基于谱-效关系筛选菊茎叶总黄酮抗氧化物质基础及其机制探讨

为探讨菊茎叶总黄酮(total flavonoids from stems and leaves of Chrysanthemum morifolium,TFCSL)抗氧化应激的活性成分,阐明其药效物质基础和作用机制。采用HPLC建立不同批次TFCSL指纹图谱;以高浓度葡萄糖诱导人脐静脉内皮细胞建立氧化损伤模型,将丙二醛含量、乳酸脱氢酶含量和超氧化物歧化酶活性作为药效指标;采用灰色关联度和偏最小二乘法分析其谱-效关系确定抗氧化药效物质基础;基于网络药理学结合分子对接探究核心靶点及作用通路。从12批次TFCSL指纹图谱中确定12个共有峰,指认其中9个化学成分;各批次总黄酮样品均可减少细胞凋亡、降低丙二醛及乳酸脱氢酶含量、提高超氧化物歧化酶活性;综合2种数学模型确定峰5(芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷)、峰6(异绿原酸C)、峰7(香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷)为抗氧化物质基础;筛选出的3个活性成分作用于抗氧化应激的33个靶点;关键靶点为TNF、CASP3、EDNRA、XDH、PTGS2、MMP2,主要涉及脂质和动脉粥样硬化信号通路、IL-17信号通路、糖尿病并发症AGE-RAGE信号通路、TNF通路、MPKA通路等信号通路;分子对接结果显示活性成分与关键靶点之间均有较好的结合力。表明TFCSL抗氧化应激的物质基础可能为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、异绿原酸C、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷,推测通过TNF、CASP3等靶点作用动脉粥样硬化信号通路、IL17信号通路发挥作用,体现菊茎叶多成分、多靶点抗氧化的作用特点。

菊茎叶总黄酮高效液相色谱指纹图谱与抗氧化活性的谱效关系研究

目的研究菊茎叶总黄酮指纹图谱与其抗氧化活性的相关性,探究菊茎叶总黄酮抗氧化活性的物质基础。方法采用高效液相色谱法建立11批菊茎叶总黄酮样品的指纹图谱;分别采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除法、2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基清除法及血浆铁离子还原法测定其抗氧化活性,结合灰色关联度法、偏最小二乘回归法分析谱效关系。结果建立17个共有峰的菊茎叶总黄酮的高效液相色谱指纹图谱,指认其中11个共有峰,相似度大于0.886。灰色关联分析显示其中11个色谱峰关联度均大于0.9,偏最小二乘回归分析结果显示6个色谱峰的变量重要性投影值>1,表明菊茎叶总黄酮与抗氧化活性有重要相关性。结论共有峰6(山柰酚-3-O-芸香糖苷)、峰11、峰12(香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷)、峰13(木犀草素)、峰15与抗氧化活性密切相关,初步推测为菊茎叶总黄酮抗氧化活性的物质基础。

菊茎叶精油微乳凝胶剂制备工艺优化及其有效成分测定、抑菌作用评价

目的优化菊茎叶精油微乳凝胶剂制备工艺,并测定其有效成分含量,评价其抑菌作用。方法以伪三相图面积、粒径、Zeta电位为评价指标,单因素试验优化微乳制备工艺。以外观性状、涂展性、耐热、耐寒、离心稳定性的综合评分为评价指标,单因素试验优化微乳凝胶剂制备工艺。UPLC、GC-FID法测定有效成分含量,考察抑菌作用。结果微乳最佳制备工艺为每100 g含菊茎叶精油0.396 g、薄荷精油7.15 mg、油酸乙酯4.37 g、吐温8021.82 g、丙三醇7.26 g、黄芩醇提物0.156 g、菊茎叶水提物0.234 g,水相加至100 g;微乳凝胶剂最佳制备工艺为每100 g含主药0.80%、卡波姆U203%、保湿剂15%、三乙醇胺2.4%。微乳及其凝胶剂中含量较高的成分为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷、黄芩苷、β-石竹烯、α-姜黄烯,对金黄色葡萄球菌的MIC分别为2、4 mg/mL,对痤疮丙酸杆菌的MIC分别为4、8 mg/mL。结论该方法简便、稳定、可行,可用于制备有效成分含量稳定、对致痘菌抑制效果明显的菊茎叶精油微乳凝胶剂,从而为其在化妆品中的进一步开发应用提供科学依据和技术支撑。

