和初步临床验证

目的:明确慢性髓系白血病干细胞(CML-LSC)中关键基因模块和信号通路。方法:筛选基因表达综合数据库(GEO)中包含CML-LSC和正常造血干细胞(HSC)对照组的数据集,获得GSE5550、GSE43754、GSE479273个基因芯片数据集。以|log_(2)差异倍数(FC)|>1以及P<0.05为标准筛选数据库中的差异表达基因(DEGs)。对DEGs进行通路和基因功能富集,并构建蛋白质相互作用网络(PPI),分析关键基因簇及核心基因,并对核心基因进行受试者工作特征(ROC)曲线绘制,筛选出潜在基因靶点,进行基因集富集(GSEA)分析。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫荧光染色检测其在CML慢性期和急变期临床样本中的表达差异。结果:共获得52个DEGs,其中,表达升高14个,表达下调38个。这些DEGs与细胞-细胞接触区、对金属离子的反应、钙依赖的细胞-细胞通过质膜细胞黏附分子、质膜脂筏、多肽结合、Toll样受体结合、生长因子结合等细胞生物学过程相关。京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析富集于肿瘤的转录失调信号这一重要通路,构建PPI网络,筛选出3个功能模块,并获得13个与DNA复制检查点等有关的核心基因。通过对核心基因ROC曲线绘制,选出7个在CML-LSC中有显著差异且对该疾病模型具有较好诊断价值的核心关键基因。对FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)进行GSEA分析和重要通路的可视化(如剪接体,错配修复,碱基切除修复,DNA复制、神经活性配体受体相互作用通路)。而RT-qPCR和免疫荧光染色结果均显示FLT3在CML急变期LSC中mRNA和蛋白表达水平低于慢性期(P<0.0001)。结论:通过筛选CML-LSC中的核心基因及关键信号通路,发现转录失调信号通路对CML急变起着关键作用,而FLT3基因失调可能是导致CML疾病进展的关键基因,这为CML急变的监测和防治提供了新的潜在分子靶点。

含人干细胞白血病基因慢病毒载体转染Cajal样间质细胞的效果研究

目的：观察携带增强绿色荧光蛋白（GFP）的含人干细胞白血病（SCL）基因慢病毒载体转染体外培养的豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞（ICC）的效果。方法2014年10月—2015年8月，选取普通级成年健康豚鼠16只。构建含人 SCL 基因的慢病毒载体，并标定病毒滴度；采用随机数字表法选取健康豚鼠4只，采用颈椎脱臼方法将其杀死，体外培养豚鼠膀胱 ICC。设置不同感染复数（MOI）（0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0），利用含人 SCL 基因的慢病毒载体转染 ICC，在激光共聚焦显微镜下观察 ICC 生长状态并计算转染效率，确定最佳 MOI。采用随机数字表法将 ICC 分为正常对照组、空白质粒对照组与慢病毒转染组，其中正常对照组加入1％磷酸盐缓冲液（PBS），空白质粒对照组加入空慢病毒，慢病毒转染组按最佳 MOI 加入含人 SCL 基因的慢病毒载体，计算各组转染效率，确定最佳转染时间。采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测 SCL mRNA 表达情况。上述实验均独立重复4次。结果经测定，病毒滴度为5＆#215;108 TU/ ml。倒置显微镜下发现一些特征性梭形细胞，其两侧有显著外凸分枝，细胞核较大，其外形规则，有序地实现细胞贴壁，而其他未贴壁细胞则呈现与 ICC 不一样的形态，胞体多为椭圆形，细胞两极无突起，整体形状扁平。激光共聚焦显微镜下可以发现酪氨酸蛋白激酶生长因子受体（c-kit）受体成功表达，证实培养的细胞是膀胱 ICC。观察各组 ICC 生长状态，当 MOI 为0.5、1.0、5.0、10.0时，细胞生长状态较好，无细胞死亡，当 MOI为50.0、100.0时，可见部分细胞死亡，细胞活性降低；MOI 为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI为0.5时（P ＜0.05）；MOI 为5.0、10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为1.0时（P ＜0.05）；MOI 为10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为5.0时（P ＜0.05）；MOI 为50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为10.0时（P＜0.05）；综合 ICC 生长状态及转染效率，确定含人 SCL 基因慢病毒载体转染 ICC 的最佳 MOI 为10.0。正常对照组、空白质粒对照组 ICC 中无 GFP 表达；慢病毒转染组转染3 d 时 ICC 中 GFP 表达强度高于转染2 d、转染5 d 时，确定含人 SCL 基因慢病毒载体转染 ICC 的最佳转染时间为3 d。慢病毒转染组中扩增产物大小与目的片段大小1036 bp 一致，而正常对照组及空白质粒对照组均未见特异性条带表达，表明 SCL 基因成功导入 ICC。结论利用含人 SCL 基因慢病毒载体能高效转染体外培养的 ICC，并成功介导 SCL 基因在 ICC 中的表达，为下一步研究利用 SCL 基因进行体内转染实验奠定基础。