安徽药菊茎尖组织培养技术的研究

目的 :研究安徽药菊茎尖组织培养技术 ,建立最佳培养条件。方法 :取药菊的茎尖 0 .5mm左右 ,分别在不同的培养基中培养 ,诱导其为完整植株。结果与结论 :以MS +6 BA 2mg·L-1+NAA 0 .2mg·L-1为茎尖诱导培养基较好 ,4 0d后 ,芽诱导率达 80 %以上 ;以MS +6 BA 2mg·L-1+NAA 0 .5mg·L-1为芽增殖培养基 ,2 5～ 30d后 ,芽增殖系数达 4～ 7倍 ;生根培养基以MS +NAA 0 .5mg·L-1为宜 ,生根率 10 0 % ,根系粗壮 。

单位面积杆数对温室标准切花菊品质影响的预测模型

通过对切花菊不同品种、不同单株主杆数、不同定植密度和不同定植日期的试验,定量分析了单位面积杆数对标准切花菊叶面积指数动态变化规律和各外观品质指标的影响,在此基础上,构建了以冠层吸收的生理辐热积为指标的可定量预测单位面积不同杆数对温室标准切花菊品质影响的预测模型,并用与建模相独立的试验数据对模型进行了检验.结果表明:随单位面积杆数的增加,切花菊的叶面积指数增加,其植株的平均株高、茎粗、出叶数、花径均降低.所建模型对多杆栽培和不同密度单杆栽培的标准切花菊单杆地上部分鲜质量、株高、茎粗、出叶数、花径和单位面积出花枝数的预测值与实测值的决定系数(R2)分别为0.95、0.96、0.94、0.91、0.81和0.97,预测相对误差分别为16.1%、10.1%、12.8%、13.4%、15.9%和16.1%,模型模拟精度较高.该模型可为温室标准切花菊栽培密度和栽培杆数的优化以及品质的光温调控提供理论依据和决策支持.

菊花、茎、叶中总黄酮及绿原酸含量动态分析评价

目的为菊茎、叶的开发利用提供依据。方法采用紫外分光光度法测定不同品种菊花、茎、叶中总黄酮的含量;用HPLC法测定绿原酸的含量。比较总黄酮及绿原酸在菊花、茎、叶中的含量高低,结合药理实验结果判断菊茎、叶的利用价值。结果不同品种的菊叶在各个采收期总黄酮及绿原酸的含量均高于菊花,菊茎中含量最低。结论含量测定结果结合药理实验结果,表明菊茎、叶在抗菌、抗氧化、控制急性心肌缺血、保护心肌细胞损伤方面体现较强的活性具有化学物质基础,可进一步利用菊茎、叶,充分体现菊的经济价值。

基于光温的温室多杆切花菊干物质生产与分配的预测模型

根据菊花生长对光温的反应,设计不同品种、不同单株主杆数、不同定植密度和不同定植日期的试验,构建了以生理辐热积(Physiological product of thermal effectiveness and PAR,PTEP)为尺度的温室多杆切花菊的干物质生产与分配预测模型,并用与建模相独立的试验数据对模型进行了检验。结果表明:随单位面积杆数增加,切花菊的单位面积地上干物质产量增加,单枝切花鲜重减少。所建模型对温室多杆切花菊的单株叶干重、茎干重、花干重和地上部分鲜重的预测值与实际观测值基于1∶1线的决定系数(R2)分别为:0.96、0.95、0.82和0.97,回归估计标准误(RMSE)分别为:0.863、1.005、0.201和10.190g.株-1。模型模拟精度较高,可为温室切花菊栽培密度和保留杆数的优化调控提供理论依据。

地被菊‘紫妍’和‘纽9722’的再生体系建立

本研究以地被菊(Chrysanthemum morifolium)两个品种‘紫妍’和‘纽9722’带腋芽的无菌茎段为外植体,在基本培养基中添加不同浓度的6-BA和NAA诱导叶片分化、茎段增殖以及继代生根,进行两个品种的再生体系建立。结果表明,利用2%NaClO对‘紫妍’和‘纽9722’适宜消毒时间分别为6、8min;诱导‘紫妍’叶片不定芽再生的最适培养基是MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA 1.0mg·L-1,愈伤组织诱导率为100%,分化率为92.22%,出芽数为7.60;‘纽9722’叶片不定芽再生的最适培养基是MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1,愈伤组织诱导率为100%,但分化率仅为45.59%;‘纽9722’茎段增殖的最适培养基是MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1,增殖系数高达10.05;‘紫妍’生根的最适培养基是1/2 MS+NAA 0.2 mg·L-1,生根率为100%,生根系数为15.50;‘纽9722’生根的最适培养基为1/2 MS+NAA 0.3mg·L-1,生根率为100%,生根系数为14.87,移栽成活率均为100%。

祁菊秸秆化学成分的分离与鉴定

目的对河北安国产祁菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.Qiju）非药用部位-秸秆的化学成分进行了初步研究。方法将大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20、ODS等柱色谱与制备型高效液相色谱法相结合进行化合物的分离制备,并通过理化性质与核磁共振波谱数据鉴定化合物的结构。结果从祁菊秸秆体积分数为70%的乙醇溶液提取物中分离鉴定了11个单体化合物,分别为（7S,8R）-picraquassioside C（1）、（2R,3S）-2,3-dihydro-3-hydroxymethyl-7-methoxy-2-（4＇-hydroxy-3＇-methoxyphenyl）-5-benzo-furanpropanol 5c-O-β-D-glucopyranoside（2）、（＋）-松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷（3）、（＋）-epipinoresinol 4″-O-β-D-glucopyranoside（4）、邻羟基苯甲酸（5）、对羟基苯甲酸（6）、香草酸（7）、反式咖啡酸（8）、（E）-阿魏酸二十六烷基酯（9）、反式丁香苷（10）、protocatechualdehyde dimer（11）。结论分离鉴定了11个单体化合物。化合物1～4,9均为首次从菊属中分离得到,11为首次从该种植物中分离得到。

祁菊叶化学成分的分离与结构鉴定

[目的]为缓解生态压力,扩大药用菊花的临床适用范围,对祁菊非药用部位叶70%乙醇提取物的化学成分进行研究。[方法]利用多种色谱法,如正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20及高效液相色谱等进行分离纯化,并通过理化性质及波谱分析鉴定化合物结构。[结果]从祁菊叶70%乙醇提取物中分离鉴定了6个单体化合物,分别为茵芋苷(1),菊苣苷(2),苯甲基-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3),苄醇-O-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(4),icariside D1(5),松柏苷(6)。[结论]化合物4、5为首次从菊属植物中分离得到。

不同来源药用菊花营养器官形态研究

目的:比较同一生境下栽培的12个不同种源3种药用菊花的营养器官形态,为药用菊花的引种、种内分化、品种选育以及遗传多样性的研究提供依据。方法:实验田采用随机区组设计,进行营养器官形态观测、统计和分析。结果:叶型、叶形差异比较明显。黄山贡菊均为深刻长叶,亳菊、滁菊、杭白菊、杭黄菊为深刻正叶,菊花脑、野菊(东阳)为长叶,野菊(盱眙)为蓬叶;滁菊、亳菊无叶耳,其余均有叶耳;黄山贡菊(三溪村)、黄山贡菊(山斗村)、黄山贡菊(下坦村2)、亳菊和杭白菊幼叶全缘;其余幼叶均分裂。结论:该12个药用菊花营养器官形态有明显差异,据此建立药用菊花叶形态检索表。