观察在体灌注SCL基因重组慢病毒对豚鼠糖尿病膀胱中ICC功能的影响

目的探究豚鼠糖尿病膀胱病(DCP)在经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒后所引发的Cajal样间质细胞(ICC)电位活动的改变。方法购买健康雄性豚鼠90只,按照200 mg/kg单次腹腔注射1%的链脲佐菌素(STZ),正常喂养12周后,筛选出符合DCP模型标准的的豚鼠并将其随机分为3组:实验组、阳性对照组、空白对照组。实验组经尿道灌注0.2 m L滴度为2×107IU的SCL基因重组慢病毒,阳性对照组经尿道灌注0.2 mL空慢病毒,空白对照组经尿道灌注0.2 mL PBS液。每组在转染后2、7、14、28 d这4个时间节点每次处死3只豚鼠,迅速摘取膀胱,选择胶原酶V消融法分离提取初代ICC并继续培养。72 h后运用膜片钳技术检测ICC自发及ATP诱发电位活动。结果体外通过胶原酶消融法可分离培养DCP豚鼠膀胱中ICC,运用细胞膜片钳技术观察到在无刺激条件下检测不到ICC的内向电流,而在ATP(100μmol/L)条件激发下可检测到ICC的内向电流。实验组2 d时与其他两组内向电流无明显变化,实验组SCL慢病毒转染DCP膀胱7、14、28 d时可检测到ICC内向电流比其他两组高(P<0.05),14 d达到峰值350.0±29.9pA,随后降低。阳性对照组与空白对照组随着DCP膀胱持续受损,内向电流逐步降低(P<0.05)。结论 SCL基因重组慢病毒经尿道灌注可成功转染豚鼠DCP膀胱,使受损的膀胱ICC电流幅度逐步增高,说明SCL基因对DCP膀胱中受损ICC功能有部分改善作用。

AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达

目的构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达。方法采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度。通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达。结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达。结论成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达。

人干细胞白血病基因重组慢病毒载体的构建及其在Cajal样间质细胞中的表达

目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒载体,并转染体外培养的Cajal样间质细胞(ICC),为进一步利用慢病毒表达载体行体内实验奠定基础。方法通过聚合酶链反应(PCR)将人SCL基质粒内的遗传物质扩增,与慢病毒载体质粒GV287-EGFP结合,构建重组质粒GV287-EGFP/SCL,通过Western blot检测及基因测序对阳性克隆进行鉴定,并测定病毒滴度。体外分离、培养及鉴定ICC,重组慢病毒载体以感染复数(MOI)值为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100.0时,分别转染ICC,通过激光共聚焦显微镜观察,计算不同MOI值的转染效果,确定最佳MOI值。重组慢病毒载体以最佳MOI值感染ICC作为实验组,以空载体转染的ICC(空载体组)及未转染的ICC(空白组)作为对照,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SCL基因在ICC中的表达。结果经Western blot检测及基因测序鉴定SCL重组慢病毒表达载体构建成功,并成功转染ICC,激光共聚焦显微镜下可观察到强绿色荧光。MOI为10时转染效果最佳,转染效率>85%;RT-PCR结果表明,实验组SCL基因的表达量高于空载体组和空白组。结论成功制备人SCL基因重组慢病毒载体,并能高效转染ICC,介导SCL基因在ICC中表达。

含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒表达载体(GV287-SCL),为糖尿病膀胱异常病症(DCP)的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增,与慢性病毒穿透质粒结合,构建重组穿梭质粒GV287-EGFP/SCL,共转染293T细胞,通过多次感染、扩增和提纯,得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293T细胞,采用Western blotting法检测目的基因,荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1 036 bp,与目的基因相关片段中SCL c DNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带,其大小与目的片段人SCL c DNA相当。重组质粒GV287-EGFP/SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP,基因排序和Gen Bank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108TU/m L。结论成功构建了GV287-SCL,病毒滴度为5×108TU/m L。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。

经尿道灌注SCL基因重组慢病毒的DCP豚鼠膀胱Cajal样间质细胞数量、分布及超微结构观察

目的观察经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒的糖尿病膀胱病(DCP)豚鼠膀胱Cajal样间质细胞(ICC)的数量、分布及超微结构变化。方法构建SCL基因重组慢病毒且标定滴度。选择雄性豚鼠70只,单次腹腔注射链尿佐菌素12周后构建DCP豚鼠模型,将成功造模的27只豚鼠随机分为实验组、阳性对照组、空白对照组,每组9只。实验组、阳性对照组、空白对照组豚鼠分别经尿道灌注(转染)SCL基因重组慢病毒、空慢病毒和等量PBS液。分别于转染后7、14、28 d每组各处死3只豚鼠,取膀胱组织,制作切片,激光共聚焦显微镜下观察GFP表达、膀胱ICC数量及分布变化,透射电镜下观察膀胱ICC的超微结构变化。结果实验组随转染时间延长,ICC数量逐渐增多(P均<0.01),分布越发密集,但绿色荧光逐渐减退;空白组和对照组未见绿色荧光,随转染时间延长,ICC数量逐渐减少(P均<0.05),分布稀疏;转染14、28 d时,实验组ICC数量较空白组和对照组增加(P均<0.01)。实验组随转染时间延长,ICC细胞器数量增多,形态趋于正常,细胞内空泡减少,胞周突起延长变多,ICC超微结构处于不断恢复之中;而阳性对照组和空白对照组ICC超微结构病理变化逐渐加重。结论经尿道灌注SCL基因重组慢病毒转染DCP豚鼠膀胱后,膀胱ICC数量增多,分布更加密集,细胞超微结构得到修复,提示SCL基因对DCP可能有一定治疗效果。

SCL基因反义寡核苷酸对K562和CEM细胞系的作用

干细胞白血病 (SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因。为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用 ,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS PS ODN)分别与K562和CEM白血病细胞系作用 ,观察细胞生长、分化、凋亡和SCLmRNA变化。结果显示 :(1 )AS PS ODN对K562和CEM细胞的生长有不同程度的抑制作用 ,并呈量效和时效关系 ;(2 )AS PS ODN作用后K562细胞联苯胺染色阳性率明显增加 ;(3)AS PS ODN作用后K562细胞发生凋亡现象 ,但未观察到CEM细胞凋亡 ;(4)AS PS ODN作用后K562细胞和CEM细胞SCLmRNA表达水平减低 ,同时CEM细胞SIL SCLmRNA表达水平也减低。结论 :AS PS ODN能特异性抑制K562和CEM细胞的增殖 ,减低SCLmRNA和SIL SCLmRNA表达水平 ,同时促进红系分化 。

骨髓间质干细胞与肿瘤细胞中FN1、NME2、TIMP3基因表达检测

目的探讨纤维连接蛋白1(FN1)、肿瘤转移抑制基因2(NME2)、组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因在胎儿骨髓间质干细胞(FMSCs)、成人骨髓间质干细胞(AMSCs)、F6、SGC及白血病细胞中的差异表达,寻找肿瘤和白血病的分子生物学特征。方法分别提取FMSCs、AMSCs、F6、SGC及白血病细胞的总RNA,逆转录cDNA,以cDNA为模板用PCR和实时PCR技术分别测定FN1、NME2、TIMP3基因表达水平。结果AMSCs组FN1、NME2、TIMP3基因表达水平均高于FMSCs、F6、SGC组(P<0.001);F6细胞以及白血病细胞中未能检出TIMP3基因的表达。结论FN1、NME2、TIMP3基因的下调以及TIMP3基因的缺如,可能是FMSCs突变为F6肿瘤细胞的分子特征之一;TIMP3基因的下调可能是肿瘤细胞的一种分子标志。

白血病病人异基因外周血干细胞移植后淋巴细胞TCRVβ基因片段的选择性扩增

目的 :了解白血病病人异基因外周血干细胞移植后淋巴细胞TCRVβ基因片段选择性扩增的情况。方法 :采用RT -PCR扩增 5例CML和 2例AML移植后患者外周血的单个核细胞的TCRVβ 2 4个基因片段 ,分析其TCRVβ基因的表达情况。 结果 :不同标本中仅检测到 2 - 8个VβT细胞基因片段 ,不同患者中缺乏的TCRVβ基因片段不尽相同。结论 :移植后病人外周血淋巴细胞TCRVβ基因片段部分受抑制 。