露地菊‘纽9717’的茎叶离体快繁体系

以露地菊‘纽9717’(Chrysanthemum×grandiflora‘niu9717’)无菌苗为试验材料,进行茎段(含腋芽)离体快繁体系和离体叶片不定芽再生体系的研究。结果表明,最佳茎段增殖培养基为MS+6-BA 0.3g·L-1+KT0.5g·L-1+NAA 0.5g·L-1,平均增殖系数为3.2;最佳叶片离体再生培养基为MS+6-BA 2.0g·L-1+NAA 0.5g·L-1,6-BA与NAA组合更有利于愈伤组织分化,愈伤组织诱导率为100%,愈伤组织分化率为92.3%,繁殖系数为8.9,其中分裂素KT及TDZ不利于愈伤组织诱导及不定芽分化,生长素2,4-D能有效诱导愈伤组织,但抑制不定芽分化;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.05g·L-1,生根率达100%,平均生根数为12.08,平均根长1.5cm,移栽成活率为100%,高浓度生长素能诱导根形成但抑制根的伸长。

祁菊秸秆中奎宁酸酯类成分的分离与结构鉴定

[目的]对祁菊非药用部位秸秆70%乙醇提取物的化学成分进行研究,为提高现有药用植物资源的再生能力和内在质量奠定化学基础。[方法]利用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及高效液相色谱等方法进行分离纯化,并通过理化性质及波谱分析鉴定化合物结构。[结果]从祁菊非药用部位秸秆70%乙醇提取物中分离鉴定了8个奎宁酸酯类单体化合物,分别为3-O-咖啡酰基奎宁酸(1),绿原酸甲酯(2),4-O-咖啡酰基奎宁酸(3),1,5-二咖啡酰基奎宁酸(4),1,4-二咖啡酰基奎宁酸(5),3,5-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(6),3,4-二咖啡酰基奎宁酸(7),3,4-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(8)。[结论]化合物2为首次从该种植物中分离得到,3、5、6、8为首次从秸秆中分离得到。

大孔树脂对地锦草、金银花叶与杭白菊总黄酮吸附分离性能研究

目的考察3种大孔树脂和聚酰胺对地锦草总黄酮、金银花叶总黄酮和杭白菊总黄酮的吸附分离性能,以探讨大孔树脂等在精制地锦草、金银花叶和杭白菊有效部位的应用。方法以总黄酮为考察指标,筛选适用的大孔树脂等型号,评价大孔树脂的吸附与解吸工艺。用分光光度法测定总黄酮含量。结果地锦草、金银花叶和杭白菊总黄酮精制的适用树脂分别为D101、DA201、DM301;DA201;D101、DA201、DM301。地锦草总黄酮对DA201和对D101、金银花叶总黄酮对DA201、杭白菊总黄酮对DA201和对D101的上样浓度分别为0.49-1.47和0.42-1.31、1.03-2.07、0.50-1.00和0.71-1.99mg/m l,动态吸附阶段的泄漏点分别为8和10、2、2和1BV,乙醇洗脱液中总黄酮含量较高的乙醇浓度分别为20%、30%、40%和20%、30%、40%;10%、20%、30%;30%、40%、50%和20%、30%、40%。温度对DA201和D101吸附地锦草总黄酮影响不大,而对DA201或D101吸附金银花叶和杭白菊总黄酮有一定影响。结论3种大孔树脂和聚酰胺对中药总黄酮有效部位的提取精制有较大差别。

杭菊花茎尖组织培养初探

为解决杭菊的品种退化问题,以大白菊、小白菊、黄菊三个品种类型的茎尖为外植体,接种在不同pH的MS培养基及不同激素配比的培养基上。结果表明,pH=5.8～6.4时外植体诱愈率在80%以上;外植体接种在不同激素配比的MS培养基上,NAA为0.2 mg/L时KT的诱愈率明显高于6-BA。诱导生根的适宜培养基是1/2 MS+NAA 0.2 mg/L。

菊花茎叶挥发油的GC-MS分析

目的:菊花茎叶具有重要的药理作用。本文对菊茎叶挥发油的化学成分进行分析,为药菊的综合利用提供指导。方法:采集怀菊、杭菊及野菊的顶部幼嫩茎叶,以水蒸气蒸馏法提取其挥发油,以GC-MS分析其化学成分。结果:在怀菊、杭菊、野菊的茎叶挥发油中分别检测出36个、48个和35个化合物,分别确认30、27、22个化合物,这些化合物多为单萜、倍半萜及其含氧衍生物。与相关文献比较发现,菊花茎叶挥发油与菊花花序挥发油有许多相同的化学成分,菊花茎叶与花序的药用功能相似,这些化合物可能是其具有相似功能的物质基础。结论:菊花茎叶挥发油具有潜在的应用价值。