干细胞白血病基因在白血病中的表达

干细胞白血病(SCL)基因编码一种helix-loop-helix(HLH)家族的转录因子,它与许多组织的分化和发育有关。我们采用聚合酶链反应(PCR)技术,检测了116例各型白血病中SCL基因的表达情况,总表达率为71.55%。在ANLL、CML、c-ALL和CLL中的表达率分别为62.96%、88.24%、85.71%及100%。同时,分析了81例ANLL各亚型中SCL基因的表达情况,其中MO和MI型的表达率较高,为90.91%和81.25%。本结果提示SCL基因不仅表达于T-ALL中,也广泛表达于其它类型的淋巴细胞白血病和髓性白血病中。推测SCL在白血病细胞的增殖和发育中可能起一定的作用。

髓系白血病干细胞培养及其特征鉴定

目的对急性髓系白血病(AML)骨髓单个核细胞进行体外培养,获得白血病干细胞并进行特征鉴定。方法体外培养AML患者的骨髓单个核细胞,观察其形态学特征、长期存活及增殖特性,用染色体分析和流式细胞分析技术研究其核型和细胞表面标志,用RT-PCR技术分析其nucleostemin、Bmi-1、ABCG2、prominin1、OCT4、Nanog等干细胞相关基因的表达。结果培养的白血病细胞呈集落样悬浮生长,在体外能存活12个月以上并保持增殖特性。染色体核型呈亚四倍体。表达上述干细胞相关基因。细胞表面表达CD38、CD29、CD44和HLA-DR,弱表达CD19和CD71,不表达CD34、CD13、CD2和CD105。结论经培养获得的白血病细胞,具备肿瘤干细胞的一些特征,提示为白血病干细胞。

异基因造血干细胞移植治疗bcr/abl融合基因阳性急性白血病的临床疗效观察

目的:观察异基因造血干细胞移植治疗bcr/abl融合基因阳性急性白血病的临床疗效。方法:对MICM分型确诊的18例bcr/abl融合基因阳性急性白血病患者,采用化疗或加用酪氨酸激酶抑制剂达完全缓解后行异基因造血干细胞移植术。结果:18例行异基因造血干细胞移植术后,均获得造血及免疫功能重建。9例无病存活;1例复发,经治疗后再次达完全缓解;8例死亡,其中因复发死亡3例,移植相关死亡5例。2a无病生存率为(31.6±14.0)%,2a总生存率为(48.0±13.9)%;中位无病生存时间(9.0±3.1)个月,中位总生存时间(18.0±8.0)个月。结论:异基因造血干细胞移植是目前治愈bcr/abl融合基因阳性急性白血病的惟一有效手段,联合酪氨酸激酶抑制剂能有效提高长期生存率。

急性髓系白血病干细胞RIZ1基因启动子甲基化状态研究

目的探讨急性髓系白血病（AML）[除外急性早幼粒细胞性白血病（APL）即非APL]白血病干细胞RIZ1基因启动子甲基化状态与发病的相关性。方法应用流式分选仪提取20例初诊为急性髓系白血病患者CD34^＋CD38^-CD123^＋的干细胞，通过甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测6例健康者和20例AML（非APL）患者骨髓CD34^＋CD38^-CD123^＋细胞RIZ1基因启动子区域甲基化状态，用实时定量PCR（RT—PCR）检测RIZ1基因的表达情况。结果RIZ1基因在健康者骨髓细胞中呈非甲基化状态，而在40％AML（非APL）患者骨髓CD34^＋CD38^-CD123^＋细胞启动子区域存在甲基化，与健康者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。AML患者RIZ1基因mRNA相对表达水平明显低于健康者。结论在大部分AML（非APL）患者白血病干细胞中，RIZ1基因启动子区域发生甲基化，其mRNA表达水平也明显降低。RIZ1基因启动子区域甲基化可能与AML（非APL）的发病相关，其甲基化检测对AML（非APL）的早期诊断具有重要的临床意义。

可移植性人髓系白血病BALB/c小鼠模型建立(英文)

造血干/祖细胞移植已成为迄今为止治疗恶性血液病等最有效措施,而建立骨髓型可移植性白血病小鼠模型将为造血干细胞移植治疗白血病提供实验用动物模型。本实验用K562细胞接种BALB/c裸鼠产生红白血病的小鼠模型。将4-5周龄雌性BALB/c裸鼠,腹腔连续两天注射环磷酰胺(CTX)2mg,第3天腹腔或尾静脉直接接种K562白血病细胞2×105-2×106/只。定时取小鼠尾静脉外周血、骨髓细胞用流式细胞术和RT-PCR分别检测CD45,CD13,CD33抗原及bcr/abl融合基因。结果显示,4-5周龄BALB/c裸鼠无论通过腹部或尾静脉接种,无论有无CTX预处理,当接种K562细胞数大于2×105/只时,均可在BALB/c裸鼠身上产生可移植性人髓系白血病,荷瘤小鼠可存活30-60天。结论:腹腔或尾静脉接种大于2×105细胞/只均可产生人髓系白血病荷瘤小鼠模型,有无CTX2毫克/只的预处理不影响4-5周龄BALB/c裸鼠产生人白血病模型。