怀菊花及其茎叶脂溶性成分GC-MS分析及其抗氧化活性研究

目的比较怀菊花和怀菊茎叶脂溶性成分组成及其抗氧化能力。方法采用索氏提取法获得怀菊花和怀菊茎叶的脂溶性成分,运用气相色谱-质谱联用(GC-MS)进行分析测定,结合质谱库检索技术对化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量,并采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定其抗氧化活性。结果从怀菊花和怀菊茎叶共鉴定出69种成分,各鉴定出56、37个化合物,共有成分24种,分别占其脂溶性成分含量的50.56%和81.78%,同时抗氧化结果显示,怀菊花和怀菊茎叶的脂溶性成分对DPPH自由基的半数清除率IC50分别为9.76和7.96mg/mL。结论怀菊花和怀菊茎叶的脂溶性成分及其相对百分含量存在一定的相似性和差异性,且其脂溶性成分均具有一定的抗氧化活性。本研究为怀菊花整株资源的综合有效利用提供科学依据。

NAA浓度与浸泡时间对菊花扦插生根的影响

为提高菊花扦插的成活率,本试验通过不同浓度的NAA对菊花嫩枝插穗进行不同时间浸泡处理,最终获得菊花扦插的最佳NAA浓度和浸泡时间。经方差分析和多重比较,结果表明:在进行的菊花嫩枝扦插试验中,采取的NAA浓度为750mg/L,浸泡时间为40S时处理效果最佳。

怀菊花茎叶化学成分的研究

目的研究怀菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.茎叶的化学成分。方法怀菊花茎叶50%丙酮提取物采用Toyopearl HW-40、Diaion HP-20、Sephadex LH-20、ODS、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到22个化合物,分别鉴定为1H-吲唑(1)、6,7-二羟基香豆素(2)、8E-decaene-4,6-diyn-l-O-β-D-glucopyranoside (3)、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷(4)、2′-脱氧尿嘧啶核苷(5)、尿嘧啶(6)、litchiol B (7)、8E-decacnc-4,6-diyn-l-O-β-D-glucopyranosyl-(1″→2′)-β-D-glucopyranoside (8)、lippianoside E (9)、1-核糖醇基-2,3-二酮-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲基-喹喔啉(10)、黑麦草内酯(11)、异嗪皮啶(12)、(+)-去氢催吐萝芙木醇(13)、cytidine (14)、paeoveitols B (15)、4β,6β-dihydroxy-10α-methoxy-1α,5β,7α(H)-guaiane (16)、scopoletin (17)、(2E,9Z)-pentodeca-2,9-dien-12,14-diynoic acid piperidide (18)、tetradeca-2E,4E,10E-trien-8-ynoic acid pyrrolidide (19)、7-羟基香豆素(20)、6-羟基-7,8-二氧亚甲基香豆素(21)、3-吲哚甲酸(22)。结论化合物1、7、9~22为首次从该植物中分离得到。

怀菊花茎叶中酚类化学成分研究

目的:研究怀菊花Chrysanthemum morifolium Ramat.茎叶的化学成分。方法:怀菊花茎叶的50%丙酮提取物采用Toyopearl HW-40、Diaion HP-20、Sephadex LH-20、ODS、半制备HPLC等方法进行分离纯化,根据波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从怀菊花茎叶中分离得到12个酚类成分,分别鉴定为:大豆素(1)、apigenin-6-C-α-arabinoside-8-C-β-glucoside(2)、3′-甲氧基大豆苷元(3)、猫眼草酚D(4)、高北美圣草素(5)、5,3′,4′-三羟基-6,7,5′-三甲氧基黄酮(6)、1-O-(E)-4-methoxybenzoyl-β-D-glucopyranose(7)、3-(4′-羟基-3′-甲氧基苯基)-1-丙醇(8)、3,5-二羟基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯(9)、isoaurostatin(10)、5,7-二羟基色原酮(11)、3,3′-methylene-bis(4-hydroxybenzaldehyde)(12)。结论:以上化合物均为首次从该植物中分离得到。