白血病异基因造血干细胞移植后TCR Vβ亚家族基因谱的研究

目的 了解白血病病人异基因外周血干细胞移植后1年以上患者TCR VβT细胞免疫功能重建的情况。方法 采用 RT-PCR扩增5例CML和1例AML-M3a移植后（12-56个月）患者外周血的单个核细胞的 TCR Vβ 24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的表达。结果 经24个 Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现6例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5-22个亚家族基因。结论 移植后1年以上患者尽管CD3+T细胞已恢复,但外周血TCR Vβ亚家族基因谱的表达仍不完全,T细胞免疫功能仍未完全重建。

12例Ph染色体和BCR-ABL阳性急性髓系白血病临床分析

本研究对2004年1月-2011年2月收治的12例Ph染色体阳性急性髓系白血病(Ph+AML)患者的白血病细胞的形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学特征及其与生存期的相关性进行分析。Ph+AML的诊断根据WHO标准,且有t(9;22)(q34;q11)或变异的t(9;22)异常,诊断时和诱导治疗后没有CML慢性期的证据。结果表明,12例患者经形态和免疫分型检查确诊8例为AML,4例为髓系及B淋巴细胞系混合细胞白血病。12例患者中除2例初诊时未做染色体检查外其余患者均可检测到Ph染色体,且部分患者伴有复杂染色体或与正常核型共存。在12例患者中均可检测到BCR-ABL阳性,其中b3a2 7例,b2a2 1例,b2a2变异体1例,ela2 2例,e18a2 1例。12例患者经治疗均获得缓解,其中3例患者接受化疗联合格列卫治疗后2例死亡;9例患者进行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT),1例患者复发后死亡,1例死于移植后并发症,中位生存期为24(8-80)个月,3年总生存率为(51.4±17.7)%。结论:Ph+AML是一种预后较差的AML,格列卫联合化疗可使患者达完全缓解,缓解后尽快进行HSCT能获得长期生存,改善患者预后。BCR-ABL基因及其变异体的检测为白血病的诊断和治疗提供了更多的机会,可作为初治白血病的常规筛查指标。

非血缘异基因外周血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病的临床研究

目的确保重庆市首例非血缘异基因外周血干细胞移植(URD-PBSCT)治疗慢性粒细胞白血病成功。方法对接受URD-PBSCT的慢性粒细胞白血病患者移植过程进行总结分析。结果患者造血重建迅速,中性粒细胞>0.5×109/L,血小板>20×109/L的时间分别为+13d、+16d,+17d患者的血型由O型转变为供者的B型,并经STR复检证实患者的性染色体由XY转为供者型的性染色体XX;移植过程中未见GVHD、VOD等严重并发症,骨髓细胞bcr/abl融合基因于+27d检查完全消失,+100d再次复查仍为阴性。结论重庆市首例URD-PBSCT治疗慢性粒细胞白血病患者获得圆满成功,URD-PBSCT可成为某些白血病得以根治的重要手段。

STL基因敲减抑制牙髓干细胞增殖

目的通过研究STL基因对牙髓干细胞(DPSCs)增殖的影响,为促进DPSCs在牙组织工程中的应用提供理论依据。方法利用慢病毒敲减DPSCs的STL基因,用CCK8法和CFSE法检测其细胞增殖能力,用碘化丙啶染色检测细胞周期的分布,用实时定量RT-PCR检测细胞周期依赖素激酶抑制剂(CDKIs)相关基因的表达。结果STL的敲减效率超过70%。敲减STL能明显抑制DPSCs的增殖,DPSCs的细胞周期阻滞于G0/G1期,CDKIs相关基因(p15^INK4B、p16^INK4A、p18^INK4C、p19^INK4D、p21^Cip1、p27^Kip1)的表达显著性上调。结论敲减STL能通过上调p15^INK4B、p16^INK4A、p18^INK4C、p19^INK4D、p21^Cip1、p27^Kip1的表达使细胞周期停滞于G0/G1期,抑制DPSCs的增殖。